易帝玮，肖 榕，赵云龙，2，李敦松，张古忍*

(1.中山大学有害控制与资源利用国家重点实验室，广州 510275;2.广东省农业科学研究院植物保护研究所/广东省植物保护新技术重点实验室，广州 510460)

赤眼蜂因其资源丰富、分布广泛和对害虫控制作用显著等特点，被国内外广泛应用于多种农林害虫的生物防治，已成为应用范围最广、应用面积最大、防治害虫对象最多的一类天敌(王承纶等，1998;Wang et al.，2014)。赤眼蜂得以大面积推广应用的根本原因在于能利用中间寄主进行工厂化繁育。目前生产上应用较普遍的中间寄主包括麦蛾Sitotroga cerealella (Oliver)、米蛾Corcyra cephalonica (Stainton)、柞 蚕 Antheraea pernyi(Guerin-Meneville)、地中海粉螟 Anagasta kuehniella (Zeller)等(陈红印等，2009)。

在赤眼蜂的工厂化繁育工程中，常常需要对中间寄主卵进行冷藏，以满足生产的需要。但冷藏后的中间寄主卵是否影响赤眼蜂的质量，是生产者和应用者需要关注的问题。据报道，地中海粉螟卵在0.7℃下冷藏3个月未影响其对赤眼蜂的适合性(刘树生和施祖华，1996);对于国内广泛应用的米蛾卵，冷藏是否影响其对赤眼蜂的适合性，已有许多报道(邱式邦等，1980;胡振尉和徐企尧，1983，1985;包建中和陈修浩，1989;刘志诚等，2000;马英德等，2001;张国红等，2008;袁曦等，2013)。如马德英等(2001)认为在0-5℃条件下冷藏米蛾卵时间不宜超过3 d，否则将影响赤眼蜂的产卵寄生;张国红等(2008)则发现随着米蛾卵冷藏(4℃)天数的增加，松毛虫赤眼蜂Trichogramma dendrolimi Matsumura 和螟黄赤眼蜂T.chilonis Ishii的寄生力呈下降趋势，冷藏米蛾卵不宜超过15 d，超过50 d 后两种赤眼蜂基本不能寄生;而袁曦等(2013)则认为在相同冷藏温度下，冷藏环境的相对湿度会影响米蛾卵质量。根据报道文献所给出的信息，尚不足以分析不同研究结果之间存在如此大差异的原因，但共同点是以被寄生的米蛾卵数作为寄主适合度进行差异评价，而对于冷藏米蛾卵是否影响子代赤眼蜂的质量则鲜有报道。事实上，在田间真正发挥生物防治作用的是利用米蛾卵繁育的子代赤眼蜂，子代赤眼蜂的质量直接影响其对目标害虫的控制效果。因此，对子代赤眼蜂质量的评价在大面积推广赤眼蜂进行害虫生物防治的应用中尤为重要。

螟黄赤眼蜂在中国华南地区 (李敦松等，2013;袁曦等，2013)和印度(Mukunthan，2006;Sithanantham et al.，2013)被广泛应用于甘蔗螟虫和亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis (Guenée)等的生物防治，米蛾卵也是工厂化繁育螟黄赤眼蜂的主要替代寄主，且常常需要冷藏以满足生产的需要。通常，子代雌蜂的平均寿命、存活率、寄生量和生命表参数等反映了赤眼蜂种群的基本特征和对目标害虫的控制潜能，是赤眼蜂产品质量的重要指标(Cerutti and Bigler，1991;Greenberg，1991;van Lenteren，1991;Bigler，1994)。因此，本文通过检测子代螟黄赤眼蜂上述参数的变化，以期评价冷藏米蛾卵对子代螟黄赤眼蜂质量的影响，为大面积推广螟黄赤眼蜂进行害虫生物防治的研究提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 昆虫饲养

米蛾和螟黄赤眼蜂均为广东省农业科学研究院植物保护研究所生物防治研究室养虫室长期饲养的种群。

米蛾的饲料为麦麸(张玉琢等，1991)，成虫羽化后每日收集米蛾卵，剔除杂物后过40 目筛，获得清洁、正常的米蛾卵，然后单层铺于托盘上，在单管40 W 紫外灯下垂直20 cm 处，照射20 min，杀死卵内米蛾胚胎(袁曦等，2013)。

