★ 陆晓晖 唐芳瑞 马志林 邵峰 黄慧莲 刘荣华＊＊＊ (1.佛山市顺德区第一人民医院 广东佛山5800;.江西中医药大学 南昌0004;.江西汇仁集团有限公司 南昌005)

穿心莲为爵床科植物穿心莲Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees的干燥地上部分。味苦，性寒。归心、肺、大肠、膀胱经。具有清热解毒、凉血、消肿之功效，主治感冒发热、咽喉肿痛、口舌生疮、顿咳劳嗽、泄泻痢疾、热淋涩痛、痈肿疮疡、蛇虫咬伤等症［1］。主要含二萜内酯类、黄酮类等活性成分［2］，其中二萜内酯类成分穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯是其主要活性成分和质量控制指标［1］。因其成分二萜内酯为脂溶性成分，溶出性能较差。刘开永等［3］研究发现，穿心莲超微粉体中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯溶出速度高于其常规粉体，但此研究仅针对超微粉体，且仅以穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯为指标。然而对其主要活性成分的溶出度、指纹图谱及浸出物等多角度探讨穿心莲粉末饮片颗粒度适宜性问题，目前尚未见报道。

中药粉末饮片包括“散剂”“煮散”“袋泡剂”等，作为传统中医药防治疾病的重要载体之一，是中药饮片的重要组成部分，具有用量少、效果佳、服用便捷、活性成分溶出快等优势。本文以穿心莲药材为研究对象，对其进行粉碎分级处理，以主要活性成分穿心莲内酯溶出度、总浸出物、HPLC指纹图谱为指标，综合考察分析，探讨不同颗粒度对穿心莲粉末饮片的质量影响，旨在为穿心莲饮片的高效临床应用提供实验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Aglient1200高效液相色谱仪，Agilent ChemStation工作站以及VWD检测器(美国Aglient公司);精密恒温水浴锅(HH-S型，中国江苏省金坛市医疗仪器厂);赛多利斯BT25S十万分之一电子天平(德国Sartorius公司);数显鼓风干燥箱(Gzx-9070MBE型，上海博迅实业有限公司医疗设备厂)。

1.2 试药 穿心莲内酯对照品(含测用，批号110797-200307，购于中国药品生物制品检定所);甲醇为色谱纯;甲醇为分析纯;水为双蒸水(自制)。

穿心莲药材购于江中中药饮片有限公司，经江西中医药大学刘荣华教授鉴定为爵床科植物穿心莲Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees的全草干燥品。

按照《中华人民共和国药典》2010年版(一部)ⅡA“药材取样法”分别取上述试验样品，除去杂质，低温缓慢烤干或弱日光下晒干，筛去碎屑。取穿心莲药材干燥品若干克，经粉碎机粉碎后，分别通过药典筛1-9号，制备成10个同一批次药材的不同颗粒度饮片样品，编号依次为0-9号，备用，见表1。

表1 样品分级表

2 穿心莲粉末饮片中主要活性成分穿心莲内酯的溶出度测定

2.1 供试品溶液的制备 根据常规饮片服用方式进行模拟，对已制备的10组穿心莲颗粒化饮片样品分别进行提取:分别精密称取2.0g，以饮片质量:蒸馏水体积=1∶15，置于50mL圆底烧瓶中，加入30mL蒸馏水，称重，以水浴进行回流提取，提取时间30min，趁热过滤，放冷，加水补足重量，取滤液1mL，以1∶1甲醇稀释定容至2mL，充分摇匀，吸取甲醇液若干，过0.45μm有机系滤头，得样品制备液，备用。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取穿心莲内酯对照品5.37mg，置于10mL容量瓶中，加甲醇超声溶解，定容，摇匀，制备成0.537mg/mL的对照品溶液，储备备用。

2.3 色谱分离条件 Aglient1200高效液相色谱仪，Agilent ChemStation工作站以及VWD检测器(美国Aglient公司);色谱柱:大连依利特-C18柱(4.6mm×200mm，5μm);流动相:乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)，梯度洗脱(0～30min，15%～30%A;30～50min，30%～75%A;50～60min，75%A);检测波长:225nm;柱温:25℃;进样量:10μL;流速:1.0mL/min。

2.4 系统适应性实验 分别精密吸取空白对照溶液、对照品溶液、供试品溶液各10μL，按“2.3项”下色谱条件依次注入高效液相色谱仪中，采用外标法测定含量，在上述条件下，得到色谱峰理论塔板数均不小于8 000，分离度均大于1.5。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 精密吸取一定量的穿心莲内酯对照品储备溶液，用甲醇稀释调配成系列浓度的对照品溶液，得序列对照品溶液中穿心莲内酯浓度(0.005 37，0.010 47，0.026 85，0.053 7，0.107 4mg/mL)，分别进样10μL，测定峰面积，以对照品溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得到穿心莲内酯的线性回归方程:Y=19122X+5.7947(r=0.9991)，线性范围:0.0537～1.074μg。

