沈红元，陈玉蓉，沈建林△

(1.湖北职业技术学院医学院，湖北孝感 432000；2.湖北省汉川市血吸虫病诊疗专科医院检验科 432300)



·论 著·

冠心病患者内皮细胞膜微粒及Th细胞因子水平变化及意义

沈红元1，陈玉蓉2，沈建林1△

(1.湖北职业技术学院医学院，湖北孝感 432000；2.湖北省汉川市血吸虫病诊疗专科医院检验科 432300)

目的 探讨冠心病患者外周血内皮细胞膜微粒(EMPs)、辅助性T细胞(Th)细胞因子水平变化及临床意义。方法 选择2011年7月至2013年7月孝感市中心医院收治的68例冠心病患者作为研究对象，按照世界卫生组织分类标准分为稳定型心绞痛(SA)21例，不稳定心绞痛(UA)22例，急性心肌梗死(AMI)25例；另选择同期在孝感市中心医院体检的健康人群30例作为健康对照组。比较4组受检者外周血EMPs、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-10水平。结果 4组受检者中，SA组、UA组、AMI组外周血EMPs、IFN-γ、IL-2水平均显著高于健康对照组，其中UA组和AMI组水平又高于SA组，差异均有统计学意义(P<0.05)；AMI组外周血EMPs显著高于UA组,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析结果显示，EMPs与IFN-γ、IL-2呈正相关关系(P<0.05)，而与IL-4、IL-10无明显相关性(P>0.05)。结论 冠心病患者外周血EMPs水平能够反映患者内皮功能、斑块炎性反应程度及斑块稳定性；导致EMPs升高的原因可能与Th1/Th2细胞因子分泌异常有关。

冠心病； 内皮细胞膜微粒； 辅助性T细胞； 动脉硬化

随着对冠状动脉研究的深入，研究者发现动脉粥样硬化(AS)是发生于动脉血管壁上、由多种免疫细胞参与的一种炎性反应[1]。免疫细胞对AS早期斑块的形成有重要作用，而急性冠状动脉综合征(ACS)就是斑块在炎性环境中被激活所引起的，因此AS是一种免疫和炎性疾病。最近国外研究证实，辅助性T细胞(Th)失衡与AS斑块形成和ACS的发病过程有密切关系[2]。内皮细胞膜微粒(EMPs)是由内皮细胞在各种刺激下释放出的囊泡，因此外周血EMPs水平可反映冠心病患者的内皮功能，但是EMPs是否可以反映冠心病患者的炎性反应程度及在冠心病发病中的作用目前仍不清楚[3]。本文对冠心病患者外周血EMPs、Th水平进行检测，分析其在冠心病发病中的作用，为临床治疗方案的制订提供一些参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2011年7月至2013年7月孝感市中心医院收治的68例冠心病患者作为研究对象，男49例，女19例；年龄48～74岁，平均(61.3±7.5)岁。按照世界卫生组织分类标准：稳定型心绞痛(SA)21例，不稳定心绞痛(UA)22例，急性心肌梗死(AMI)25例。SA组男16例，女5例，年龄45～74岁，平均(61.7±5.5)岁；患者临床表现为心前区压榨性疼痛或不适，冠状动脉造影显示最少有1支血管直径狭窄大于或等于50%。UA组男15例，女7例，年龄47～71岁，平均(60.9±8.1)岁；患者临床表现为静息性心绞痛或劳累后疼痛，心电图显示有一过性T波倒置或ST段压低。AMI组男18例，女7例，年龄48～73岁，平均(62.1±9.5)岁；患者临床表现为24 h内心肌缺血持续20 min以上，肌酸激酶(CK)和肌钙蛋白水平高于正常值的2倍以上。另选择同期在孝感市中心医院体检的健康人群30例作为健康对照组，男23例，女7例，年龄40～83岁，平均(62.8±7.8)岁。

1.2 排除标准[4](1)陈旧性心肌梗死(病程6个月以上)；(2)严重肝、肾等器官功能不全者或恶性肿瘤患者；(3)伴有自身免疫性疾病或内分泌系统疾病；(4)风湿性心脏病、心内膜炎等其他心脏疾病；(5)近1个月内服用免疫抑制剂或抗感染药物者。

1.3 方法

1.3.1 EMPs检测 取4组受检者静脉血3 mL，离心获得血浆[5]；取富含血小板的血浆100 μL，加入0.5 μg荧光标记抗体(PE-anti-CD144抗体，上海瑞齐生物科技有限公司产品)；37 ℃孵育30 min，再加入1 mL磷酸盐缓冲液悬液，采用BD FACSCalibur流式细胞仪进行检测。每组检测重复3次，定义EMPs为小于1.0 μm以下的CD144+颗粒。

1.3.2 Th细胞因子检测 取4组受检者静脉血5 mL，高速离心分离血清，于-80 ℃冰箱保存待检；样本采集后用酶联免疫吸附试验(ELISA)对血清γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-10水平进行检测，相关试剂盒由深圳市炬英生物科技有限公司提供，操作按照说明书进行。

2 结 果

2.1 4组受检者临床资料对比 见表1。4组受检者年龄分布、性别构成、血脂、血糖未见显著差异；与SA组及健康对照组相比，UA组和AMI组C反应蛋白(CRP)显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)；AMI组CK水平显著高于其他3组，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2 4组受检者外周血EMPs、Th细胞因子水平比较 见表2。4组受检者中，SA组、UA组、AMI组外周血EMPs、IFN-γ、IL-2水平均显著高于健康对照组，其中UA组和AMI组水平又高于SA组,差异有统计学意义(P<0.05)；AMI组外周血EMPs显著高于UA组，差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 4组受检者患者临床资料对比