螟黄赤眼蜂为养虫室利用米蛾卵长期繁育的品系，蜂种保存在玻璃圆筒 (长30 cm，直径15 cm)内，两端以橡胶塞塞住两端，橡胶塞外裹以棉布，密封筒口防止赤眼蜂外逃的同时增加透气性。将新鲜杀胚后的米蛾卵用无毒白乳胶粘在硬纸板的一面上制成卵卡(120 mm×50 mm)，将新卵卡放入蜂种繁育筒内24 h 后取出，保存在圆底玻璃试管(外径20 mm，长250 mm)中，用棉塞塞住管口，直到成虫羽化。养虫室温度26 ±1℃，RH 75 ±5 %，光照14L∶10D。

1.2 米蛾卵的冷藏

将上述制成卵卡(120 mm×50 mm)，并放入保鲜盒中，贮存于4℃冰箱中。每隔15 d 取出一批卵卡供赤眼蜂寄生，比较米蛾卵经冷藏不同天数后对所产生赤眼蜂质量的影响。卵卡的冷藏时间分别为0 (新鲜卵，对照)、15、30、45、60 d。

1.3 冷藏米蛾卵对子代赤眼蜂质量的影响

待保存在圆底玻璃试管中的螟黄赤眼蜂羽化后，将冷藏不同天数的米蛾卵卡放入试管中寄生，24 h 后取出，吹去卵卡表面的赤眼蜂后放入另一相同大小的圆底玻璃试管内，用棉塞塞住管口，直到成虫羽化。

成虫羽化24 h 后，挑选30 头健壮雌蜂，分别放入30个小玻璃试管(外径10 mm，长80 mm)中，以脱脂棉球塞住管口，油性笔编号标记每条试管。每个试管放入一含有约200 粒新鲜米蛾卵的卵卡(11 mm×0.5 mm)，用解剖针在卵卡边缘点一小滴15%的蜂蜜水。每隔24 h 更换新鲜卵卡，直至雌蜂死亡，记录每头雌蜂的死亡时间。每天换出的卵卡分别保存在不同的小试管中，并与母蜂所在的试管对应编号。待赤眼蜂羽化后，在双目镜下统计每个小试管中的黑卵数、雌雄成虫数和未羽化数，并据此计算以下生命表参数:净生殖率(R0)，内禀增长率(rm)，周限增长率(λ)，平均世代时间 (Tc)和种群倍增时间 (T2)(Birch，1948)。试验在26 ±1℃，RH 75 ±5 %，光照14L∶10D 条件下进行。

1.4 数据分析

成虫寿命是指子代雌蜂存活的平均天数，寄生量为被寄生的米蛾卵数。

羽化率(%)=(羽化的成虫数/寄生量)×100

性比(%)=(雌蜂数/羽化的成虫数)×100

各参数如寿命、寄生量、羽化率和性比等参数的增加率，以冷藏米蛾卵0 d的子代雌蜂为对照，经冷藏15、30、45 d 后产生的子代雌蜂为处理，计算公式为:增加率(%)=［(处理-对照)/对照］× 100，正数表示增加，负数表示减少。

各处理雌性寿命和寄生量经对数log10(x +1)转换、羽化率和性比经反正弦函数arcsin 转换后，进行单因素方差分析 (ANOVA)(SAS Institute Inc.，1989)。

2 结果与分析

经紫外杀胚的米蛾卵在4℃冷藏60 d 后没有子代赤眼蜂的产生，不能作为螟黄赤眼蜂的替代寄生。总体来说，随着米蛾卵冷藏的天数增加，子代雌蜂平均寿命呈下降的趋势(F3，116=3.303，P=0.023)(表1)。

寄生冷藏米蛾卵15 d 和30 d的子代赤眼蜂雌虫平均寿命都有所缩短，分别为4.53 d 和5.00 d，与未冷藏的米蛾卵相比分别缩短了24.88% 和17.08%，但差异不显著;但冷藏米蛾卵45 d的子代雌蜂寿命为3.63 d，缩短了39.80%，显著短于未冷藏的米蛾卵(P＜0.05);而冷藏米蛾卵15、30、45 d 之间，子代雌蜂寿命差异不显著。子代雌蜂的存活率曲线(图1)也反映了冷藏米蛾卵对子代雌蜂寿命的影响，即随着冷藏米蛾卵时间的延长，子代雌性赤眼蜂存活的天数减少。

表1 米蛾卵的冷藏对F1代雌蜂寿命与寄生量影响Table 1 Influence of cold storage of Corcyra cephalonica eggs on the longevity and parasitization of offspring females (F1)

