周瑞瑞，毛士龙（上海市徐汇区中心医院药剂科，上海 200031）

白癜风是一种后天性色素减退性皮肤病，表现为局部性或泛发性色素脱失。该病发病率高、病程长且治愈率低。由于该病的发病机制尚不十分清楚[1]，且目前尚无满意的治疗方法，因此临床迫切需要疗效确切、不良反应小的新药出现。

复方香芪颗粒原处方名为祛白方，是我院结合传统医学与现代医学在对白癜风认识的基础上创立的协定方，具有充分的理论依据，同时已在我院临床应用20 多年，疗效确切，故还具有充分的临床实践依据[2-3]。本研究拟探讨复方香芪颗粒对白癜风模型豚鼠的药效学作用，以为其临床应用提供实验依据。

1 材料

1.1 仪器

XD811 半自动生化分析仪（上海迅达医疗仪器有限公司）。

1.2 药材、药品与试剂

丹参、降香、白薇、紫草、苍术、红花、龙胆草、女贞子、白蒺藜、海螵蛸、甘草、龟板购于上海万仕诚国药制品有限公司，批号：20120506，符合2010版《中国药典》的相关质量标准。

复方香芪颗粒（自制，规格：0.45 g/粒）、白癜风胶囊（天津宏仁堂药业有限公司，批号：20110302，规格：0.45 g/粒），临用前均用蒸馏水制备成相应质量浓度的溶液；丙二醛（MDA）测定试剂盒（批号：20120403）、胆碱酯酶（ChE）测定试剂盒（批号：20120305）均由南京建成生物工程研究所提供；过氧化氢溶液（上海桃浦化工厂，批号：20120402）。

1.3 动物

2 方法

2.1 复方香芪颗粒处方及提取、制粒方法

2.1.1 处方 丹参10 g、降香3 g、白薇10 g、紫草10 g、苍术10 g、红花6 g、龙胆草10 g、女贞子12 g、白蒺藜10 g、海螵蛸10 g、甘草6 g、龟板5 g。

2.1.2 提取、制粒 各中药按处方比例用水提取，浓缩，用70%乙醇沉淀，上清液浓缩成浸膏，出膏率为23%。取提取物100 g，加入包合剂（环糊精）10 g、矫味剂（甜菊糖苷）3 g、成型剂（聚乳糖）5 g，搅拌，滤过，喷雾干燥，加聚乙烯吡咯烷酮（PVP）2 g，干式制粒，整粒，即得产品。喷雾干燥的进风温度为170 ℃、出风温度为80 ℃，制得的粉粒含水分5%，直接干式制粒，制粒时物料温度在60 ℃以下。

2.2 分组及模型制备[4]

2.3 给药[5]

空白对照组和模型对照组从建模第11 天起用蒸馏水灌胃，每只2 ml，每天1次。白癜风胶囊组按人用推荐剂量（按照人体质量60 kg 计）换算成豚鼠的给药剂量即50 mg/（kg·d）。复方香芪颗粒低、中、高剂量组分别为25、100、400 mg/（kg·d），其中剂量按人用推荐剂量而得。各药物组溶于蒸馏水中给药，体积均为2 ml。从建模第11天起灌胃给药，每天1次，连续40 d。

2.4 病理学观察

给药结束后，取用药部位中心1 cm×1 cm皮肤，用10%甲醛固定，石蜡包埋，切片，用多巴氧化酶法[6]进行黑色素染色，随意观察50 个毛囊，计算其中黑色素毛囊数及皮肤黑色素的分布情况。表皮黑色素分布的等级：“+++”示表皮基底细胞及棘层均有黑色素；“++”示表皮基底细胞及棘层1/2 以上有黑色素；“+”示表皮基底细胞及棘层1/2～1/3 有黑色素；“±”示表皮基底细胞及棘层偶见黑色素；“-”示表皮基底细胞及棘层未见黑色素[7]。

2.5 ChE活性、MDA含量及血液流变学指标测定

末次给药2 h后，各组豚鼠用3.5%水合氯醛（10 ml/kg）麻醉后腹主动脉取血，加入肝素抗凝管中离心得血浆，按照试剂盒操作测定血浆中ChE 活性、MDA 含量；另取血于生化分析仪中测定血液流变学指标。

2.6 统计学方法

3 结果

3.1 各组豚鼠皮肤黑色素分布及黑色素毛囊数观察结果

与空白对照组比较，模型对照组豚鼠皮肤黑色素分布较少，黑色素毛囊数显著减少，差异有统计学意义（P＜0.01），符合造模要求。与模型组比较，白癜风胶囊组及复方香芪颗粒低、中、高剂量组豚鼠黑色素的分布以及黑色素毛囊数均显著增加（P＜0.05或P＜0.01），详见表1。

