卢方军

(黑龙江省绥滨县畜牧兽医局,黑龙江绥滨 156200)

牛流行热的流行、诊断和防制

卢方军

(黑龙江省绥滨县畜牧兽医局,黑龙江绥滨 156200)

牛流行热又称三月热、暂时热,是由于牛流行热病毒引起的一种急性、热性传染病。其特征为突发高热,流泪,有泡沫状流涎,鼻漏,呼吸促迫,后躯僵硬,跛行及明显季节性。主要引起牛发病,尤以奶牛最易感染。

牛流行热;诊断;防制

1 流行病学

本病主要侵害牛，各种年龄、性别、品种的牛均可感染发病，以3～5岁的壮龄乳牛、黄牛易感性为最高，怀孕牛和高产乳牛感染后症状为最重，死亡率也较高。本病的发生有明显的季节性，主要在蚊蝇多的季节流行，北方于8～10月份，南方可提前，多在潮湿季节流行。病牛是本病的主要传染源。吸血昆虫（蚊、蝇）叮咬病牛后再叮咬易感的健康牛而传播。本病传染力强，传播迅速，短期内可使很多牛发病，呈大流行性或流行性，有明显的周期性，约3～5年流行一次。

2 活体检疫

本病的潜伏期为3～7d，多突然发病，体温升高达40～42℃，持续2～3d。病牛肌肉震颤，皮温不整，精神高度委顿。流泪，畏光，眼结膜充血，眼睑水肿。鼻镜干热，呼吸促迫，病牛发出哼哼声。食欲减退或废绝，反刍停止。多数发病牛鼻流炎性分泌物，成线状，后变为黏性鼻涕，流涎，口角有泡沫。乳牛的产奶量急剧下降，有的停止。病牛喜卧地上，不愿行动，强迫行动则跛行，步态不稳，甚至倒地不能起立。多数病牛呈良性经过，病程3～4d恢复，病死率为1～3%，若继发感染，因跛行或瘫痪而淘汰。

3 肉尸检疫

本病没有特征性的病理变化。急性死亡的病例，可见明显的肺间质气肿，有的肺充血与肺水肿。肺气肿病例肺高度膨胀，间质增宽，内有气泡，压迫肺呈捻发音。肺水肿病例胸腔积有多量暗红色液体，气管和胸腔内积有大量液体，淋巴结充血、肿胀和出血。

4 实验室检验

牛流行热检疫检验方法有病原学检查和血清学检查。病原学检查主要是将可疑病牛的血样静脉接种健康牛，或脑内接种乳鼠盲传，或在BHK21（或Vero）细胞上传代，以接种动物是否发病或细胞是否出现细胞病变来确诊。目前比较实用的血清学方法是微量血清中和试验。

4.1 材料准备

牛流行热病毒株：用已适应BHK21（或Vero）细胞的毒株（哈尔滨兽医研究所保存）。犊牛血清：经检测无牛流行热抗体，使用前经56℃、30min灭活。被检牛血清：试验前经56℃、30min灭活。试验细胞：BHK21或Vero细胞。汉克氏平衡液、乳汉液、胰酶、乙二胺四乙酸二钠细胞分散液：按常规方法配制。抗菌素溶液：选用青霉素和链霉素，用灭菌的双蒸馏水配制成1万单位（μg/ml），分装成小瓶，冻结保存。细胞培养液；70% 199液加入10%犊牛血清和20%乳汉液、1%抗菌素溶液，用8.8%碳酸氢钠调pH7.2～7.5。细胞维持液：基本与细胞培养液相同，犊牛血清为3%。24孔或96孔平底带盖塑料培养板。

4.2 实验方法

（1）抗原制备：将培养36～48h生长良好的BHK21细胞，弃去培养液，加入维持液，按维持液量的10%加入10－2稀释的病毒，37℃吸附1h。倒去溶液，用汉克氏液洗涤后，加维持液，37℃培养，当细胞病变出现达75%以上时，收获培养物，-20℃保存。病毒抗原毒价测定：收获的培养物冻融3次，以2000转/min离心10min，吸取上清液，在微量板上用BHK21细胞测定其毒价。按改良的Reed-Meunch方法计算TCID50（抗原毒价应在104以上）。测定合格的抗原分装成小瓶置－40℃中保存备用。保存期超过3个月应重新测定毒价。使用时将病毒配制成每50μl含100个组织细胞培养半数感染量的病毒液。

（2）中和试验：A.被检血清稀释。取被检血清70μl，加入210μl维持液，充分混合（此时血清稀释度为1：4）。B.将稀释的被检血清滴加于微量板上，每份血清加5个孔，每孔50μl；抗原（病毒浓度为100个组织细胞培养半数感染量/50μl）分别加入前4个孔，余下的1孔补加维持液50μl为血清对照。C.设置对照。阳性、阴性血清对照孔：与被检血清相同方法操作。正常细胞对照孔：不加血清和病毒抗原，补加100μl维持液。工作病毒对照孔：不加血清，补加维持液50μl。病毒回归试验：将病毒做含毒量为1000个、100个、10个和1个组织细胞培养半数感染量四个稀释度稀释，每个稀释度滴加4个孔，每孔50μl，补加50μl维持液。D.将试验板置微型振荡器上混合，37℃中和lh，加入每毫升含1.5×105～2×105个细胞的细胞悬液，每孔100μl，加盖后置5%二氧化碳培养箱，37℃培养，96h判定结果。

4.3 结果判定

当被检血清对照、正常细胞对照正常，阴性血清对照各孔细胞都出现细胞病变，阳性血清对照各孔细胞全部被保护，病毒回归试验成立，工作病毒量符合要求，本试验有效。阳性反应：被检血清4孔中，有2孔或2孔以上细胞没有出现细胞病变。阴性反应：被检血清4孔或1孔细胞出现细胞病变。

5 防制措施

自然病例恢复后有一定时期的免疫力。可试用牛流行热疫苗接种免疫，但效果不令人满意。要早发现，早封锁，早隔离，早治疗。本病尚无特效药物，病初可根据病情使用退热药及强心药，并用抗菌素药防止继发感染。要加强饲养管理，防止牛舍潮湿，防止过劳，夏季防暑，保持牛体清洁卫生，消灭蚊蝇等吸血昆虫等，牛舍、运动场及用具用3～6%氢氧化钠热溶液严格消毒。有病变的内脏作工业用或销毁，无病变的内脏经高温处理后出场。

[1] 张妙仙.奶牛流行热的诊断和防制[J].浙江畜牧兽医，2004，（4）：38-39.

[2] 侯太乾.浅谈牛流行热病的诊治及体会[J].中国畜牧兽医文摘，2012，（9）：134-135.

卢方军（1971—），男，兽医师，本科。