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HPLC法测定通经活络喷雾剂中丹参酮ⅡA的含量

2015-01-29何广俊李诗慧王利胜

中国医药指南 2015年10期
关键词:喷雾剂丹参酮丹参

何广俊 李诗慧 王利胜 卢 映 李 周

(1 广州中医药大学中药学院,广东 广州 510006;2 广东省中医院药学部,广东 广州 510120)

通经活络喷雾剂处方由丹参、芦荟、黄连、黄芪、猫爪草等九味中药组成,具有活血止痛,舒经活络,清热解毒等功效,主要用于颈肩肌肉酸痛等症。通经活络喷雾剂处方中,丹参为君药,丹参酮ⅡA(TanⅡA)是丹参的主要脂溶性有效成分,具有明显的抗炎作用,对急性、亚急性关节肿有抑制作用[1]。为了控制通经活络喷雾剂质量,建立相应的质量标准,本试验参照2010版中国药典[2],同时结合通经活络喷雾剂本身的特点建立了高效液相色谱法,用于测定君药丹参中丹参酮ⅡA的含量。

1 材 料

KQ5200DE型数控超声清洗器(江苏省昆山市超声仪器有限公司);Waters高效液相色谱仪(美国Waters 公司,515泵,2487紫外检测器);N3000色谱工作站(浙江大学);DLB200电子天平(日本岛津);丹参酮ⅡA对照品(中国药品生物制品检定所,批号:0756-9908);通经活络喷雾剂(自制,批号:121011、121012、121013);阴性样品(自制);色谱纯乙腈(迪马公司);水为纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件:色谱柱:Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:乙腈-水(75∶25);检测波长为270 nm;流速:1 mL/min;柱温:25 ℃;进样量20 μL;出峰时间20.69 min;理论板数按丹参酮ⅡA峰计算不低于3000。色谱图见图1。

2.2 对照品储备液的制备:精密称取丹参酮ⅡA对照品1.2 mg,置100 mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得浓度为12 μg/mL的储备液。

2.3 供试品与阴性样品溶液制备[3]:精密量取本品2 mL,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇20 mL,称定重量,超声处理30 min,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,取上清液,用0.45 μm的微孔滤膜滤过,取续滤液,作为供试品溶液;阴性溶液的制备是按处方中药味的比例,自配不含丹参的群药,按通经活络喷雾剂的制备工艺制成空白样品,其余操作与供试品的制备方法相同。

图1 通经活络喷雾剂的HPLC图

2.4 线性关系考察:取2.2项下丹参酮ⅡA储备液0.1、0.2、0.4、1.0、5.0 mL分别放入10 mL容量瓶中,定容并摇匀,制成浓度为0.12、0.24、0.48、1.2、6 μg/mL的系列标准溶液,精密吸取上述系列标准溶液20 μL,按照2.1项下色谱条件,依次进样,每个样品进样3次,以平均峰面积(Y)对浓度(X)进行线性回归,绘制标准曲线,得回归方程Y=102959X-4680,r=0.9997。结果表明丹参酮ⅡA在0.12~6 μg/mL范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验:取1.2 μg/mL的对照品溶液20 μL,连续重复进样6次,测得藁本内酯峰面积并计算其RSD值。结果RSD为1.23%,表明仪器的精密度良好。

2.6 稳定性试验:取同一批样品(批号:121011),照前述方法制备供试品溶液,按2.1项下色谱条件分别在0、2、4、8、12 h测定溶液中藁本内酯的峰面积,测得的峰面积并计算其RSD值。结果RSD值为2.32%,表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.7 回收率试验:取通经活络喷雾剂样品(批号121011)6份,精密量取1 mL,精密称定,依次分别每组精密丹参酮ⅡA对照品溶液(6 μg/mL×355 μL),依法制成供试品溶液,测定,计算回收率,平均回收率为99.94%,RSD为2.5%。由此可以得知该方法的回收率良好,适合含量测定的要求。

2.8 样品含量测定:按照2.3项下制备供试品溶液和2.1项下色谱条件测定3批样品,样品的含量测定结果为:批号分别为121011、121012、121013,测得的丹参酮ⅡA含量分别为2.134、2.156、2.273 μg/mL,RSD含量分别为0.98%、0.87%、0.75%。由此可见,3批通经活络喷雾剂成品中丹参酮ⅡA的含量相差较小,为了使制定的质量标准具有更好的适用性,因此规定通经活络喷雾剂中每1 mL含丹参含量以丹参酮ⅡA(C19H18O3)的总量计,不得少于0.15 μg。

3 讨 论

2010版中国药典及相关文献[4]中用HPLC法丹参酮ⅡA测定时,流动相为甲醇:水(75∶25),但是本试验用此流动相对丹参酮ⅡA进行测定时,丹参酮ⅡA峰型不是非常对称,因此本试验将流动相换成乙腈∶水(75∶25)进行试验,结果发现丹参酮ⅡA分离效果好,峰型对称,没有拖尾现象,因此最后选择的流动相为乙腈∶水(75∶25)。

在供试品的制备时,尝试过将通经活络喷雾剂直接过微孔滤膜,HPLC法测定,但是发现虽然用微孔滤膜过滤,供试品还是会有些堵塞预柱,可能是痛经活络喷雾剂是由中药复方提取制成,仍然存在一些大分子物质,因此本试验参考相关文献[4]将样品用甲醇处理以除去一些大分子物质,结果所得供试品溶液进行HPLC法进行测定时,柱压稳定,不再堵塞色谱柱。

[1]吴杲,何招兵,吴汉斌,等.丹参酮的药理作用的研究进展[J].现代中西医结合杂志,2005,14(10):1382-1385.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[M].北京:中国医药科技出版社,2010:70-71.

[3]王希东,郝少君,李文俊,等.HPLC法测定益复康口服液中阿魏酸的含量[J].河南中医,2014,34(1):154-155.

[4]吴俊洪,罗惠都,何丽冰,等.丹参酮Ⅱ纳米囊的制备及其性能评价[J].中药新药与临床药理,2013,24(1):101-103.

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