秦淑美邹建香

(1.江苏金湖县动物疫病预防控制中心,江苏金湖 211600; 2.江苏金湖县动物疫病预防控制中心,江苏金湖 211600)

鹅源大肠杆菌免疫鹅抗体水平的研究

秦淑美1邹建香2

(1.江苏金湖县动物疫病预防控制中心,江苏金湖 211600; 2.江苏金湖县动物疫病预防控制中心,江苏金湖 211600)

鹅的各年龄段都易感大肠杆菌病,给鹅的养殖造成很大的损失。本试验通收集不同血清型的大肠杆菌等量混合灭活后免疫鹅,通过检测鹅血清中抗体的水平及对同血清型细菌的抵抗能力,寻找预防和控制鹅大肠杆菌病方法。

鹅源大肠杆菌 ;免疫;抗体;抵抗力

大肠杆菌是动物肠道中的常在菌，10～15%的大肠杆菌属于有致病力的血清型。鹅大肠杆菌病是鹅感染致病性大肠杆菌引起的一种急性或慢性的细菌性传染病。鹅感染大肠杆菌后，由于其年龄、抵抗力以及大肠杆菌的致病力、感染途径等不同因素，会产生许多症状和病变不同的病。如急性败血症、气囊炎、肝周炎、心包炎、卵黄性腹膜炎、输卵管炎、眼炎、关节炎、肉芽肿。

本试验共搜集6株（编号为1#～6#）来自安徽、江苏地方的雏鹅、青年鹅、产蛋的母鹅的O1、O2、O6、O39等六株不同血清型大肠杆菌的菌株，将这6菌株分别用液体培养基增殖培养后，再用涂布法固体培养基培养，18h后，收集细菌，分2份，一份加入0.5%福尔马林摇匀37℃放置72h后离心浓缩后置4℃保存。另一份直接离心浓缩后置4℃保存。

1 材料和方法

1.1 材料

（1）免疫抗原：每ml含灭活细菌数各株各10亿（共60亿）的5%Al（OH）3的生理盐水，100ml。

（2）攻毒液：每ml含活细菌数各株各20亿的的生理盐水，50ml。

（3）检测抗原：每株分别配成灭活细菌数为60亿/ml作为检测抗原，30ml。

（4）18日龄的鹅18只。

1.2 方法

（1）第1d，采取18只2ml 18日龄的鹅血，分离血清，检测血清中检测抗原的抗体。检测抗体的方法为：用U型96孔微量板分别加入30μl的生理盐水，倍比稀释待检血清至第11孔，最后1孔为生理盐水对照，每份待检血清各稀释6排，每排分别加入30μl1#～6#检测抗原。震荡混匀抗原血清后，用封板膜封板，置37℃恒温箱，24h后观察结果。从出现有凝集现象的孔做为有抗体效价的依据。同时设置阳性血清、阴性血清和生理盐水对照。

（2）用免疫抗原肌肉注射12只18日龄的鹅，每只鹅1ml，其余6只作为攻毒对照和空白对照。（3）第6d，采2ml鹅血，分离血清，检测各抗原的抗体。（4）第10d，采2ml鹅血，分离血清，检测各抗原的抗体。（5）第10d下午配攻毒液，攻毒，攻毒情况如下：

是否免疫是否攻毒量(m1)0.51.00.50数量(只)6633编号1～67～1213～1516～18

（6）第11d，观察鹅群整体状况，包括死亡情况，精神状态，采食、饮水，是否拉稀等粪便的情况，运动及羽毛的整洁情况。及时做好记录并对死亡鹅进行剖解及细菌分离、鉴定。

（7）第12～15d，继续观察鹅群状况并及时做好记录。

（8）第16d，采2ml鹅血，分离血清，检测各抗原的抗体。

3 结果

（1）第1d，18日龄的鹅血清用检测抗原检测均没有1#～6#菌株的抗体：

（2）第6d，接种1周后的鹅血清检测的1#～6#菌株抗体，12只鹅明细情况如下：

1#（2，2，2，1，2，2，1，4，3，2，3，3）log2，平均抗体滴度2.3 log2；2#（2，2，4，3，2，3，1，2，2，2，2，2）log2，平均抗体滴度2.3log2；

