谢凤凤， 曾锦燕， 曾祥燕， 蔡 毅

（广西中医药大学，广西南宁530001）

毛蒟挥发油测定及其贮存期考察

谢凤凤， 曾锦燕， 曾祥燕， 蔡 毅*

（广西中医药大学，广西南宁530001）

目的水蒸汽蒸馏法提取广西产毛蒟中挥发油，GC-MS法测定挥发油中β-石竹烯含有量，并对其最佳贮存期进行考察。方法挥发油的分析色谱柱为HP-5MS（30 m×0.25 mm，0.25μm）；程序升温；载气为氦气；水杨酸甲酯为内标物。结果挥发油得油率在0.23%～1.64%之间，贮存1年后其下降率为22.68%，1.5年后下降率为41.63%；β-石竹烯在0.033 9～0.542 4μg范围内与峰面积呈良好的线性关系 （r=0.999 6），平均回收率为98.5% （RSD= 2.0%，n=6）；β-石竹烯含有量在31.363 8～338.957 2 mg/mL之间，一年后其下降率为35.03%，一年半后下降率为44.53%。结论建议毛蒟的贮存时间不超过1年。

毛蒟；挥发油；β-石竹烯；GC-MS；贮存期

毛蒟来源于胡椒科植物毛蒟Piper puberulum（Benth.）Maxim.全草，异名小毛蒟、小墙风、野芦子，为广西民间常用中草药［1］，主产于广西、广东、南海各沿海岛屿［2］，具有祛风驱寒除湿，行气活血止痛功效，主治风湿性腰痛、跌打损伤、脘腹疼痛等［3］。其气味浓烈，富含挥发油，而且其中非萜类成分 （尤其芳香族化合物）的比例较大［4］。现代研究表明，毛蒟具有明显的抗炎、镇痛和抗血小板聚集等药理作用［5-6］。本实验在完成生药鉴别［7-8］、挥发油成分［9］、质量标准初步研究［10］等工作的基础上，对产于广西各地毛蒟的挥发油及其中β-石竹烯含有量进行测定，并对其贮存期进行考察，为该植物进一步开发利用提供基础。

1 仪器与试药

6890N-5973N型GC-MS联用仪（美国Agi1ent公司）；BP211D电子天平 （德国赛多利斯公司）；HDM 2000型调温恒温电热套 （常州国华电器有限公司）；L16875B移液枪（德国Eppendorf公司）。

毛蒟采自广西各地，经广西中医药大学蔡毅教授鉴定为胡椒科植物毛蒟Piper puberulum（Benth.）Maxim.全草。β-石竹烯对照品（美国Sigma公司，批号22075-1MJ-F）。水杨酸甲酯和乙酸乙酯均为分析纯 （国药集团化学试剂有限公司）。

2 方法与结果

2.1 挥发油的提取 分别取各批次毛蒟药材110 g，剪成约1 cm小段，置于2 000 m L圆底烧瓶中，水蒸汽蒸馏法提取5 h。按2010年版 《中国药典》一部附录XD挥发油测定法测定，收集挥发油，无水硫酸钠干燥，离心10 min，得到毛蒟挥发油样品。所得挥发油体轻，浮于水面，气味浓烈。

2.2 内标物溶液的配制 精密量取水杨酸甲酯200μL，称重242.35 mg，乙酸乙酯定容至10 mL，摇匀，质量浓度为24.235 mg/mL，即得内标物溶液。

2.3 对照品溶液的配制 精密量取β-石竹烯对照品36μL，称重33.9 mg，加内标溶液10μL，乙酸乙酯定容至10 mL，摇匀，即得对照品溶液 （β-石竹烯质量浓度为3.390 mg/mL）。

