吴宝军

核酸检测与酶联免疫检测血液病毒的对比分析

吴宝军

目的探究对血液病毒采用核酸检测和酶联免疫检测的方法以及准确率。方法住院的18637例患者进行检测分析， 包括HCVAb、HBsAg、HIVAb和二次酶联免疫法的筛查， 并对阴性和阳性血样进行核酸检测， 观察两种检测方法的检查结果， 对比检测的准确性。结果酶联免疫法中103个样本出现检测失误， 漏（误）检率为0.6%， 而核酸检验没有出现漏检或者误检现象， 检测准确率差异有统计学意义（P＜0.05）。结论对住院患者采用核酸检测的方法检测血液病毒， 灵敏度较高， 减少并避免漏检。

血液病毒；核酸检测；酶联免疫检测

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年2月～2014年3月本院住院的18637例患者进行检测分析， 其中192例血液标本有梅毒或者转氨酶的检测不合格。对18216份血液标本进行病毒检测，每个标本在采血后使用5 ml和7 ml的真空抗凝管进行留样，放置在2～8℃的冰箱中保存， 对7 ml真空抗凝管的血样在24 h内需要分离血浆， 进行酶联免疫法的血液筛查， 对5 ml的真空管血氧在3 h内进行血浆分离， 给予核酸检测。

1.2 方法

1.2.1 酶联免疫法 将18216份7 ml真空抗凝管进行室温离心， 将血浆成功分离， 并选择安图e-Lisa全自动加样仪进行自动加样， 并采用Uranus AE的全自动酶免分析仪， 检验人员要仔细记录检测结果。

1.2.2 核酸检测法 把5 ml的真空抗凝管的血样进行20 min的室温离心， 并将其放置在2～8℃的冰箱中， 当血液样品在血常规检查合格后， 将其放置在加样仪样品的条架上， 采用一级分配试剂的程序， 将100 μl的A、B洗液以及100 μl的洗脱液， 加入到B号96孔深孔板中， 把50 μl的磁珠和600 μl的结合液加入到A号96孔深孔板中。并对样品进行裂解， 同时避免标本污染。当完成裂解后， 要采用三级核酸的提取程序，并采用核酸提取仪经过B号的96孔深孔板以及A号的96孔深孔板来提取核酸， 并配置扩增核酸的反应液。针对标本量采用四级核酸的扩增程序将提取后核酸的结合液混入到八联管中， 并将八联管放置在PCR仪中扩增， 并记录结果， 对阳性汇集孔的标本挑出来， 进行相应的拆分实验， 确定阳性标本。

1.3 统计学方法 采用SPSS14.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

对18216份血液标本进行病毒检测， 酶联免疫法在检测过程中， 有103例血样检测为HBV DNA阳性， 出现检测失误，漏（误）检率为0.6%， 而核酸检验中， 没有出现漏检或者误检现象， 检测准确率差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨论

有很多疾病通过血液传播病毒， 其中丙型肝炎、艾滋病和乙型肝炎为传播最严重的疾病， 会对人体产生严重的不良影响， 因此通过对住院患者术前的检测率的提高， 才能排除输血传播的风险， 降低医院纠纷， 目前在血液的筛查中常用的检测方法为酶联免疫法［3］。对住院患者术前进行检测， 采用核酸检测的方法， 无一例出现HIV和HCV的误检和漏检，说明医院进行规范的检测工作， 采取核酸检测这种方法， 可促进医疗质量的提高。排除输血传播途径， HBV漏检是因为窗口期导致， 还由于测试剂的灵敏度较低， 造成HBV的低水平复制。酶联免疫检测法的灵敏度低， 其主要因素为窗口期、免疫静默的感染以及病毒变异等。核酸检测方法其检测的准确率高， 基本没有漏诊和误诊情况的出现。HBV感染跟季节有一定联系， ELISA漏检跟气温相关联， 冬季的气温较低， 且人体HBsAg不容易表达， 活性较低， 这就需要多次检测和大量标本进行证明， 由此说明控制HBV的漏检以及经血途径的传播， 只给予HBsAg的筛查并不够， 需高度重视。CT值和罗氏病毒的定量数值之间为正相关， 并证实了荧光定量PCR技术来检测核酸的CT值有必要性和可靠性。NAT检测法的灵敏度较高， 且检测的窗口期较短， NAT已经广泛应用于临床。酶联免疫法中103个样本出现检测食物， 漏（误）检率为0.6%， 而核酸检验法没有出现漏检或者误检现象， 检测准确率差异有统计学意义（P＜0.05）。

综上所述， 在住院患者筛查中采用核酸检测的方法， 准确率高， 灵敏度较高， 能够较好减少并避免漏检的情况， 值得推荐。

［1］ 龚晓燕， 任芙蓉， 宋美兰， 等.罗氏cobas MPX混样及单人份检测模式对献血者NAT检测效果的研究.中国输血杂志，2013， 26（21）:136-137.

［2］ 欧阳玲， 黄建国， 谢秀华， 等.核酸检测技术在深圳地区献血者血液病毒筛查中的应用.国际检验医学杂志， 2010， 31（7）: 764-765.

［3］ 曾劲峰， 叶贤林， 马兰， 等.血筛用酶联免疫吸附试验与核酸检测互补性探讨和研究.国际检验医学杂志， 2008， 29（8）:683-684.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.07.080 HCV、HIV、HBV这些疾病主要的传染途径之一为输血，对血液给予输血相关的抗体检验或者抗原检测， 能够避免或者减少输血过程的疾病传播等现象。而本院住院需要手术的患者， 按照医院规定和要求， 术前必须对患者的血样采用酶联免疫的测定方法， 进行血液的各项筛查， 从而排除了医院院内输血传播的可能。但因为酶联免疫法是对相应病毒进行抗体或者抗原的筛查， 但在病毒变异、窗口期、仪器的运行程序、手工操作、实际的特异性以及环境温度等都会造成HCV、HBV、HIV等疾病的漏检。在目前检验技术的不断发展中， 病毒核酸检测能够明显减短血液感染病毒的检测窗口期， 对病毒本身进行直接检测， 排除医院通过输血传播病毒的风险， 有利于保护医院和患者权益， 因此临床检验中推荐使用核酸检测法［2］。选取2013年2月～2014年3月本院住院的18637例患者进行检测分析， 观察检测结果， 现报告如下。

2014-11-12］

741000 天水市第一人民医院检验科