戴光文 江精华 韦邦伟 谢丽华 刘金表

（梧州市动物疫病预防控制中心，广西 梧州 543002）

禽流感是A型流感病毒引起的禽类全身性或呼吸器官性传染病，不仅给养殖业造成了巨大的损失,而且随着病毒变异,人类的生命安全也受到了严重威胁。鉴于该病毒污染源面广、病毒血清型较多、变异性极强、低致病性毒株能在短期内变成高致病性毒株的特点，目前我国防控禽流感实行的是春秋两防集中免疫及规模化禽场按日龄程序化免疫方式，能有效控制禽流感区域化流行，但是我国幅员辽阔，地理气候差异较大，尤其在寒冷季节禽流感还是时有发生，严重威胁家禽养殖业及兽医公共卫生安全，为此本研究旨在探索梧州市寒湿冬季抗体消长规律，以此为依据制订寒冷季节禽流感防控方案。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗

重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型，Re-6株）均为政府强制免疫提供疫苗，生产厂家为广东永顺，免疫剂量严格按照疫苗使用说明书使用。

1.1.2 检测试剂

禽流感病毒H5亚型（Re-6株）血凝抑制试验抗原及禽流感病毒H5亚型（Re-6株）阳性血清均购自哈尔滨维科生物技术开发公司，生产批号为2013003。

1.1.3 试验用动物：在本市4个县选择4个鸡场及1个活禽市场的鸡作为试验对象，将每个鸡场最近一次免疫禽流感疫苗时间相同或相近的2群鸡作为本次试验鸡群，分别命名A群鸡和B群鸡，每群鸡数量不得少于500羽。

1.1.4 主要仪器设备：湘仪离心机、德国Brand移液枪。

1.2 方法

1.2.1 试验设计

1.2.1.1第一次采集血清样品检测抗体

第一次采血时间为农历“大雪” 即2014年12月7日，对A群鸡和B群鸡分别采集血清，每份血清不得少于0.5ml,血清要求清亮、无溶血、无腐败，同时填写采样单，详细记录免疫信息及采血时间，采血后立即对A群鸡加强免疫高致病性禽流感灭活苗1次。

1.2.1.2第二次采集血清样品检测抗体

第二次采血时间为农历“大寒”日即2015年1月20日，对A群鸡和B群鸡分别采集血清，每份血清不得少于0.5ml,血清要求清亮、无溶血、无腐败，填写采样单，详细记录免疫信息及采血时间。

1.2.2 检测方法

采用高致病性禽流感诊断技术血凝（HA）和血凝抑制试验（HI）（GB/T18936-2003），抗体滴度1表示1log2，2表示2log2，以此类推。

1.2.3 抗体合格率判定方法

按照农业部行业标准NY/T769-2004，HI抗体达≥4log2为个体免疫抗体合格，抗体合格率≥70%为群体免疫合格率。

1.2.4 数据处理

HI效价采用平均值±标准差来表示，群体抗体合格情况以群体合格抗体的百分数，即群体抗体合格率来表示。

2 结果与分析

2.1 H5抗体合格率变化情况

表1 规模场试验前后H5抗体合格率变化情况

?

表2 活禽市场试验前后H5抗体合格率变化情况

2.2 H5抗体滴度效价及群体均匀度变化情况

表3 规模试验场H5抗体滴度变化情况

表4 活禽市场H5抗体滴度变化情况

从表1及表2中显示抗体合格率变化可知，规模场试验组从试验前的91.07%升高至试验后98.55%，活禽市场从试验前的55%升高至试验后82.14%，而对照组抗体合格率没有明显变化，这表明在大雪时节加强免疫能显著提高家禽H5抗体合格率，使家禽在冬季最冷的大寒时节的抗体合格率仍然保持在80%以上。

从表3及表4中显示抗体滴度变化可知，规模场试验组从试验前的6.61±2.33升高至试验后7.93±1.91，活禽市场从试验前的3.25±1.78升高至试验后5.25±3.26，而对照组的规模场试验组从试验前的6.41±2.54降低至试验后5.78±2.10，这表明在大雪时节加强免疫能显著提高家禽H5抗体滴度及均匀度，有助于提高机体抵御病毒入侵能力。

3 讨论

3.1 关于高致病性禽流感免疫效果的研究较多[1.2.3]，主要以春秋两防免疫及按日龄免疫研究报道，但以探索特定气候环境条件下禽流感抗体消长规律报道甚少，本研究证实寒湿冬季H5N1禽流感灭活疫苗免疫抗体滴度随着时间推移呈逐渐下降趋势，而且抗体离散度扩大，加强免疫可以显著提高群体抗体合格率、抗体滴度及均匀度，实践证明这有助于家禽安全渡过湿冷的冬季，确保家禽安全渡过冬季。

3.2 权威研究证明抗体滴度低于6log2的禽群不足以抵抗野毒的侵袭，本研究显示在大雪时节加强免疫的规模禽场在大雪及大寒时节的群体滴度均在6log2以上，而未免疫对照组禽群及活禽市场家禽的群体滴度低于6log2，这说明在大雪时节加强免疫有助于提高禽群抵抗力，但未加强免疫规模禽场及活禽市场受病毒入侵风险仍然较高，这提示冬季活禽市场是禽流感发生高风险区域。

3.3 本研究经临床实践证明，在寒冷的冬季应将群体抗体合格率大于70%和群体抗体滴度大于6log2两个指标作为评估免疫效果评估较为适宜。

[1]刘佩红等.H5N1亚型禽流感灭活疫苗免疫鸟后抗体消长规律及免疫程序的研究[J]，动物医学进展，2007，28（增）：1～4.

[2]张评浒、任涛、唐应华等.免疫程序与母源抗体对H5禽流感疫苗免疫鸭和鹅HI抗体水平的影响[J]，中国兽医科技，2005，35（8）：638～642.

[3]李静、张力、张鲁安等，鸡禽流感母源抗体和免疫抗体消长情况的观察[J]，养禽与禽病防治，2005，（2）：8～9.