谢英才　邓碧坚　支李金(广东医学院附属医院内分泌科，广东　湛江　524001)

尿铜蓝蛋白、血清胱抑素C、视黄醇结合蛋白联合检测在早期糖尿病肾病中的诊断价值

谢英才邓碧坚支李金
(广东医学院附属医院内分泌科，广东湛江524001)

〔摘要〕目的探讨尿铜蓝蛋白、血清胱抑素(Cys) C和视黄醇结合蛋白(RBP)三者在早期糖尿病肾病(DN)中的诊断价值。方法糖尿病患者参照尿微量白蛋白排泄率(UAER)分成两组:早期DN组38例(30 mg/24 h＜UAER＜300 mg/24 h)和单纯糖尿病组44例(UAER＜30 mg/24 h) ;健康体检者38例作为正常对照组。比较三组尿铜蓝蛋白、Cys C和RBP水平。结果三组尿铜蓝蛋白、Cys C、RBP水平均有显著差异(P＜0.01)，且DN组最高，正常对照组最低;尿铜蓝蛋白、Cys C、RBP三者联合检测对于DN诊断的曲线下面积为0.948，敏感性为91.42％，特异性为90.51％，均显著高于三者单独检测。结论尿铜蓝蛋白、Cys C、RBP三者联合检测对于早期DN的诊断有着重要的意义。

〔关键词〕尿铜蓝蛋白;糖尿病肾病;胱抑素C;视黄醇结合蛋白

第一作者:谢英才(1969-)，男，主任医师，硕士，主要从事糖尿病发病机制与炎症因子关系研究。

糖尿病肾病(DN)一般起病较为隐匿，且病情发展缓慢，而早期的肾脏病变往往可以逆转，大量患者在出现合并水肿现象或明显的蛋白尿时才会发现，此时后果往往很严重〔1，2〕。本研究旨在通过检测早期DN患者中尿铜蓝蛋白、血清胱抑素(Cys) C和视黄醇结合蛋白(RBP)的含量，探讨这三者的检测在早期DN中的诊断价值。

1　资料与方法

1.1一般资料2010年8月至2014年2月我院糖尿病患者82例，其中DN组38例，单纯2型糖尿病组44例。均符合世界卫生组织(WHO) 1999年制定的糖尿病相关诊断标准。参照尿微量白蛋白排泄率(UAER)分为早期DN组(30 mg/24 h≤UAER＜300 mg/24 h)和单纯糖尿病组(UAER＜30 mg/24 h)。排除有心、肺功能障碍、原发性高血压病史及由非糖尿病导致的肾功能障碍。随机选取我院同期接受健康体检者38例作为正常对照组。三组一般资料无统计学差异(P＞0.05)。见表1。

表1　三组一般资料的比较(±s)

表1　三组一般资料的比较(±s)

早期DN组(n=38)单纯糖尿病组(n=44)正常对照组(n=38) 男/女(n)　18/20　16/28　15/23年龄(岁)　52.1±6.6　 52.0±10.3　 52.4±9.8体质指数(kg/m2)　 21.0±2.1　 21.2±3.2　 21.3±3.1高血压/高脂血症(n)　 9/10　10/12　7/8

