杜晓丽 朱慧芳

[摘要] 目的 探讨基因蛋白Caveolin-1的表达在卵巢癌侵袭和转移中的作用。 方法 选取2011年1月～2014年1月廊坊市人民医院手术切除卵巢组织存档蜡块89例，其中卵巢浆液性囊腺瘤58例和卵巢浆液性囊腺癌31例，另取10例因其他良性卵巢病变手术切除的正常卵巢组织作为对照。应用流式细胞免疫法检测99例卵巢组织中Caveolin-1的定量表达，分析Caveolin-1与卵巢癌侵袭和转移的关系。 结果 卵巢浆液性囊腺癌中Caveolin-1的平均荧光指数（FI）为（0.66±0.27），明显低于正常卵巢组织（1.00±0.16）和卵巢浆液性囊腺瘤（1.69±0.34），差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。有淋巴转移的卵巢浆液性癌Caveolin-1蛋白平均FI值为（0.57±0.29），明显低于无淋巴转移的卵巢液性癌（0.94±0.31），差异有统计学意义（P < 0.05）;Ⅲ期的卵巢浆液性癌Caveolin-1蛋白FI值为（0.51±0.23），明显低于Ⅰ～Ⅱ期的卵巢浆液性癌（0.92±0.24），差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 卵巢浆液性囊腺癌组织中Caveolin-1的低表达促进了其侵袭和转移，提示Caveolin-1可作为卵巢浆液性囊腺癌诊断和判断预后的指标。

[关键词] 卵巢浆液性囊腺癌;Caveolin-1;侵袭和转移

[中图分类号] R711.75          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2015）01（a）-0035-04

Expression of Caveolin-1 gene proteion in ovarian serous carcinoma and its clinical significance

DU Xiaoli   ZHU Huifang

1.Department of Obstetrics and Gynecology， the People's Hospital of Langfang City， Hebei Province， Langfang   065000， China; 2.Department of Obstetrics and Gynecology， Langfang Health Career Academy， Hebei Province， Langfang   065000， China

[Abstract] Objective To study the effects of Caveolin-1 expression on invasion and mestastasis of ovarian carcinoma. Methods Expression of Caveolin-1 gene protein in 89 paraffin-embeded samples from patients with ovarian serous tumors from January 2011 to January 2014 in the People's Hospital of Langfang City， including 58 cases of ovary serous cystadenocarcinoma tissues and 31 cases of ovarian serous carcinoma tissues， 10 cases of normal ovarian tissues were taken as control group. All tissues were detected by flow cytometry method （FCM） quantitatively. The relationship between Caveolin-1 expression and invasion， mestastasis of ovarian serous carcinoma were analyzed. Results Expression of Caveolin-1 protein found in ovarian serous carcinoma was （0.66±0.27）， which was significantly less than that in normal ovarian tissues （1.00±0.16） and ovarian serous cystadenoma （1.69±0.34）， the differences were statistically significant （P < 0.05 or P < 0.01）. The FI of Caveolin-1 protein in carcinomas with lymphnode metastasis （0.57±0.29） was lower than that in carcinomas without lymphnode metastasis （0.94±0.31）， the difference was statistically significant （P < 0.05）. The FI of Caveolin-1 protein in stage Ⅲ carcinomas （0.51±0.23） was significantly less than that in stageⅠ-Ⅱ carcinomas （0.92±0.24）， the difference was statistically significant （P < 0.05）. Conclusion The low level of Caveolin-1 may be linked with the invasion and mestastasis of ovarian serous carcinomas. The expressions of Caveolin-1 can be a indication of diagnosis and prognosis in ovarian serous carcinomas.

[Key words] Ovarian serous carcinomas; Caveolin-1; Invasion and mestastasis

卵巢癌病死率居女性生殖系统肿瘤之首，严重威胁着妇女的生命和健康，为妇科肿瘤预后最差的肿瘤之一，其五年生存率仅20%～30%。其发病率和病死率逐年增加，发病年龄也趋向年轻化，严重威胁着女性生命健康。肿瘤的侵袭和转移是影响卵巢癌患者预后的重要因素之一。Caveolin-1是近年来新认识的胞膜窖（Caveolae）的标志性蛋白，与肿瘤发生过程中细胞的恶性转化、增殖、侵袭、转移以及信号传导的调控关系密切。本研究旨在通过流式细胞术（FCM）探讨Caveolin-1蛋白在卵巢浆液性癌侵袭和转移中的作用，从而评价Caveolin-1在卵巢癌恶性程度及预后判断中的价值。

