费毅琴， 杨 萍， 肖 凌， 侯俊杰， 聂 晶

（湖北省食品药品监督检验研究院，湖北武汉430064）

HPLC法快速筛查中成药中三七/人参茎叶代替根和根茎

费毅琴， 杨 萍， 肖 凌， 侯俊杰， 聂 晶

（湖北省食品药品监督检验研究院，湖北武汉430064）

目的建立HPLC法快速筛查中成药中以三七/人参茎叶代替根和根茎投料。方法采用HPLC法对含三七/人参的复方丹参片、三七片/胶囊、参苓白术散进行筛查，检测其中的人参皂苷Rb3，Rg1和Re，色谱柱为Agi1ent E-c1ipse P1us C18（5μm，4.6mm×250mm），流动相为乙腈-水梯度洗脱，体积流量为1.0mL/min，检测波长为203 nm。结果若检出人参皂苷Rb3，则为三七茎叶投料；若人参皂苷Rg1/Re比值小于5，则为人参茎叶投料。复方丹参片存在以三七/人参茎叶非法投料的现象。结论本法较原补充检验中TLC法准确度高，不存在假阳性的干扰。

三七；人参；茎叶；根和根茎；HPLC；快速筛查；中成药

三七功效散瘀止血、消肿定痛［1］，人参功效生津养血、安神益智等［1］，在许多中成药中作为君药或臣药使用。但近年来，在国家评价抽验监管过程中，浙江省药检所、北京市药检所、湖北省药检院均发现中成药中存在以人参/三七茎叶代替人参、三七根和根茎投料的现象。早在2008年，国家局颁布了复方丹参片药品检验补充检验方法和检验项目批准件［2］，设有三七茎叶皂苷的薄层检查项，可对该品种的三七投料进行控制。黄捷等用高效液相色谱法对建立的薄层色谱法鉴别复方丹参片中添加三七茎叶进行了验证，结果高效、准确［3］。但目前仅有针对单品种的检测方法，尚无直接针对人参/三七茎叶投料的通用检测方法。本实验针对这一监管问题，建立HPLC法快速鉴别非法添加人参/三七茎叶中成药的通用检测方法，并筛查了部分品种。该法简便、准确，可应用于含三七、人参的中成药的快速筛查。

1 仪器与试药

1.1 仪器 DIONEX 3000高效液相色谱系统；MS204S/Z、AG135电子天平 （梅特勒-托利多仪器上海有限公司），LC-350A型超声液中药处理机（济宁市中区鲁超仪器厂）。

1.2 试药 人参茎叶皂苷 （111553-200201）、三七茎叶皂苷 （110871-200201）、三七皂苷R1（110745-200517）、人参皂苷 Rg1（110703-200322）、Rb1（110704-200420）、 Rb3 （111686-200501）、 Re（110754-201123）、Rd（111818-201001）均购自中国食品药品检定研究院。复方丹参片、三七片/胶囊、参苓白术散均为国家评价抽验或省抽验样品；甲醇、乙腈为色谱纯 （TEDIA公司），实验用水为Mi11i-Q系统制备，磷酸为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性实验 Agi1ent Ec1ipse P1us C18色谱柱（5μm，4.6 mm×250 mm）；流动相为乙腈-水，梯度洗脱 （乙腈体积分数在0～5 min为19%，5～30 min为19%～20%，30～31min为20%，31～71 min为20%～40%）；体积流量1.0 mL/min；检测波长203 nm；进样量10 μL。理论板数按人参皂苷Rg1峰计算不低于2 000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取人参皂苷Rb3对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.4 mg的溶液；再取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含人参皂苷Rg10.2 mg、人参皂苷Re 0.05 mg的混合溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取固体制剂10倍最小单位量，研碎并混匀，加入甲醇25 mL，密塞，超声处理 （功率500 W，频率40 kHz）30 min，滤过，滤液作为供试品溶液。

2.2.3 模拟复方丹参制剂样品的制备 取处方中药材，按工艺制成模拟复方丹参制剂样品。

2.3 方法验证

2.3.1 专属性试验 取模拟标准工艺的复方丹参制剂样品，按 “2.2.2”项下提取，进样，即为正常复方丹参制剂供试品色谱图，通过比较模拟复方丹参制剂图 （图1A）、三七茎叶投料的复方丹参样品图 （图1D）和人参茎叶投料的复方丹参样品图 （图1F），可得出该法不存在假阳性的干扰。