表1 各组豚鼠黑色素分布及黑色素毛囊数观察结果Tab 1 Distribution of melanin distribution of skin melanin and the number of black hair follicle in guinea pigs of each group

3.2 各组豚鼠血浆ChE、MDA检测结果

与空白对照组比较，模型对照组豚鼠血浆ChE 活性显著降低，MDA含量显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01），符合该模型的要求。与模型对照组比较，白癜风胶囊组及复方香芪颗粒低、中、高剂量组豚鼠血浆ChE活性升高、MDA含量降低，差异有统计学意义（P＜0.01），详见表2。

表2 各组豚鼠血浆ChE、MDA检测结果Tab 2 Determination results of plasma ChE and MDA in guinea pigs of each group

3.3 各组豚鼠血液流变学指标检测结果

与空白对照组比较，模型对照组豚鼠血浆黏度、全血黏度及血细胞比容显著升高，红细胞沉降率显著降低，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01），符合白癜风临床特征，表明造模成功。白癜风胶囊组及复方香芪颗粒中、高剂量组豚鼠血液黏度、全血黏度及血细胞比容显著降低，红细胞沉降率显著升高，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01），低剂量组豚鼠血浆黏度和全血黏度差异有统计学意义（P＜0.05），详见表3。

4 讨论

白癜风主要因先天禀赋不足、惊恐伤肾、郁怒伤肝、日久耗伤阴血、阻滞经脉，使局部气血淤滞、致肌肤不得濡养所致，经过多年的发展，中医对其已积累了丰富的临床治疗经验[8-9]。白癜风胶囊含有补骨脂、蒺藜、川芎、当归、红花、香附等成分，在临床已应用多年，为治疗白癜风经典药物[10-11]，故本研究将其作为阳性对照药。现代医学对白癜风的发病机制仍不十分清楚，但研究表明其与遗传因素、自身免疫、神经化学因子、氧化应激、酪氨酸缺乏等有关[12]。笔者采用5%过氧化氢化学脱色法制备白癜风的豚鼠模型，模型对照组肉眼观察及切片镜下结果均符合白癜风患者皮肤临床病理特征；血浆中ChE 活性降低、MDA 含量升高也符合现代医学的神经化学因子、氧化应激学说[13]；全血及血浆黏度升高也符合中医气血淤滞之说，表明模型建立成功。

表3 各组豚鼠血液流变学指标检测结果Tab 3 Determination results of hemorheology indexes in guinea pigs of each group

白癜风的发生与氧化应激有着密切的联系[14]，表皮内活性氧族过度聚集使黑素细胞膜脂质不稳定，黑素细胞膜脂质合成及循环紊乱导致黑色素细胞被破坏。MDA 是脂质发生过氧化反应的终产物，为氧化应激发生的指标。Yildirim M等[15]发现白癜风患者活体组织中MDA水平较正常人显著增加，也有学者提出白癜风患者体内氧化应激的失衡很有可能源于表皮细胞中心磷脂的组成与功能异常，其能导致线粒体电子传递链活性下降，继而诱导活性氧族过度产生，介导脂质过氧化，诱导黑色素细胞的死亡。皮肤黑色素的合成涉及一系列的过程，在神经化学因子学说中，神经末梢分泌的化学物质如乙酰胆碱能够在体外损伤黑色素细胞、抑制其合成[16]。ChE活力下降的时候，乙酰胆碱消除减少，在突触间隙的含量增加，黑色素细胞的损伤增加[17-18]。

复方香芪颗粒原方中当归、黄芪柔肝养血，健脾益气，补后天之本以充气血生化之源；补骨脂益肾填髓，其含有呋喃香豆素类物质，可提高皮肤对紫外线的敏感性，刺激黑色素细胞的形成，对酪氨酸酶的活性也有较强的激活作用；川芎、红花、丹参行气活血；白蒺藜、香附疏风祛邪以通络，共奏调和气血、活血化瘀之效。本研究结果显示，复方香芪颗粒能显著增加白癜风模型豚鼠皮肤黑色素的分布以及黑色素毛囊数，提高血浆中ChE的活性、降低MDA含量，同时改善血液循环，表明其对白癜风模型豚鼠相关指标具有良好的改善作用，并呈较好的量效关系。因此，本研究结果为该药的临床应用提供了较好的药效学实验依据。

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