注：与健康对照组和SA组相比，*P<0.05；与AMI组相比，△P<0.05。

表2 4组受检者外周血EMPs、Th细胞因子水平比较±s)

注：与健康对照组相比，*P<0.05；与SA组相比，△P<0.05；与UA组相比，▲P<0.05。

2.3 相关性分析 见表3。相关性分析结果显示，EMPs与IFN-γ、IL-2呈正相关关系(P<0.05)，与IL-4、IL-10无明显相关性(P>0.05)。

表3 EMPs与Th细胞因子相关性分析

3 讨 论

目前研究已证实，ACS的发病机制与血栓的形成、冠状AS斑块破裂有关，其中炎性反应在介导动脉硬化中起重要作用[6]。Guo等[7]在研究中发现，炎性反应是导致不稳定斑块形成的主要因素。越来越多的研究显示，ACS患者存在Th1/Th2失衡，其中以Th1分泌的白细胞介素、肿瘤坏死因子升高最为明显，并且随着疾病的进展，上述因子水平会显著升高[8-9]。这提示白细胞介素、肿瘤坏死因子在不稳定斑块形成中发挥着重要作用。在本研究中，UA组和AMI组IFN-γ、IL-2水平显著高于健康对照组和SA组，由此说明Th1细胞参与了AS斑块和不稳定斑块的形成。

EMPs主要由内皮细胞分泌，它作为内皮细胞的产物，能够准确反映出内皮细胞的功能。对于各种内皮细胞功能异常的疾病，如高血压、糖尿病、紫癜、冠心病等患者，血浆EMPs水平会明显升高，因此临床上常将EMPs作为监测内皮细胞功能的标志物[10]。本研究发现，SA组、UA组、AMI组外周血EMPs水平显著高于健康对照组，由此说明EMPs水平可以反映冠心病患者内皮细胞的功能。另外UA组、AMI组EMPs水平又高于SA组，这提示冠心病动脉硬化斑块的稳定性与EMPs水平有密切关系。本研究对EMPs与Th细胞因子相关性进行分析后发现，EMPs与IFN-γ、IL-2呈正相关关系，而与IL-4、IL-10无明显相关性。这一结果提示Th1/Th2细胞因子分泌异常可能是导致EMPs水平升高的主要原因。此外通过检测外周血IFN-γ、IL-2水平也能在一定程度上了解动脉硬化斑块的炎性反应程度。

既往研究还证实，EMPs不仅反映内皮细胞功能，还参与凝血过程，它可以通过促进血小板的聚集导致血栓形成[11-12]。此外EMPs还能够调节患者免疫功能。本研究结果表明，通过检测EMPs水平可以反映冠心病患者斑块炎性反应程度和内皮功能，还参与Th1/Th2的调控，促进斑块形成和斑块的不稳定。但EMPs在此过程中参与的程度仍需要进一步研究。

综上所述，冠心病患者外周血EMPs水平能够反映患者内皮功能、斑块炎性反应程度及斑块的稳定性，导致EMPs升高的原因可能与Th1/Th2细胞因子分泌异常有关。

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Dynamic changes and clinical significance of EMPs,Th cytokines levels in patients with coronary heart disease

SHENHong-yuan1,CHENYu-rong2,SHENJian-lin1△

(1.ChemistryTeachingandResearchSection,SchoolofMedical，HuBeiPolytechnicInstitute,Xiaogan,Hubei432000,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,SchistosomiasisDiagnosisandTreatmentofSpecializedSubjectHospitalofHanchuanCity,Hanchuan,Hubei432300,China)

Objective To explore the changes and clinical significance of endothelial cell membrane particles (EMPs),helper T cell (Th) levels in patients with coronary heart disease.Methods Totally 68 cases of patients with coronary heart disease from July 2011 to July 2013 in the hospital were selected as the research object,according to the WHO classification standards,stable angina pectoris (SA) in 21 patients,unstable angina pectoris (UA) in 22 cases,acute myocardial infarction (AMI) in 25 cases;30 cases of health the same period in the hospital were selected as the control group.The levels of EMPs，IFN-γ，IL-2，IL-4，IL-10 in the four groups were compared .Results The SA group,UA group,AMI group of peripheral blood EMPs,IFN-γ,IL-2 levels were significantly higher than those in the control group,UA group and AMI group was higher than that of SA group (P<0.05);peripheral blood EMPs in AMI group was higher than that in UA group (P<0.05).The results of correlation analysis showed EMPs and IFN-γ,IL-2 was positively related (P<0.05),and had no significant correlation between IL-4,IL-10 (P>0.05).Conclusion The level of EMPs in peripheral blood of patients with coronary heart disease can reflect the degree of inflammation,endothelial function and plaque stability;possible reasons leading to elevated EMPs and Th1/Th2 cytokine secretion abnormalities.

coronary heart disease; endothelial cell membrane particles; helper T cells; arteriosclerosis

沈红元，女，本科，讲师，主要从事实验医学研究。△

,E-mail:1585932398@qq.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.03.029

A

1672-9455(2015)03-0360-03

2014-08-28

2014-10-15)