3#（2，3，2，2，3，2，2，3，2，2，2，2），平均抗体滴度为2.3log2；

4#（2，2，1，1，2，2，2，2，2，1，2，2）log2，平均抗体滴度为1.8 log2，

5#（2，3，1，1，2，2，2，3，2，3，2，3）log2，平均抗体滴度为2.2log2；

6#（2，3，2，2，3，3，3，3，3，2，3，2）log2，平均抗体滴度为2.6log2。

（3）第10d，接种10d后，18只鹅血清检测1#～6#菌株抗体，12只鹅明细情况如下：

1#（4，3，3，4，3，4，3，4，3，3，2，3）log2，平均抗体滴度3.3 log2；2#（3，3，3，3，3，4，4，5，4，4，3，3）log2，平均抗体滴度3.5log2；

3#（3，4，3，3，5，3，4，4，3，3，3，4）log2，平均抗体滴度为3.5log2；

4#（2，3，3，3，3，3，3，3，3，3，2，4）log2，平均抗体滴度为2.9log2，5#（4，3，4，3，3，4，3，3，4，4，4，3）log2，平均抗体滴度为3.5log2；6#（3，3，4，4，4，4，3，3，4，3，4，4）log2，平均抗体滴度为3.6log2。

（4）攻毒1d后，2只攻毒对照的雏鹅死亡。剖检，各脏器呈败血症状，血液不凝结。心包积液，心包膜增厚，肝、气囊表面有渗出物。肝、脾肿大，肠道无明显病变。用麦康凯分离肝、脾、血液，可见粉红色菌落。分离得到的细菌进行生化试验和血清学试验。

（5）其余攻毒鹅精神状态沉郁，羽毛松乱，采食量明显下降，卧地不动，粪便呈白色，较稀薄，泄殖腔下方羽毛潮湿、污秽、粘连。12只免疫鹅中，攻毒1ml的6只鹅精神状态及采食量均较攻毒0.5ml的6只鹅差。空白对照的3只鹅精神状态、饮食均正常。

（6）第12～15d，攻毒的12只免疫鹅逐渐恢复正常采食量和精神状态，生长发育与空白对照一致。攻毒对照组的1只鹅，生长缓慢，较其他鹅瘦小，采食量少，喜卧，精神状态差。空白对照的3只鹅精神状态、饮食正常。

（7）第16d，免疫、攻毒的12只鹅及3只空白对照在确认发育正常后，采血淘汰。鹅血清检测1#-6#菌株抗体，明细如下：

1#（5，3，6，4，4，5，4，4，3，5，4，5）log2，平均抗体滴度4.3 log2；

2#（4，5，5，5，5，5，4，6，4，5，5，5）log2，平均抗体滴度4.8log2；

3#（5，5，5，4，5，5，5，5，3，4，5，5）log2，平均抗体滴度为4.7log2；

4#（3，4，4，4，5，5，4，4，3，4，5，5）log2，平均抗体滴度为4.2log2，5#（4，4，5，4，6，5，4，6，4，5，4，6）log2，平均抗体滴度为4.8log2；6#（5，6，4，4，4，6，4，5，5，6，4，5）log2，平均抗体滴度为4.8log2。

（8）攻毒对照的1只鹅扑杀，内脏无明显病变，用麦康凯培养基分离培养肝、脾、血，无细菌生长。

4 讨论与结论

本试验通过收集不同血清型菌株的细菌进行灭活后，给雏鹅接种。接种灭活细菌6d后，鹅的体内已产生这几种血清型细菌的免疫抗体。鹅血清中各菌株抗体水平在一定时间里，呈现上升趋势。而攻毒对照组死亡鹅体内器官和血液里分离到不同血清型的大肠杆菌，细菌在未免疫鹅体内快速繁殖，释放毒素，引起败血症，导致鹅死亡。

本试验等量混合制成的多价的抗原注射试验鹅，10d后就可保护加倍量活细菌的攻击，可有效的防止相同血清型大肠杆菌病的发生。免疫鹅攻毒试验后，这几种血清型的大肠杆菌抗体在鹅体内再次上升，在一定时间内能有效保护鹅群，抵抗相同或有交叉抗原的大肠杆菌再次感染。本试验不使用抗生素，可防止大肠杆菌耐药菌株的产生。

[1] 王永坤.水禽病诊断与防治手册[M].上海科学技术出版社，2002.