1 材料与方法

1.1 材料

选择2011年1月～2014年1月河北省廊坊市人民医院手术切除的卵巢组织存档蜡块89例，所有病例均由两位有经验病理医师诊断后，经常规病理学检查证实。其中，卵巢浆液性囊腺瘤58例，卵巢浆液性囊腺癌31例。另取10例因其他良性卵巢病变手术切除的正常卵巢组织作为对照。正常卵巢组织患者年龄23～70岁，平均（47.2±4.2）岁。卵巢浆液性囊腺瘤患者年龄24～68岁，平均（45.4±4.7）岁。卵巢浆液性癌患者在手术前均未进行过化疗，年龄22～69 岁，平均（46.7±4.9）岁。按FIGO标准对31例卵巢癌进行分期，Ⅰ期12例，Ⅱ期11例，Ⅲ期8例，伴淋巴结转移的16例，无淋巴转移的15例。三组患者在年龄等一般资料方面比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 常规单细胞悬液制备法  用石蜡切片机切取石蜡组织切片，每例组织块切取切片10片，每片厚50 μm，置于10 mL试管，用二甲苯脱腊（24 h）;依次用100%、95%、70%、50%酒精梯度酒精水化，各20 min;然后加入蒸馏水5 mL（5 min），将其置一平皿放于120目不锈钢网上，将组织用眼科剪刀剪碎后，以眼科镊子轻搓组织块，同时用生理盐水冲洗，至组织搓完为止。用300目铜钢网将平皿中混悬液过滤去除团块，以500～800 r/min离心沉淀细胞悬液2 min制得单细胞悬液，备测。

1.2.2 细胞免疫荧光标记（间接免疫荧光标记法）  每份标本取单细胞悬液1×106/mL，0.1 mL，具体操作如下：将待检细胞用磷酸盐缓冲液（PBS）10 mL洗涤1次，1000 r/min离心5 min，弃上清液;每份样品加入0.1 mL一抗（兔抗人Caveolin-1单克隆抗体）1∶50工作液，室温30 min孵育，加入10 mL PBS，洗涤1次，弃上清;每份样品加入100 μL二抗（羊抗兔FITC-IgG、羊抗鼠FITC-IgG）工作液，避光、室温30 min孵育，加入10 mL PBS，离心同上，弃上清从而除去未结合荧光二抗;上机检测前加入0.1 mL PBS，经500目铜网过滤，上机检测。

1.2.3 对照样品的设置  设正常卵巢组织对照之外，还设PBS代替一抗阴性对照、加入一抗阳性对照、加入二抗阳性对照及FITC标记小鼠IgG同型对照。

1.2.4 实验仪器  使用Epics-XLⅡ型流式细胞仪，美国Beckman Coulter公司生产，激发波长为488 nm的15 mW氩离子激光器激发光源，Expo32ADC进行免疫荧光数据分析。

1.3 试剂

一抗即鼠抗人Caveolin-1单克隆抗体，二抗即羊抗鼠FITC-IgG，均于北京中杉金桥生物技术有限公司购买。

1.4 结果判定

基因蛋白表达的相对含量以荧光指数（fluorescence idex，FI）表示，FI=样品蛋白表达平均荧光强度/正常对照样品平均荧光强度。

1.5 统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验;多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同卵巢组织中Caveolin-1蛋白表达情况

卵巢液性癌组织中Caveolin-1蛋白平均FI值（0.66±0.27）明显低于正常卵巢组织（1.00±0.16）和卵巢浆液性囊腺瘤（1.11±0.34），差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01），卵巢浆液性囊腺瘤组织中Caveolin-1的蛋白平均FI值虽稍高于正常卵巢组织，差异有统计学意义（P < 0.05）。

2.2 不同类型卵巢浆液性癌组织中Caveolin-1的表达情况

有淋巴转移的卵巢浆液性癌组织中Caveolin-1蛋白表达量平均FI值明显低于无淋巴转移的卵巢液性癌组织，差异有统计学意义（P < 0.05）。Ⅲ期的卵巢浆液性癌组织中Caveolin-1蛋白表达量平均FI值明显低于Ⅰ～Ⅱ期的卵巢浆液性癌组织，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

表1   不同类型卵巢浆液性癌组织中Caveolin-1的表达情况（x±s）

注：FI：荧光指数

3 讨论

居女性各种疾病第6位、女性生殖系肿瘤第3位的卵巢肿瘤是女性最常见的肿瘤之一，其中卵巢上皮性肿瘤为卵巢肿瘤的57.4%。卵巢浆液性肿瘤在卵巢上皮肿瘤中居首位。女性生殖系肿瘤中致死率最高的卵巢癌，在女性死亡因素中5%，超过女性生殖系肿瘤病死率的50%以上。近年来，中国女性卵巢癌发病率和病死率逐年增加，严重威胁着女性的生命和健康。影响卵巢癌预后因素较多，癌症致死的最主要原因是肿瘤细胞的转移和扩散。肿瘤的增殖及凋亡失衡是肿瘤发生发展的重要原因之一。凋亡是一种多步骤多途径的细胞死亡性程序，受多种基因蛋白的调控。与肿瘤细胞凋亡密切相关的蛋白——凋亡抑制蛋白（IAPs）过度表达引起的细胞凋亡受阻与肿瘤的发生、发展有密切的关系。Caveolin-1蛋白表达与肿瘤的分化、增殖、凋亡、侵袭和转移密切相关。

