杜安玲

ESBLs、SSBL 的检测及临床应用

杜安玲

目的 了解对头孢噻肟耐药的大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、超超广谱β-内酰胺酶(SSBL)的临床分布及其对抗生素的敏感性。方法 利用双纸片协同试验及纸片法确证试验检测ESBLs及SSBL, 并用纸片扩散试验和DL-96E测定抗生素的敏感性。结果 从头孢噻肟最小抑菌浓度(MIC)≥2的大肠埃希菌检出产ESBLs为62.5%；产SSBL为9.4%。产酶菌株对头孢菌素高度耐药,对氨曲南、庆大霉素、环丙沙星及复方新诺明耐药率高, 对亚胺培南、美罗培南、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦耐药率低。结论 产生ESBLs、SSBL是大肠埃希菌对头孢菌素类抗生素耐药的重要机制, 实验室应加强检测, 为临床合理使用抗生素提供依据。

抗生素；超广谱β-内酰胺酶；超超广谱β-内酰胺酶；耐药性检测

近年来发现大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素耐药率升高的主要原因是细菌产生了ESBLs、SSBL和AmpC酶［1,2］,大肠埃希菌主要引起呼吸道、尿路系统、伤口等部位感染,是重要的医院感染常见条件病原菌。为了解大肠埃希菌产ESBLs、SSBL在本所的分布情况, 正确理解细菌的不同耐药机制, 掌握细菌耐药率的变化, 为临床合理使用抗生素提供依据。本试验从临床住院患者分离的对头孢噻肟≥2的大肠埃希菌进行检测ESBLs、SSBL酶, 现报告如下。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 选取本所2013年6月～2014年12月分离的菌株, 选择对头孢噻肟MIC≥2的大埃埃希菌160株。样本主要来自痰、中段尿、胸腹水等。细菌鉴定为珠海迪尔DL-96细菌鉴定仪。

1.2 药敏试验 抗生素药敏稀释板(DL-96E)购自珠海迪尔公司。质控菌为大肠埃希菌ATCC25922。结果按2012年临床和实验室标准协会(CLSI)标准进行判读。

1.3 超广谱β-内酰胺酶检测 双纸片协同试验及采用2012年CLSI推荐的初筛及确证试验［3］。取头孢西丁纸片抑菌环直径≤18 mm的菌株, 转种至胰酶大豆消化液中, 将生长至对数期的细菌培养物离心后, 取沉淀部分的菌细胞经反复冻融(-70℃及37℃交替水浴5次)制备酶的粗提物。按标准药敏纸片扩散法在M-H琼脂平板上涂布大肠埃希菌ATCC25922, 在平板中央放置30 mg的头孢西丁纸片, 在距纸片边沿5 mm处开使用无菌刀片向外呈放射状挖一约20 mm × 2 mm的细槽, 将酶的粗提物加入细槽中, 于35℃培养过夜。表面细菌在细槽和头孢西丁的抑菌环之间出现细菌生长为阳性, 证明所测菌产生SSBL酶。

2 结果

2.1 ESBLs、SSBL的检测结果分析 当头孢噻肟MIC=2、4、8、32时, 大肠埃希菌检出产ESBLs比率分别为3.8%(6/160)、6.3%(10/160)、40.6%(65/160)、11.9%(19/160)；当头孢噻肟MIC=2、4、8、32时, 大肠埃希菌检出产SSBL比率分别为0、0、6.9%(11/160)、2.5%(4/160)。见表1。

表1 产ESBLs、SSBL大肠埃希菌与头孢噻肟MIC检出关系(n)

2.2 产ESBLs、SSBL大肠埃希对常用抗生素的敏感性 对亚胺培南敏感(100.0%)、美罗培南敏感(100.0%)、哌拉西林/他唑巴坦敏感(93.1%)、阿米卡星敏感(91.3%)、头孢哌酮/舒巴坦敏感(78.8%)。产ESBLs大肠埃希菌对头孢菌素类、单酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类和复方新诺明抗生素高度耐药, 仅部分菌株体外试验显示对四代头孢吡肟敏感。

3 讨论

由于广谱三代、四代头孢菌素在临床的广泛应用、患者免疫力下降及基础疾病的增多, 细菌的耐药率亦不断增加, ESBLs和SSBL酶的产生则是目前认为大肠埃希菌对三代、四代头孢菌素耐药的主要机制。ESBLs大多数由TEM-1、TEM-2及SHV-1发生突变的衍生物, 能水解青霉素类、头孢菌素类及单酰胺类, 能被克拉维酸等酶抑制剂所抑制, 对头霉素及碳青霉烯类敏感, 多由质粒传递, 导致大肠埃希菌对三代头孢菌素及酶抑制剂的耐受［4］, 以CTX型ESBLs占多数［5,6］。

本试验中, 大肠埃希菌检出产ESBLs、SSBL的比率分别为62.5%和9.4%, 表明大肠埃希菌对三代头孢菌素耐药的主要原因是产生ESBLs、SSBL, 大肠埃希菌对头孢菌素类、喹诺酮类和单酰胺类抗生素高度耐药, 对庆大霉素及复方新诺明耐药率也较高, 而对头孢哌酮/舒巴坦敏感(78.8%), 阿米卡星敏感(91.3%), 哌拉西林/他唑巴坦敏感(93.1%), 尚未发现对亚胺培南、美罗培南耐药菌株。同时用头孢噻肟、头孢他啶和头孢噻肟/克拉维酸、头孢他啶/克拉维酸检测ESBLs, 能起到互补作用, 能提高ESBLs的检出率。结果显示头孢噻肟MIC值越大产ESBLs、SSBL率越高。

美国国家临床标准化委员会认为产ESBLs、SSBL者, 虽体外测定对头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟等头孢菌素敏感,但体内疗效差, 实验室应报告耐药。本试验中部分产ESBLs菌株显示对头孢他啶、头孢吡肟体外敏感, 由于体内疗效不好, 应视为耐药。因此, 实验室应积极开展对产酶菌的检测,正确区分ESBLs和SSBL不仅是细菌耐药监测的需要, 更具有分子流行病学意义, 而且对了解细菌耐药机制, 合理选择抗生素、为临床合理使用抗生素提供重要依据和一定的指导作用。

［1］ 王辉, 刘颖梅, 王清涛.北京发现同时产DHA-1质粒AmpC型XRX-M型超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌.中华微生物学和免疫学杂志, 2005, 25(5):419-422.

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［5］ 张虎, 闫中强, 曹晋桂, 等.医院感染肺炎克雷伯菌耐药趋势及b-内酰胺酶基因分型分析.中华医院感染学杂志, 2014, 24(21):5207-5209.

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10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.24.102

2015-04-23］

455000 安阳市结核病防治所