2.4 供试品溶液的制备 精密量取不同产地毛蒟挥发油样品6μL，置于2 m L量瓶中，加内标溶液10μL，乙酸乙酯定容，即得供试品溶液。

2.5 色谱条件 HP-5MS石英毛细管色谱柱（30 m×0.25 mm，0.25μm）；程序升温，初始温度60℃，保持2 min，然后以10℃/min的速率升至110℃，并保持15 min，再以2℃/min的速率升至116℃，并保持6 min，随即以10℃/min的速率升至140℃，并保持8 min，最后以5℃/min的速率升至260℃，并保持2 min；载气为氦气（He）；体积流量1.0 mL/min；进样口温度250℃；检测器温度280℃；溶剂延迟3 min；进样量0.4 μL；分流比1∶1。

2.6 质谱条件 电离方式EI；电子能量70 eV；四级杆温度150℃；倍增电压1 247 eV；接口温度280℃；扫描范围m/z 45～550。然后，分别对对照品和供试品溶液 （MJ-4）进行扫描，结果见图1。

图1 总离子流图Fig.1 Total ion chromatogram

2.7 方法学考察

2.7.1 线性关系的考察 精密移取对照品溶液0.05、0.1、0.4、0.6、0.8 mL，置于2 m L量瓶中，分别按 “2.3”项下方法配制对照品溶液。再各取0.4μL进样，在 “2.5”项条件下进行测定，以对照品与内标浓度之比为X，对照品与内标物峰面积之比为Y，进行线性回归，回归方程为Y= 1.367 0X+0.124 8（r=0.999 6），β-石竹烯在0.033 9～0.542 4μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.7.2 精密度试验 精密吸取质量浓度为0.169 5 mg/mL的β-石竹烯对照品溶液0.4μL，在“2.5”项色谱条件下连续进样6次，测定峰面积值，计算出RSD为2.06%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.7.3 重复性试验 精密移取毛蒟供试品溶液（MJ-4）6份，各6μL，分别按 “2.4”项下方法配制供试品溶液，在 “2.5”项色谱条件下分析，计算出RSD为3.00%（n=6），表明方法重复性良好。

2.7.4 稳定性试验 精密移取同一份供试品溶液适量，分别于0、2、4、6、8、10 h进样0.4μL，在 “2.5”项色谱条件下分析，测定峰面积值，计算出RSD为2.07% （n=6），表明样品在10 h内保持稳定。

2.7.5 加样回收率试验 精密移取对照品28.85 mg，定容至2 mL；精密移取毛蒟挥发油样品溶液 （MJ-4）3μL，各6份；精密移取质量浓度为14.425 mg/mL的对照品溶液10μL（0.144 3 mg），分别加入6份挥发油样品溶液，按 “2.4”项下方法制备供试品溶液，在 “2.5”项色谱条件下进样分析。结果表明，β-石竹烯进样量在0.112 7～0.115 2μg之间，在线性范围之内，平均回收率为98.5%，RSD为2.0%（n=6），说明该方法准确度高，可作为毛蒟挥发油中β-石竹烯的测定方法，结果见表1。

表1 加样回收试验结果Tab.1 Results of recovery tests

2.8 样品测定 精密移取不同批次的毛蒟挥发油供试品，各6μL，按 “2.4”项下方法制备供试品溶液。再精密吸取0.4μL，注入气质联用仪，在“2.5”项色谱条件下进样，内标法计算各产地毛蒟挥发油中β-石竹烯含有量，结果见表2。

表2 9批毛蒟样品中挥发油得油率与β-石竹烯的含有量Tab.2 Volatile oil yields and contents ofβ-caryophyllene in 9 batches of Piper puberulum

2.9 考察不同贮存期对毛蒟挥发油的影响

2.9.1 挥发油得油率的变化 将上述毛蒟 （产地MJ-1～MJ-5）贮存一年及一年半后，取各产地药材100 g，按照 “2.1”项下方法提取挥发油。结果，一年后所得的挥发油体轻，浮于水面，与新鲜时相比，气味较淡、颜色偏深，而一年半后所得挥发油性状与一年后变化不大，5个产地挥发油得油率的变化见表3。

表3 不同贮存期下毛蒟挥发油得率的变化Tab.3 Change of volatile oil yields of Piper puberulum during different storage times