Caveolin-1 是细胞膜的主要结构蛋白和标志蛋白，向内凹陷呈瓶颈状，直径50～100 nm的囊泡结构（Caveolae）。据其免疫性特征可将其分为Caveolin-1、Caveolin-2和Caveolae-3。其中多种细胞中Cacveolin-1广泛存在，发挥着重要细胞的生物学功能。Caveolin-1由178个氨基酸残基组成，编码基因定位于7q31.1区域，分子量22 kD，是许多信号分子的支架蛋白和负性调节蛋白，与肿瘤的发生、发展、浸润、转移等可能存在密切的关系。Caveolin-1在上皮细胞、脂肪细胞、纤维母细胞、平滑肌细胞和内皮细胞中表达丰富，但在发生肿瘤时会出现Caveolin-1表达异常，其异常取决于肿瘤细胞来源和各种生长因子的状态[1-2]。Caveolin-1的功能：①细胞内吞作用，作为胞膜上凹陷结构的Caveolae，可选择性吞噬细胞外大分子物质，并将其运输至细胞内特定区域[3]。有研究表明Caveolin-1被破坏后，细胞对特定蛋白内吞作用减弱，表明Caveolin-1在介导细胞的内吞作用中非常重要[4]。②发挥信号通路枢纽作用。通过脚手架区Caveolin-1能与多种信号蛋白结合，从而调节细胞信号转导，在脂质、胞膜交通及信号传导中发挥着重要枢纽作用[5]。

目前Caveolin-1在肿瘤发生过程中的机制尚不清楚，大多数实验支持Caveolin-1为候选的抑癌基因，与多种恶性肿瘤相关[6-9]。研究发现Caveolin-1在乳腺癌、宫颈癌、肺癌、胰腺癌和结肠癌等肿瘤组织中的表达量降低，而在食道癌、前列腺癌、膀胱癌和骨肉瘤中的表达却增高，并随肿瘤分化程度下降和侵蚀能力增强而表达升高[10-14]。在肿瘤中Caveolin-1究竟发挥抑癌还是促癌作用，与肿瘤细胞的来源及类型密切相关。本研究结果显示，卵巢浆液性囊腺癌中Caveolin-1蛋白的表达量降低，且随卵巢癌恶性程度的增强而表达降低。卵巢癌Caveolin-1蛋白平均FI值是（0.66±0.27），明显低于正常卵巢（1.00±0.16）和卵巢浆液性囊腺瘤（1.11±0.34），差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01），提示Caveolin-1与卵巢肿瘤的恶性程度有关，符合其在某些肿瘤中的负性调节作用，曾琼等[15]采用免疫组化法检测15例正常卵巢组织、38例卵巢上皮性良性肿瘤组织、20例上皮性交界性肿瘤组织和38例卵巢癌组织中Caveolin-1蛋白的表达水平，研究结果表明，Caveolin-1蛋白在人卵巢癌组织中的表达明显低于卵巢良性肿瘤及卵巢正常组织，表明其在卵巢癌的发生、发展中可能起到肿瘤抑制因子的作用，与本研究结果基本一致。本研究结果还表明，有淋巴转移的卵巢浆液性癌Caveolin-1蛋白平均FI值为（0.57±0.39），明显低于无淋巴转移的卵巢液性癌（0.94±0.31），差异有统计学意义（P < 0.05），提示Caveolin-1与卵巢浆液性癌的淋巴转移相关，这可能与Cveolin-1通过激活各种生长信号的传导，促进肿瘤细胞生长、增殖和转移有关。有研究显示，Caveolin-1在癌组织中表达越低，其淋巴结阳性率越高，患者的5年生存率越低[16]。本次研究中，Ⅲ期的卵巢浆液性癌Caveolin-1蛋白表达量平均FI值为（0.51±0.33），明显低于Ⅰ～Ⅱ期的卵巢浆液性癌（0.92±0.24），差异有统计学意义（P < 0.05），进一步证明其有抑制肿瘤生长和发展的作用。提示Caveolin-1与卵巢浆液性癌的临床分期、浸润及转移密切相关，在卵巢浆液性癌的发生、发展过程中发挥着重要作用。梁菲等[17]采用免疫组化法检测84例原发性卵巢上皮癌患者手术切除组织中Caveolin-1的表达水平，研究结果表明，Caveolin-1在卵巢癌组织中表达明显下调（P = 0.001），且其在卵巢癌组织中的表达率与组织学分级、FIGO分期、病理类型、腹水细胞学、大网膜转移及淋巴结转移显著相关（P < 0.05），与本研究结果一致。

综上所述，本研究结果表明Caveolin-1在卵巢浆液性癌浸润和转移过程中发挥着重要作用，对卵巢浆液性癌中Caveolin-1的表达变化进行评价对卵巢浆液性癌的诊断及预后判断意义重大，为卵巢浆液性癌的诊治提供了重要靶点。Caveolin-1在卵巢浆液性中的表达变化对评价患者的病情以及寻找有效的治疗药物具有重要的临床意义，可能成为卵巢浆液性癌未来的研究方向。

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（收稿日期：2014-09-20  本文编辑：任  念）