黄秀珍，姚心韵，陈文学，吕赛平

(1、江西省肿瘤医院检验科，江西 南昌330029；2、四川大学华西口腔医学院2010级，四川 成都610041)

宫颈癌是严重威胁女性生命健康的恶性肿瘤之一，其发病率仅次于乳腺癌，在全球妇女癌症死亡率中居第二位，在一些发展中国家甚至居首位。CIN是一组与浸润性宫颈癌密切相关的癌前病变，在其发病5年内，约40%逆转为正常，10%发展为原位癌，通常从发现高度病变到发展成浸润癌大约需要10年的时间[1]。近年来，宫颈癌及癌前病变发生率在全球范围内呈逐年上升且年轻化的趋势[2]，流行病学研究已证实HPV感染是CIN和宫颈癌的主要病因[3-5]，因此HPV检测已成为宫颈癌筛查中必不可少的内容。本研究即通过回顾分析我院收治的924例妇女的HPV检查结果及其宫颈活检病理检查结果，旨在探讨不同基因型HPV感染与宫颈病变的相关性，现报告如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2010年1月-2014年7月期间在我院妇瘤科就诊的924例妇女作为研究对象，所有患者均接受HPV-DNA分型以及宫颈病理切片检查。根据组织病理学诊断，按病变程度分为6组：宫颈鳞癌组287例；CINⅢ组78例；CINⅡ组61例；CINⅠ组153例；宫颈湿疣组40例；正常或炎症组305例。

1.2 仪器与试剂 HPV-DNA提取试剂盒，DA7600 PCR扩增仪，Hybrimax医用核酸分子快速杂交仪，人乳头状瘤病毒基因分型检测试剂盒(由潮州凯普生物化学有限公司提供)。

1.3 标本采集和处理 采集生殖道拭子标本 由医生以窥阴器或阴道张开器暴露宫颈，将宫颈刷子置于宫颈口，轻轻搓动宫颈刷使其顺时针旋转5圈，取出宫颈刷，沿刷柄折痕处将宫颈刷柄折断，将其放入标有病人编号的取样管中，取样管内已加有3m l专用细胞保存液，拧紧瓶盖。样本采集后立即送检。4℃保存不超过24h，-200C保存不超过3个月之内进行检测。标本运送时建议采用低温保存运送。

1.4 检测方法 采用凯普Hybrimax公司提供的人乳头状瘤病毒(HPV)分型检测试剂盒(PCR+膜杂交法)，可同时对21种HPV基因型进行病毒分型检测。 其中 15 种高危基因型为 HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68，6 种低危基因型为 HPV6、11、42、43、44、CP8304。实验步骤：(1)分泌物中细胞DNA分离提取；(2)聚合酶链反应(PCR)扩增；(3)核酸分子快速导流杂交；(4)判断结果:肉眼观察检测结果，阳性点呈现蓝紫色圆点，根据芯片上HPV分型分布相应的点判断HPV亚型，多点阳性即为多重感染。每一张芯片有PCR反应质控点和杂交显色质控点各一个。本检测对两型或两型以上者多重感染型别的阳性率重复计算。

1.5 统计学方法 采用SPSS 11.5软件进行统计数据学分析，率的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同病变患者HPV阳性率及感染基因型分布924例患者中有503例感染HPV病毒，阳性率54.4%。所有标本共检测到19种HPV基因型，未检测到HPV43、44型。不同病变组HPV阳性率差异有统计学意义(P＜0.05)，宫颈鳞癌组与宫颈湿疣组HPV阳性率显著高于CINⅢ组 (P＜0.05)，CINⅢ组HPV阳性率显著高于CINⅡ组与CINⅠ组 (P＜0.05)，CINⅡ组与CINⅠ组HPV阳性率显著高于正常或炎症组 (P＜0.05)，宫颈鳞癌组与宫颈湿疣组HPV阳性率无显著性差异 (P＞0.05)，CINⅡ组与CINⅠ组HPV阳性率无显著性差异(P＞0.05)，见表1。由表1可知，宫颈鳞癌组较常见型别为HPV16、58、52、18，CINⅢ组较常见型别为 HP16、33、18，CINⅡ组与CINⅠ组的较常见型别均为HPV16、58、52，湿疣组较常见型别为 HPV6、11、16。