2.3.2 精密度试验 取穿心莲内酯对照品溶液，按上述色谱条件进样10μL，连续5次，记录该对照品的峰面积，计算其峰面积RSD值为0.49%，表明仪器的精密度良好。

2.3.3 稳定性试验 称取样品4号，按“2.1”方法制备供试溶液，按上述色谱条件，分别在0，2，4，8，12h进样10μL测定，得到穿心莲内酯的峰面积，计算其峰面积RSD值为1.27%，表明样品在12h内的稳定性良好。

2.3.4 重复性试验 分别取6号穿心莲颗粒化饮片样品5份，按“2.1”方法制备供试溶液，按上述色谱条件，分别进样10μL分别得出穿心莲内酯峰面积，计算其峰面积RSD值0.74%，表明样品重现性良好。

2.3.5 加样回收率试验 精密称取已知含量的穿心莲粉末饮片5号样品5份，各2.0g，分别加入与样品量之比约为1∶1的对照品，按“2.1”项下方法制备得供试品，各进样10μL，分别计算得回收率，结果见表2。由以下结果表明，穿心莲内酯的回收率符合实验要求，表明本实验方法的准确定良好。

表2 加样回收率试验结果(n=5)

2.3.6 实验结果 根据上述方法测定了10种穿心莲粉末饮片中穿心莲内酯的溶出度，结果见表3。

表3 穿心莲粉末饮片穿心莲内酯溶出度

3 穿心莲颗粒化饮片浸出物测定

分别精密称定穿心莲粉末化饮片组，各10.0g，每组平行测定3次，以饮片质量:蒸馏水体积=1∶15，置于500mL圆底烧瓶中，加入150mL蒸馏水，以水浴回流提取，时间30min，趁热过滤，放冷，水浴蒸发，减压干燥，至恒重，采用减重法进行称定。结果见表4。

表4 穿心莲粉末饮片热水提取浸膏得率(n=3)

4 穿心莲颗粒化饮片HPLC指纹图谱测定与分析

4.1 样品前处理 分别精密称取穿心莲粉末饮片各组样品，各1.0g，以饮片质量:蒸馏水体积=1∶30，按“2.1”项下制备供试溶液的方法处理，得样品制备液，备用。

4.2 色谱条件 按照“2.3项”下的色谱条件测定10组穿心莲粉末饮片样品的HPLC指纹图谱，并进行分析。

4.3 实验结果 按上述色谱分析法测定10组穿心莲粉末饮片的HPLC色谱指纹图谱，见图1。

图1 穿心莲粉末饮片HPLC色谱指纹图谱

图2 穿心莲粉末饮片对照指纹图谱共有峰的标定

4.3.1 共有峰的标定 利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”软件，以穿心莲原饮片(0号)为参照峰生成穿心莲粉末饮片共有模式的对照指纹图谱，如图2。以5号峰为参照峰(S)，其保留时间为1，各共有峰的相对保留时间、相对峰面积见表5、6所示，结果表明RSD值小于3%，符合指纹图谱的要求。

4.3.2 共有峰相对峰面积

4.3.3 非共有峰面积 通过对10组穿心莲粉末饮片样品的HPLC指纹图谱结果测定，统计各组粉末饮片非共有峰面积占总峰面积比值，其共有峰面积百分比在15.32%～20.90%，非共有峰面积的百分比在79.10%～84.68%，结果见表7。

表5 10组穿心莲粉末饮片共有峰相对保留时间

表6 10组穿心莲饮片共有峰相对峰面积

表7 10组穿心莲粉末饮片指纹图峰面积表

5 小结

穿心莲粉末饮片粉碎度对穿心莲内酯溶出呈现随着粉碎度的增加而增长的趋势。原因可能是穿心莲饮片属草本植物，淀粉含量较低，水煎煮不易糊化，有利于有效成分物质的溶出，但当粉碎度达到一定程度后(120目以上)，穿心莲内酯基本能完全溶出。穿心莲粉末饮片浸出物同样随颗粒度减小而增加的趋势，但在80目以上时浸膏得率基本达到稳定值。指纹图谱分析表明，随着颗粒度的越细，穿心莲指纹图谱总峰面积出现先增加后降低的趋势，并在80～120目时达到最大值，大于200目时，总峰面积降低更明显。综合分析以上结果，我们拟定120～150目为穿心莲粉末饮片的最佳颗粒度，此时其粉末饮片质量最佳。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典﹒一部［S］.北京:化学工业出版社，2010:251-252.

［2］蒋珍藕.穿心莲属植物化学成分研究进展［J］.中成药，2011，33(8):1 382-1 388.

［3］刘开永，张敏，李道敏，等.微粉化穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的溶出特性［J］.中成药，2010，32(4):673-675.