2.3.2 耐用性试验 取同一供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，用Agi1ent Ec1ipse P1us C18（5μm，4.6 mm×250 mm）、Phenomenex Gemini-C18（5μm，4.6 mm×250 mm））、U1timate XB-SCX（5μm，4.6mm×250mm）三种色谱柱试验，结果一致。

2.3.3 判定结果 供试品色谱图中若检出人参皂苷Rb3，则为三七茎叶投料 （图1D）；若人参皂苷Rg1/Re比值小于5，则为人参茎叶投料 （图1G）。

2.4 样品检测 按照上述建立的方法对涉及三七、人参投料的3个中成药品种共计50批样品进行实验，结果见表1。

表1 测定结果Tab.1 Results of detection

3 讨论

周家明、黄跃进等对三七茎叶开发利用［4-8］中指出，三七茎叶的活性成分与三七相似，且对血液心血管等系统作用与三七根皂苷相似。但两者价格可能达到近10倍的差异。部分生产企业受利益驱使，又对自身产品质量的重视程度不够，基于成本，采用质量较差的原料，甚至有目的地故意减少三七或人参投药量，使成分含有量刚好达到法定标准的限度要求，或添加不同药用部位、同科植物以降低生产成本，以次充好。这种现象时有发生。

图1 参照物和样品的HPLC色谱图Fig.1 HPLC chrom atogram s of reference substances and sam p les

对复方丹参片中检出三七茎叶的样品，按补充检验方法［3］检验，结果与液相方法一致，见图2。本实验建立的HPLC快速鉴别非法添加三七/人参茎叶的中成药，较原补充检验中TLC法，准确度高，不存在假阳性的干扰，建议将此通用型检测方法纳入补充检验方法。

笔者仅对3个中成药品种进行检测，从检测结果可看出，复方丹参片存在以三七/人参茎叶非法投料的现象，而在三七片/胶囊、参苓白术散两个品种尚未发现，其他三七、人参投料的中成药品种是否存在此问题，值得继续关注。

在分离人参皂苷时，参考文献［9-14］考察乙腈-水、甲醇-水多种比例梯度洗脱，最终选择 “2.1”项的比例，能使人参皂苷Rg1、Re和Rb3达到理想的分离效果。

图2 三七茎叶皂苷TLC图Fig.2 TLC for notoginseng leaf triterpenes

参考文献：

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［3］黄 捷，覃红萍.复方丹参片中非法添加的三七茎叶的检测［J］.中国药业，2011，20（14）：32-33.

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［5］周家明，崔秀明，曾鸿超，等.三七茎叶的综合开发利用［J］.现代中药研究与实践，2009，23（3）：32-33.

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Rapid screening of stem s and leaves in the place of roots and rhizom es of Panax ginseng and Panax notoginseng by HPLC

FEIYi-qin， YANG Ping， XIAO Ling， HOU Jun-jie， NIE Jing
（Hubei Institute for Food and Drug Control，Wuhan 430064，China）

AIMTo estab1ish an HPLC method to rapid1y identify the stems and 1eaves in the p1ace of root and rhizome of Panax ginseng and Panax notoginseng，which shou1d not be added in Chinese patentmedicines.METHODSHPLCwas used to ana1yze ginsenoside Rb3，Rg1and Re in Compound Danshen Tab1ets，Sanqi Tab-1ets/Capsu1es and Shen1in Baizhu Powder.The co1umn was Agi1ent Ec1ipse P1us C18（5μm，4.6 mm×250 mm）with acetonitri1e-water as themobi1e phase in a gradientmanner.The detection wave1ength was set at203 nm with 1.0 mL/min of f1ow rate.RESULTSIf ginsenoside Rb3 was checked out it showed that stems and 1eaves of P. notoginseng was added in.If the specific va1ue of ginsenoside Rg1and Re was 1ess than five it showed that stems and 1eaves of Panax ginseng was added in.This examination revea1ed that there existed adu1teration in Compound Danshen Tab1ets.CONCLUSIONThe method ismore accurate than TLC in supp1ementa1 testing method，and exc1udes the possibi1ity of the fa1se positive.

Panax notoginseng；Panax ginseng；stems and 1eaves；roots and rhizomes；HPLC；rapid screening；Chinese patentmedicine

R927.2

A

1001-1528（2015）08-1730-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.08.021

2014-08-22

费毅琴，女，主管中药师，从事中药检验及质量标准研究。Te1：（027）87272513，E-mai1：pryci11a@163.com