2.9.2 β-石竹烯含有量的变化 将“2.9.1”项下得到的挥发油在 “2.5”项色谱条件下进样，测得β-石竹烯含有量变化，见表4。

表4 不同贮存期下β-石竹烯的含有量变化Tab.4 Change ofβ-caryophyllene contents during different storage times

3 讨论

挥发油是一类由萜类 （单萜和倍半萜）、芳香族、脂肪族成分等组成的复杂化合物，常存在于具有明显气味的药材中，具有发散解表、芳香开窍、理气止痛、祛风除湿等作用，对心脑血管系统、中枢神经系统、呼吸系统、胃肠道系统等多方面疾病都具有疗效［11-13］。毛蒟具有祛风散寒除湿，行气活血止痛功效，其有效成分可能就是挥发油。实验发现，不同产地毛蒟挥发油中均含β-石竹烯，可作为控制其质量的指标性成分。

本实验采用内标法，对毛蒟挥发油中的β-石竹烯进行定量测定。在考察萘与水杨酸甲酯作为内标物时发现，水杨酸甲酯峰型好，对其他峰均无干扰，故选用水杨酸甲酯作为内标物，避免了因手动进样而导致的误差，确保其含有量测定的准确度。

从上述结果得出，各产地毛蒟挥发油的得油率在0.23%～1.64%之间，相差较大；β-石竹烯的含有量在31.3638～338.9572 mg/m L之间，差异也较大，而且与得油率不呈正比关系，均受产地、采收季节、贮藏时间等因素影响。

毛蒟属于胡椒科植物，挥发油含有量较高，在贮存一年后，其得油率下降了22.68%，β-石竹烯含有量下降了35.03%；一年半后，得油率下降了41.63%，含有量下降了44.53%。由于一年半内得油率与β-石竹烯含有量均迅速下降过半，故建议毛蒟贮存期为一年，且贮存时注意密闭避光。

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Determ ination of volatile oil in Piper puberulum and its proper storage tim e

XIE Feng-feng， ZENG Jin-yan， ZENG Xiang-yan， CAIYi*

（Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530001，China）

AIMTo determineβ-caryophy11ene content in vo1ati1e oi1 iso1ated from Piper puberulum by GCMS choose its proper storage time.M ETHODSThe ana1ysis of vo1ati1e oi1was performed on HP-5MS（30 m× 0.25 mm，0.25μm）co1umn with temperature-programming mode，carrier gas was He，and interna1 standard substance wasmethy1sa1icy1ate.RESULTSVo1ati1e oi1rate was between 0.23%and 1.64%.A year 1ater，its drop rate was 22.68%.After a year and a ha1f，itwas41.63%.There was a good 1inear re1ationship forβ-caryophy11ene during 0.033 9-0.542 4μg（r=0.999 6），the average recovery ratewas98.5%（RSD=2.0%，n= 6），the content ofβ-caryophy11ene was 31.363 8-338.957 2 mg/mL.A year 1ater，its drop rate was 35.03%. After a year and a ha1f，it was 44.53%.CONCLUSIONIt suggests that the storage time of P.puberulum shou1d be no 1ess than one year.

Piper puberulum；vo1ati1e oi1；β-caryophy11ene；GC-MS；storage time

R284.1

A

1001-1528（2015）08-1776-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.08.031

2014-11-04

广西自然科学基金创新研究团队项目 （2011GXNSFF018006）；广西 “2011协同创新中心”-壮瑶药协同创新中心项目 （桂教科研 ［2013］20号）；壮药毛蒟质量标准研究项目 （MZY2013063）；广西壮瑶药重点实验 （桂科基字 ［2014］32号）；广西重点学科 （壮药学）（桂教科研 ［2013］16号）

谢凤凤 （1989—），女，硕士，主要从事中药及民族药品种鉴别与开发利用。Te1：15177143553，E-mai1：15177143553@ qq.com

*通信作者：蔡 毅（1962—），男，教授，主要从事生药鉴别研究。E-mai1：Caiyi118@163.com