刘春样，陈劼，李惠，王剑蓉

南京中医药大学附属医院江苏省中医院病理科，江苏南京 210029

胃肠间质瘤的免疫组化及基因突变分析

刘春样，陈劼，李惠，王剑蓉

南京中医药大学附属医院江苏省中医院病理科，江苏南京 210029

目的探讨胃肠间质瘤的免疫表型及c-kit和血小板源性生长受体α（PDGFRA）基因突变状态。方法应用免疫组化SP法检测110例GIST中Dog-1、CD117、CD34、SMA和S100的表达情况，应用直接测序法检测8例 GIST中c-kit及PDGFRA基因的突变状态。结果110例GIST中Dog-1、CD117、CD34、SMA、S100的阳性率分别为92.7%、93.6%、79.1%、44.5%、8.2%。8例GIST中c-kit突变率75%，PDGFRA突变率100%。结论免疫组化可区分大部分GIST病例，c-kit及PDGFRA突变检测对于Dog-1、CD117阴性病例有重要的鉴别诊断价值，并对靶向药物的应用有重要意义。

胃肠间质瘤；免疫组化；c-kit；血小板源性生长受体α基因

胃肠间质瘤（gastrointestinal stromal tumors，GISTs）是消化道最常见的间叶源性肿瘤，组织学上由梭形细胞、上皮样细胞、偶或多形性细胞排列成束状或弥漫状，由突变的c-kit或PDGFRA基因驱动[1-2]，可见于消化道的任何位置。过去，多数GISTs被诊断为平滑肌或神经源性肿瘤,1983年Mazur等首次提出GISTs的概念[3]。目前，GISTs的诊断依赖于结合组织形态学、CD117和DOG1免疫组化检测以及c-kit和PDGFRA基因突变的检测。该研究回顾性分析 2013年1月—2015年1月收集的南京中医药大学附属医院的110例GISTs的临床病理特点，并运用免疫组化方法检测Dog-1、CD117、CD34、SMA、S100的表达，其中8例包含c-kit、PDGFRA基因突变检测结果，探讨免疫组化结合基因检测对GISTs的诊疗价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集南京中医药大学附属医院自2013年1月—2015年1月经手术或内镜下切除的资料完整、诊断明确的原发性GISTs患者组织标本110例。

1.2 免疫组化检测

所有标本均经10%甲醛固定，常规石蜡包埋，切片。免疫组化采用SP两步法，试剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司。参照产品说明书进行实验，常规设置阳性和阴性对照。结果判定：阳性表达部位定位准确，Dog-1、CD117、CD34阳性细胞数平均≥10%为阳性。

1.3 基因突变检测

按照试剂盒（OMEGA，USA）说明提取石蜡组织中的基因组DNA，运用合适的引物PCR(聚合酶链式反应)扩增c-kit基因外显子9、11、13、17和PDGFRA基因外显子12、18。PCR产物经3%琼脂糖凝胶电泳确定后，用ABI 3500测序仪行序列分析。应用SeqScape v2.7软件判断基因突变情况。

2 结果

2.1 临床及病理特征

110例患者中，男56例，女54例。年龄22～89岁，中位年龄59岁。肿瘤发生部位：胃74例（67.3%），小肠21例（19.1%），结直肠6例（5.5%），食管6例（5.5%），胃肠外（腹膜后、盆腔）3例（2.7%）。根据文献[4]将肿瘤行危险度分级：极低组47例（42.7%），低组25例（22.7%），中等组10例（9.1%），高组28例（25.5%）。肿块最大直径范围0.3～20 cm，平均直径4.6 cm。110例患者中梭形细胞型92例（83.6%），上皮样型7例（6.4%），混合细胞型11例（10%）。

2.2 免疫组化结果

110例中CD117、Dog-1、CD34、SMA、S100的阳性例数分别为 102（92.7%）、103（93.6%）、87（79.1%）、49（44.5%）、9（8.2%）（表1）。CD117、Dog-1、CD34大部分为弥漫性表达。8例CD117阴性病例中，7例Dog-1阳性。SMA、S100大部分为局部或局灶阳性。

2.3 基因检测结果

8例GIST（中等风险1例，高风险7例；胃4例，小肠3例，直肠1例）行c-kit、PDGFRA基因突变检测，总体突变率100%（8/8）。其中c-kit突变率75%，PDGFRA突变率100%（表2）。c-kit突变结果提示4例应用伊马替尼可能有积极疗效，2例可能产生耐药或敏感性降低，2例疗效不明确。PDGFRA检测结果对伊马替尼疗效预测尚需要进一步临床观察。8例GIST中，6例CD117阳性。其中一例CD117、Dog-1双阴性，c-kit第9外显子插入突变。

表2 基因突变情况[n（%）]

表1 GISTs的免疫组化表达（%）

3 讨论

GISTs是消化道最常见的间叶源性肿瘤，在中国，估计年发病率约为10-20/100万，其中10%～30%为恶性。本研究中，中高等风险组占34.6%。GIST可发生于消化道任何部位，部分患者可发生于消化道外[5]。该研究中，胃部发生率最高（67.3%），小肠其次（19.1%）。