1.2研究方法采用由日本日立公司生产的HITACHI 7600全自动生化分析仪，英国Denley公司生产的洗板机，美国Bio Rad公司生产的酶标仪，北京朝阳福利塑料厂生产的微量反应板，北京化工厂生产的邻苯二胺底物;北京中生科技有限公司生产的标准液和Cys C检测试剂盒，上海北加生化试剂有限公司生产的RBP检测试剂盒，Sigma公司生产的人铜蓝蛋白纯品，北京生物制品研究所提供的酶标羊抗兔抗体，含有0.2％戊二醛PBS缓冲液(包被液)，制备兔抗人尿铜蓝蛋白血清。严格按照各质控品的说明书执行规范操作。清晨抽取10 ml的尿样本，经10 min离心处理后提取上清液，使用免疫比浊法对尿微量白蛋白(mAlb)进行测定。2 w前受试者停用所有抗凝血的药物，经过12 h的禁食后，于清晨抽取患者空腹时3 ml静脉血，离心后将血清提取，保存于－20℃以备检测，使用透射比浊法对RBP、Cys C进行检测。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测尿铜蓝蛋白:用包被液将样品稀释(1∶1)，在每个孔内加入100 μl的样品来包被反应板，温育1.5 h，于4℃的冰箱内过夜，第2天将板取出并洗涤3次，在每孔中加入3 μg/ml的抗人铜蓝蛋白血清100 μl，温育3 h，同样将板取出并洗涤3次，加入酶标羊抗兔100 μl，温育1.5 h，取板洗涤3次，加入邻苯二胺100 μl，3 min后加入4 mmol/L的硫酸100 μl终止反应，对每孔的吸光度值进行测定，并记录下结果。观察各组的mAlb，并计算出UAER。同时记录尿铜蓝蛋白、Cys C和RBP值，参考范围:尿铜蓝蛋白: (54±25.2) ng/ml; Cys C: 0.55～1.05 mg/L; RBP:女26.7～57.9 mg/L，男36～56 mg/L。

1.3统计学方法采用SPSS19.0统计软件进行单因素方差分析。

2　结果

2.1三组尿铜蓝蛋白、Cys C、RBP比较三组尿铜蓝蛋白、Cys C、RBP水平均有显著性差异(P＜0.01)，且DN组最高，正常对照组最低。见表2。

表2　三组尿铜蓝蛋白、Cys C、RBP比较(±s)

表2　三组尿铜蓝蛋白、Cys C、RBP比较(±s)

指标　　早期DN组(n=38)单纯糖尿病组(n=44)正常对照组(n=38)　F值　P值尿铜蓝蛋白(ng/ml) 332.8±91.0　 98.6±26.4　 10.3±6.8　 367.6＜0.01 Cys C(mg/L)　 1.7±0.8　 0.9±0.2　 0.7±0.1　 48.82＜0.01 RBP(mg/L)　 108.7±20.6　 67.3±12.1　 42.4±10.4　 192.2＜0.01

2.2尿铜蓝蛋白、Cys C、RBP对于DN诊断价值将DN组尿铜蓝蛋白、Cys C、RBP水平行ROC曲线分析，提示尿铜蓝蛋白、Cys C、RBP三者联合检测对于DN诊断的曲线下面积、敏感性、特异性均高于三者单独检测。见表3和图1。

表3　尿铜蓝蛋白、Cys C、RBP及三者联合对DN的诊断价值

图1　尿铜蓝蛋白、Cys C、RBP及三者联合对DN的诊断价值

3　讨论

DN是糖尿病患者中最常见的一种慢性微血管并发症，也是糖尿病患者致残、致死的一个主要原因。据相关的研究资料显示，糖尿病患者中约20％～40％会发展成DN〔3，4〕。DN的病程越长，病情发展越严重，早期DN患者的肾脏组织往往存在较强的代偿能力，起病隐匿，一般在一段时期无任何明显的症状。如果进入了混合蛋白尿阶段，其肾功能的破坏就无法被逆转。目前UAER在30～300 mg/24 h被公认为早期DN标志。

铜蓝蛋白属于急性反应期的一种蛋白，一旦尿液中出现大量的尿铜蓝蛋白，提示肾小球血管内的基底膜电荷的选择性发生显著变化〔5〕。Cys C属于半胱氨酸蛋白酶抑制剂，在组织的体液和有核细胞中广泛存在，不具有组织特异性。机体内有着相对恒定的Cys C产生量，不受饮食、年龄、胆红素、血脂、炎症等的影响〔6〕。可以清除Cys C的器官只能是肾脏。Cys C的等电点高，而相对分子量较低，可以从肾小球过膜内自由通过，且于近曲小管内重降解和吸收，故肾小球滤过率(GFR)决定Cys C水平。所以，Cys C是反映GFR的一种内源性标志物。体内的Cys C含量随着肾小球受损严重程度而上升，同时伴随发展的病情而不断地上升〔7〕。