2.2 不同宫颈病变与HPV多重感染的关系 HPV阳性患者共503例，多重感染102例，多重感染率为20.3%，其中二重感染89例，三重感染12例，四重感染1例，见表2。不同病变组HPV多重感染率差异有统计学意义 (P＜0.05)，宫颈鳞癌组、CINⅢ组、CINⅡ组、CINⅠ组HPV多重感染率显著高于湿疣组与正常或炎症组(P＜0.05)，宫颈鳞癌组、CINⅢ组、CINⅡ组、CINⅠ组HPV多重感染率无显著性差异(P＞0.05)，湿疣组与正常或炎症组HPV多重感染率无显著性差异(P＞0.05)。

3 讨论

大量流行病学和分子生物学研究资料表明，HPV低危型感染与宫颈湿疣密切相关，而长期持续HPV高危型感染与子宫颈癌及癌前病变密切相关，高危型HPV感染是宫颈癌发生的首要因素且为始动因素[6]。在本研究中，宫颈鳞癌组、宫颈湿疣组HPV阳性率最高，CINⅢ组次之，CINⅡ组与CINⅠ组再次之，正常或炎症组最低，这说明随着宫颈病变的加重，HPV阳性率呈明显递增的趋势，HPV感染与宫颈良性或恶性病变均有着十分密切的关系。通过对6组患者基因型别的进一步分析，我们发现宫颈鳞癌组较常见型别为HPV16、58、52、18，CINⅢ组较常见型别为 HP16、33、18，CINⅡ组与CINⅠ组的较常见型别均为HPV16、58、52，湿疣组较常见型别为HPV6、11、16，这与文献报道大致相近[5，7]。众所周知，低危型HPV包括HPV6、11、42、43、44、CP8304 等 ， 高 危 基 因 型 包 括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68等。由本研究结果可知，宫颈鳞癌组患者均未检测到上述6种低危型HPV，这充分证实了高危型HPV感染是宫颈癌发生重要危险因素的观点。由此可见，我们在临床工作中应加强对细胞学检查正常及不典型增生人群的HPV的筛查与基因分型研究，尤其对持续高危型HPV感染者进行严密随防和监控，警惕宫颈细胞癌变倾向，对宫颈癌的早期发现、早期诊断、早期治疗具有重要的价值。

表1 不同病变患者HPV感染率及感染基因型分布

表2 不同宫颈病变与HPV多重感染的关系

目前研究有关HPV多重感染是否会促进宫颈癌的发生有着不同的观点，有学者认为多重感染并不增加宫颈癌的发生率，但也有学者认为HPV多重感染对宫颈病变及宫颈癌的发生发展起促进作用[8-12]。本研究统计学分析显示，宫颈鳞癌组、CINⅢ组、CINⅡ组、CINⅠ组HPV多重感染率分别为17.1%、19.2%、18.0%、14.4%，湿疣组、正常或炎症组的HPV多重感染率分别为2.5%、1.3%，宫颈鳞癌组多重感染率虽然低于CINⅢ组和CINⅡ组，但宫颈鳞癌组、CINⅢ组、CINⅡ组、CINⅠ组多重感染率显著高于湿疣组与正常或炎症组(P＜0.05)，差异有显著。这在一定程度上说明HPV多重感染可能与宫颈癌及癌前病变有着更为密切的联系，可能是由于HPV感染型别越多，宫颈局部的炎症反应更为严重所致。HPV多重感染对宫颈病变及宫颈癌的发生发展起促进作用，结果与Fife等[13]的研究结果一致。持续高危型HPV感染是CIN进一步进展为宫颈癌的必经过程，从感染高危HPV开始至发展为宫颈癌的时间间隔约为15年，故宫颈癌是可预防的特殊癌症，HPV感染是可能的患病信号[14]。Ho等[15]学者认为，HPV多重感染者出现持续感染的危险性更大，而HPV的持续感染是宫颈病变发生的原因，多重感染易导致宫颈病变。

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