GISTs具有非定向分化特征，因不同瘤体的组织分化程度存在差异，故其表现出的形态学以及组织学特征也不同。该研究中梭形细胞型占83.6%，上皮样型占6.4%，混合细胞型占10%。在组织学上，GISTs与其他间叶源性肿瘤相似，难以与平滑肌肿瘤、神经纤维瘤等鉴别。免疫组化诊断以往依赖CD117、CD34的表达。近年来，随着研究的进展，DOG1已成为GISTs诊断的重要分子标记物[6]。在该研究的110个病例中，CD117、Dog-1、CD34的阳性率分别为92.7%、93.6%、79.1%，在8例CD117阴性的病例中，7例Dog-1阳性。CD117、Dog-1、CD34三者联合应用可区分出绝大部分的GISTs。

国内学者研究[7-8]显示，伊马替尼辅助治疗在中高危GIST患者中获益。因此，中高风险病人应常规行c-kit、PDGFRA基因检测以筛选是否适用靶向治疗。该组38例中高风险病例中有21.1%行基因检测，c-kit突变率 75%，PDGFRA突变率100%。一例CD117、Dog-1双阴性GIST存在c-kit第9外显子突变。C-kit突变结果提示4例应用靶向药物可能有积极疗效，1例可能产生耐药，1例敏感性降低，2例野生型疗效不明确。PDGFRA突变对伊马替尼疗效预测尚需要临床进一步观察积累。

GISTs的发病机制、生物学行为复杂，临床诊疗存在难点。常规染色联合免疫组化可提高GISTs的诊断准确率，在免疫组化无法确诊的情况下，行c-kit、PDGFRA基因检测有助于GISTs的诊断，并为靶向治疗提供参考。

[1]Hirota S,IsozakiK，Moriyama Y，etal.Gain-of-functionmutationsof c-kit in human gastrointestinalstromal tumors[J].Science，1998，279(5350):577-80.

[2]Heinrich MC，Corless CL，Amette Duensing，et al.PDGFRA activatingmut ationsin gastrointestinalstromal tumors[J].Science，2003（299）:708-710.

[3]Mazur MT,Brent Clark H.Gastric stromal tumors：Reappraisal of hist ogenesis[J].Am JSurg Pathol，1983，7(6):507-520.

[4]CSCO胃肠间质瘤专家委员会.中国胃肠间质瘤诊断治疗专家共识：2011年版[J].临床肿瘤学杂志，2011,16(9):836-844.

[5]陈吉添．胃肠道间质瘤72例临床病理及免疫组化分析[J].广西医学，2012，34(12):1687-1689．

[6]Novelli M,Rossi S,Rodriguei-justo M,et al.DOG1 and CD117 are the antibodies of choice in the diagnosis ofgastrointestinal stromal tumours[J]. Histopathology，2010，57（12）：259-270.

[7]Zhan WH，China Gastrointestinal Cooperative Gro.Efficacy and safety of adjuvant post-surgical therapy with imatinib in patients with high risk of relapsing GIST[J].ASCOMeeting Abstracts，2007（25）:10045．

[8]Li J，J.F.Gong，A.W，wu，et al．Post-operative imatinib in patients with intermediateorhigh riskgastrointestinalstromaltumour[J].Euro JSurOncol，2011，37(4):319-324．

Immunohistochem istry Features and M utation Status of GISTs

LIU Chun-yang，CHEN Jie，LIHui，WANG Jian-rong
Department of pathology,Affiliated Hospital of Nanjing university of TCM,Jiangsu Province Hospital of TCM,Nanjing,Jiangsu Province,210029 China

ObjectiveTo investigate the immunohistochem istry (IHC)features and genemutation status of c-kit and PDGFRA of GIST.M ethodsThe expression of DOG1,CD117,CD34,SMA and S-100 was detected by immunohistochemicalmethod in 110 cases of GIST.Genemutation status of c-kit and PDGFRA were detected by direct sequencing in 8 cases of GIST.Resu ltsIn the patients of 110,the positive rates of DOG1,CD117,CD34,SMA and S-100 were 92.7%,93.6%,9.1%,44.5%and 8.2%respectively.Gene mutation rates of c-kit and PDGFRA was 75%and 100%respectively in 8 cases.ConclusionIHC can distinguish most GISTs cases,mutation test of c-kit and PDGFRA is important for differential diagnosis in DOG1 and CD117 negative patients,and have significance to guide the application of targeted drug.

Gastrointestinal stromal tumors;Immunohistochem istry;C-kit;PDGFRA

R735

A

1674-0742（2015）07（b）－0008-02

2015-04-17）

刘春样（1985.10-），女，江苏宿迁人，硕士，住院医师，研究方向：肿瘤病理及分子病理。

王剑蓉（1974.6-），女，江苏高邮人，硕士，副主任医师，研究方向：消化道病理及分子病理。