卢方军

(黑龙江省绥滨县畜牧兽医局,黑龙江绥滨 156200)

牛病毒性腹泻黏膜病的流行、诊断和防控

卢方军

(黑龙江省绥滨县畜牧兽医局,黑龙江绥滨 156200)

牛病毒性腹泻黏膜病简称牛病毒性腹泻或牛黏膜病,是由牛病毒性腹泻-黏膜病病毒引起的一种世界广为传播的牛传染病。本病以发热、厌食、鼻漏、咳嗽、腹泻、白细胞数减少以及消化道黏膜发炎、糜烂和淋巴组织显著损害为特征,尤以腹泻为其主要临诊表现。

牛病毒性腹泻;诊断;防控

1 流行特点

本病可感染黄牛、水牛、牦牛、山羊、猪、鹿等动物，家兔可实验感染。传染源主要是病畜和隐性带毒牛。病畜可发生持久性的病毒血症，其血、脾、骨髓、肠淋巴结等组织以及呼吸道和眼等的分泌物、乳汁、粪便等排泄物均含有病毒，健康牛与病牛或带毒牛发生直接、间接接触，经口、消化道、呼吸道感染以及通过胎盘垂直感染、自然交配和人工授精等途径而传染。各种年龄都有易感染性，但以2岁以下牛只最敏感，特别是6个月以下的小牛最易发病。猪有自然感染本病的报道，但不出现临诊症状。本病常年均可发生，冬季与早春多见，以6～18月龄的犊牛发病率较多。该病在封闭式牛群中可呈暴发式发病，犊牛急性病例可达25%，病死率为90～100%。在疫区只见散发病例，大多数呈隐性感染。

2 临诊症状

本病的潜伏期7～10d。本病在牛群中仅见少数轻型病例，多数呈隐性感染，有时也可能出现全群突然发病。6个月至2岁的牛只易发生急性病例。急性病牛主要表现为体温升高到40.5～41℃，精神委顿，食欲减退或废绝，腹泻，流涎，咳嗽，有浆液性或黏液性鼻漏，眼结膜潮流泪，呼吸困难，口腔黏膜充血，唇黏膜、齿龈、颊及舌的两侧出现溃疡。重症病例呈现水样腹泻，粪便恶臭，带有肠黏膜或黏性血液，严重脱水衰竭而死。慢性病牛临诊症状不明显，主要表现为生长迟缓、消瘦，出现持续或间歇性下病，病程可长达数月，最后因生产性能降低而淘汰。

3 病理变化

尸体消瘦，重度失水，眼窝下陷。肠黏膜出血、水肿、溃疡和坏死性病变。淋巴结肿大，切口外翻，有浑浊液体流出。特征性损害为食道黏膜糜烂，呈大小不等形状与直线排列。瘤胃黏膜偶见出血和糜烂。剖检可见鼻镜、齿龈、舌、软腭及硬腭、咽等黏膜形成小的、形状不规则的浅烂斑。鼻腔内有淡黄色胶胨样渗出物，气管内有大量脓性分泌物，肺出血、水肿，切面有干酪样物；皱胃炎性水肿和糜烂，肠壁水肿增厚，小肠呈急性卡他性炎症，空肠和回肠有点状或斑状出血，黏膜呈片状脱落；盲肠和大结肠末端有出血条纹，肠淋巴结水肿。

4 实验室检验

牛病毒性腹泻黏膜病检疫检验方法有直接免疫荧光抗体检查、微量血清中和试验。

4.1 材料准备

病毒：本试验使用的病毒株为Oregon C24，按常规方法在犊牛肾、睾丸（初代或次代）或鼻甲骨细胞上繁殖，待75%细胞出现典型病变时收毒，冻融2次，测定毒价，分装于小瓶内低温保存。细胞：按牛原代肾细胞、睾丸细胞、鼻甲骨细胞或MDBK细胞。细胞培养液：为细胞加入10%犊牛血清；细胞维持液：为细胞加入2～3%犊牛血清；血清稀释液：为细胞中不加血清。溶液pH为7.0～7.2，加入青霉素和链霉素，使终浓度为100国际单位（μg）/ml。乙二胺四乙酸钠-胰酶消化液：按9：1的比例加入0.02%乙二胺四乙酸钠和0.25%胰酶。24孔平底带盖塑料培养板：新的密封的培养板可直接使用；重复使用的培养板需经重铬酸钾清洁液浸泡24h，再依次用自来水和双蒸水冲洗干净，烘干，紫外线照射1h备用。加样器：50～200μl调节加样器。

4.2 实验方法

（1）定量测定：被检血清、阳性对照血清及阴性对照血清在试验前应分别于56℃灭活30min。在微量细胞培养板上加入稀释液50微升/孔。取被检血清分别加入一至四排第一孔（每份血清纵向作四排，微量板可横向或纵向使用）。用多头加样器（调至50μl）从每排第一孔横向连续倍比稀释到最后一孔，弃去最后一孔中溶液50μl。

用稀释液将病毒稀释成每1ml含100个半数感染量的工作液。用多头加样器于第二至四排各孔中加病毒工作液50μl，第一排孔中加50微升稀释液作为血清对照，加盖于置37℃、5%二氧化碳中感作60min。将生长良好的单层细胞用乙二胺四乙酸钠-胰酶消化液消化分散后用培养液配制含40万/ml的细胞悬液。每孔加细胞悬液100μl，加盖于置37℃、5%二氧化碳中培养6d。从第四天开始观察结果，于第六天最终判定。

（2）定性测定：被检血清只做1：5稀释，其他操作同上。

4.3 结果判定

当细胞对照正常，阴性血清孔对照各孔细胞出现细胞病变，阳性血清对照孔不出现细胞病变，病毒回归的毒价与原测定的毒价相关必须在±0.5 log10以内，本试验有效。定量试验：每份血清同一稀释度的4个孔中有2个以上孔完全被保护而不出现细胞病变时，该稀释度即为该血清的抗体滴度。定性试验：被检血清在1：5稀释度时有2孔以上的细胞完全被保护，该血清即为阳性。

4.4 注意事项

第一，被检血清、阳性对照血清及阴性对照血清在实验前应分别于56℃灭能30min。第二，如需测定被检血清的抗体效价，只需先将待检血清作4倍倍比稀释后，再按本法进行测定。

5 防控

本病目前尚无有效疗法，主要是对症治疗，控制继发病。严禁从疫区购进牛和羊，如引进种牛、种羊时须进行血清学检查，防止引进带毒牛、羊，加强检疫。发病牛要隔离治疗或急宰，防止疫情发展。疫区除做好消毒、隔离以外，可定期进行预防注射，目前应用弱毒疫苗和灭活苗来预防和控制本病。疫苗免疫：对威胁较大的牛群应每隔3～5年接种1次。育成母牛和种公牛于配种前3周再接种1次，多数牛可获得终生免疫。弱毒苗能引起流产和胎儿畸形，妊娠母牛应禁用。

[1] 李健明，冯海峰，时坤，等.牛病毒性腹泻-黏膜病的流行现状和

诊断技术研究进展[J].经济动物学报，2014，（2）：111-115. [2] 周洛.牛病毒性腹泻流行现状及诊断防控[J].中国动物保健，

2015，（7）：46-48.

卢方军（1971—），男，兽医师，本科。