RBP是一种肝合成的低分子蛋白，在人体血清、尿液以及脑脊液等体液内广泛存在。受视黄醇的刺激，RBP与视黄醇特异性结合，构成了视黄醇-RBP这种复合物〔8〕，血液中脑脊液、视黄醇、90％的RBP以1∶1∶1比例形成了高分子的蛋白复合物，使肾小球中RBP的滤过率下降，转送入机体组织内，解离复合物，释放RBP。剩余的10％ RBP于近端肾小管被重新吸收、分解。尿液中只能排出少量的RBP，一旦肾功能受损，则能在尿液中检测出RBP〔9〕。本实验提示对早期DN患者进行尿铜蓝蛋白、Cys C和RBP的联合检测能提高相应的确诊率，有助于糖尿病患者肾功能受损的早期发现，有利于治疗和预防DN，降低并发症发生率〔10〕。

4　参考文献

1 Pavkov ME，Knowler WC，Hanson RL，et al.Comparison of serum cystatin C，serum creatinine，measured GFR and estimated GFR to assess the risk of kidney failure in American Indians with diabetic nephropathy〔J〕．Am J Kidn Dis，2013; 62(1) : 33-41.

2 Abe M，Maruyama N，Okada K，et al.Effects of lipid-lowering therapy with rosuvastatin on kidney function and oxidative stress in patients with diabetic nephropathy〔J〕．J Atheroscler Thromb，2011; 18(11) : 1018-28.

3 Ye H，Bai X，Gao H，et al.Urinary podocalyxin positive-element occurs in the early stage of diabetic nephropathy and is correlated with a clinical diagnosis of diabetic nephropathy〔J〕．J Diab Compl，2014; 28 (1) : 96-100.

4 Korabecna M，Pazourkova E，Horinek A，et al.Methylation status of immune response genes promoters in cell-free DNA differs in hemodialyzed patients with diabetic nephropathy according to the intensity of anemia therapy〔J〕．Blood Purif，2013; 36(3-4) : 280-6.

5 Kuricova K，Tanhauserova V，Pacal L，et al.NOS3 894G＞T polymorphism is associated with progression of kidney disease and cardiovascular morbidity in type 2 diabetic patients: NOS3 as a modifier gene for diabetic nephropathy〔J〕．Kidney Blood Press Res，2013; 38(1) : 92-8.

6 Jeon YL，Kim MH，Lee WI，et al.Cystatin C as an early marker of diabetic nephropathy in patients with type 2 diabetes〔J〕．Clin Lab，2013; 59 (11-12) : 1221-9.

7 Zhou G，Wang Y，He P，et al.Probucol inhibited Nox2 expression and attenuated podocyte injury in type 2 diabetic nephropathy of db/db mice 〔J〕．Biol Pharm Bull，2013; 36(12) : 1883-90.

8 Noori N，Tabibi H，Hosseinpanah F，et al.Effects of combined lipoic acid and pyridoxine on albuminuria，advanced glycation end-products，and blood pressure in diabetic nephropathy〔J〕．Int J Vitam Nutr Res，2013; 83(2) : 77-85.

9Tavafi M.Diabetic nephropathy and antioxidants〔J〕．J Nephropathol，2013; 2(1) : 20-7.

10 Chae HW，Shin JI，Kwon AR，et al.Spot urine albumin to creatinine ratio and serum cystatin C are effective for detection of diabetic nephropathy in childhood diabetic patients〔J〕．J Korean Med Sci，2012; 27(7) : 784-7.

〔2014-04-19修回〕

(编辑苑云杰)

基金项目:湛江市科学技术委员会项目(No．2008-67)

〔中图分类号〕R587.1

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2015) 16-4529-02;

doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2015.16.047