高庆田

(辽宁省丹东市兽药饲料监察所,辽宁省丹东 118002)

反相液相色谱法对饲料中添加金霉素的检测分析

高庆田

(辽宁省丹东市兽药饲料监察所,辽宁省丹东 118002)

金霉素是四环素族中抗菌能力最强的广谱抗生素，作为抗生素优点很多，但长期使用甚至滥用的弊端也越来越严重。为摸清本地生产、经营环节饲料中实际添加金霉素的状况，我所采用反相液相色谱法分4次跟踪监测2013、2014年本地区猪饲料34批次、鸡饲料47批次共计81批次样品，从检测结果分析目前饲料中添加金霉素实际情况。

反相液相色谱法 金霉素 检测 分析

1 材料

1.1 药品和试剂

所用试剂，除特别注明外均为分析纯。水为蒸馏水，色谱用水为超纯水。氢氧化钠，乙二酸溶液（0.01mol/L），盐酸溶液（4mol/L），乙腈（色谱纯），甲醇（色谱纯），提取液（丙酮+4mol/L盐酸溶液+水=13+1+6），金霉素对照品，中国药品生物制品检定所（批号30489-200202，纯度94.5%）。

1.2 仪器和设备

高速冷冻离心机（湘仪TGL-18G-C），雷磁PH计，恒温振荡器（YH-4），0.45um微孔滤膜，waters色谱柱，分析天平（岛津AUB120D），2695型高效液相色谱仪（配有2998二极管矩阵检测器，美国waters公司）。

1.3 样品

分别于2013年上、下半年、2014年上、下半年在4个县区生产环节、经营环节抽取猪配合、浓缩饲料34批次，鸡配合、浓缩饲料47批次。

2 流动相和标准品制备

2.1 流动相

乙二酸溶液（0.01mol/L）+乙腈（色谱纯）+甲醇（色谱纯）=10+3+2

2.2 金霉素标准液

使用感量0.00001g的电子天平准确称取金霉素标准品0.01323g，置于50ml容量瓶中，用提取液溶解并定容至刻度，制成浓度为250mg/L金霉素标准储备液，贮于4-6℃，有效期1周。用移液器准确移取4ml金霉素标准储备液于10ml容量瓶中，用提取液稀释至刻度，摇匀，制成浓度为100mg/L金霉素标准工作液，现用现配。

3 样品制备

3.1 样品粉碎

将采集的样品300g左右，用四分法缩至100g左右，粉碎通过0.45mm孔径筛，充分混匀，备用。

3.2 样品提取

使用感量0.1g分析天平秤取已粉碎试样1g，置于具塞锥形瓶中，加入100ml提取液，手摇2min，再用4mol/L盐酸溶液调pH至1.0～1.2，记录盐酸用量，作为稀释倍数，盖紧塞子，置恒温振荡器（110r/min）振荡30min。将离心后的上层液体倒入100ml离心管，3000r/min离心15min，用5ml一次性注射器取上层离心液，用0.45um滤膜过滤，滤液上机。

3.3 色谱条件

以乙二酸溶液（0.01mol/L）+乙腈（色谱纯）+甲醇（色谱纯）（10+3+2）为流动相，流动相流速1.0ml/min，色谱柱C18：柱长150mm、内径4.6mm、粒度5um，柱温室温（25℃），检测器为紫外检测器，检测波长375nm，进样量10ul。

4 结果分析

4.1 专属性考察

金霉素出峰保留时间在4.595min；空白添加金霉素出峰保留时间在4.596min；空白溶液在4.012min以后无检出峰。标准品金霉素吸收峰与杂质峰分离度大于1.5，符合要求。

4.2 回收率

81批次供试品分4次上机检测，每次上机附加1批次空白样品和1批次空白添加，空白添加量均为100mg/kg，加标回收率分别为85.2%、86.7%、84.9%、85.1%。

4.3 结果的计算

用计算公式X=C×P1×n×V／P／m／V计算金霉素含量（g/ L）。式中：X-试样中所含金霉素的质量（mg/kg）；P1-样品峰面积；n-样品稀释倍数（100+1.3.2消耗盐酸体积）；V-进样体积ul；p-标准品峰面积；m-样品称样量g；

4.4 结果统计

共检测81批次样品，其中80批次合格，1批次超标，合格率98.8%。

5 小结

本实验是按照GB/T19684-2005标准法进行操作，最低检出浓度为4mg/kg。按照标准实际操作，标准品出峰保留时间在4.595min，标准品峰型完整，分离完全，无分叉拖尾现象，标准品金霉素吸收峰与杂质峰分离度大于1.5，方法回收率在85%-87%之间，说明此标准适合配合饲料、浓缩饲料中金霉素检测。但经过几次检测，发现GB/T19684-2005标准有三处错误，一是金霉素标准储备液配置完成后，其浓度标准上写的是250g/L，实际应该为250mg/L；二是金霉素标准工作液不应该用超纯水稀释至刻度并定容，应该用提取液稀释至刻度并定容；三是金霉素标准工作液定容后，其浓度标准上写的是100g/L，实际应该为100mg/L。

6 讨论

本次抽检共检测81批次样品，仅1批次超标，合格率98.8%，高的合格率并不代表饲料质量绝对安全。对检测结果进一步分析发现，在被检的34批次猪饲料和47批次鸡饲料中，金霉素检出情况分别为9批次和4批次，检出率为26.5%和8.5%。如此高的检出率说明猪、鸡饲养环节添加使用金霉素非常普遍。从这一检测结果同时折射出，我国饲料行业抗生素使用频次非常高，甚至可以说达到滥用的程度。希望决策部门在药物添加剂批准时应该更加谨慎，对饲料企业的审查应该更加严格；饲料企业取得药物添加剂批准文号后应该增强社会责任意识，加强自律，严格按实际要求生产，尽可能地不添加抗生素；监管部门应该加大监管力度，严厉打击违法添加事件，防止抗生素滥用。