图1 冷藏米蛾卵对子代雌蜂存活率的影响Fig.1 Influence of cold storage of Corcyra cephalonica eggs on the survival rate of F1females

米蛾卵的低温冷藏时间对F1代单雌蜂寄生量有显著影响(F3，116=5.090，P=0.002)(表1)。寄生被冷藏15 d 米蛾卵的子代赤眼蜂雌虫平均寄生量有所降低，为70.63 粒，但与未冷藏的米蛾卵相比差异不显著;冷藏米蛾卵30 d 处理中的子代赤眼蜂雌虫寄生量有所上升，为84.04 粒，随与对照相比增加了17.42%，但也未达到显著差异水平;当冷藏米蛾卵达45 d 时，子代雌蜂寄生量为51.37 粒，与对照相比显著减少了28.22%;冷藏米蛾卵15、30 d 处理之间，子代雌蜂寄生量无显著差异，但均显著低于45 d 处理中的寄生量。冷藏米蛾卵0、15、30、45 d的子代雌蜂在前4 天内的寄生量分别达到总寄生量的83.82%、94.95%、88.65%和90.99%，即子代雌蜂在前4 天已将80%以上的卵产出;但经过冷藏米蛾卵后，子代雌蜂在前4 天的产卵速度明显快于未经冷藏的米蛾卵。

米蛾卵的低温冷藏时间对F2 代蜂羽化率(F3，116=13.409，P=0.000)与雌性比(F3，116=8.134，P=0.000)有显著影响(表2)。冷藏米蛾卵15 d 处理中的子代赤眼蜂雌虫后代羽化率最高，为92.15%，与未冷藏的米蛾卵相比显著增加了10.29%;冷藏米蛾卵30 d 和45 d的子代赤眼蜂雌虫后代羽化率均有所降低，分别为74.12% 和81.24%，与未冷藏的米蛾卵相比分别降低了11.29%和2.76%，但差异不显著;而冷藏米蛾卵30、45 d 处理之间，子代雌蜂后代羽化率差异不显著，但均与冷藏米蛾卵15 d 子代雌虫后代羽化率有显著差异。

表2 米蛾卵的冷藏对F2代蜂羽化率与雌性率的影响Table 2 Influence of cold storage period of Corcyra cephalonica eggs on the emergence rate and female rate of F2

冷藏米蛾卵15 d的子代赤眼蜂雌虫后代性比最高，为74.46%，与未冷藏的米蛾卵相比增加了9.66%，但差异不显著;冷藏米蛾卵30 d 和45 d的子代赤眼蜂雌虫后代性比均有所降低，分别为57.82%和52.59%，与未冷藏的米蛾卵相比分别降低了14.12%和22.55%，但差异也不显著。冷藏米蛾卵30、45 d 处理之间，子代雌蜂后代性比差异也不显著，但均与冷藏米蛾卵15 d 子代雌虫后代性比有显著差异。从子代雌蜂前4 d 所产的雌性率来看，冷藏米蛾卵后子代雌蜂的产雌率随着存活天数的增加而下降明显(图2)。

图2 冷藏米蛾卵对子代雌蜂产雌率的影响Fig.2 Influence of cold storage of Corcyra cephalonica eggs on the female rate of F2

冷藏米蛾卵同样影响了子代螟黄赤眼蜂种群的生命表参数(表3)。冷藏米蛾卵降低了子代雌蜂种群的增长速率，延长了种群世代平均周期和种群倍增时间;除冷藏米蛾卵15 d的净增殖率(R0)和内禀增长率(rm)略高于未经冷藏的米蛾卵外，净增殖率(R0)、内禀增长率(rm)和周限增长率(λ)都随着冷藏米蛾卵天数的增加而降低，尤其经冷藏米蛾卵45 d 后下降明显;相反，世代平均周期(Tc)和种群倍增时间(T2)则随着冷藏米蛾卵天数的增加而延长。

3 结论与讨论

冷藏米蛾卵影响了子代螟黄赤眼蜂的质量，导致子代雌性平均寿命、寄生量、F1代雌蜂生命表参数均有不同程度的下降。但有趣的是，冷藏米蛾卵30 d的子代雌蜂寄生量、冷藏15 d的子代雌蜂羽化率和性比均高于未冷藏米蛾卵，其中冷藏15 d的子代雌蜂羽化率还达到差异显著的程度。可能的原因是，米蛾卵并不是螟黄赤眼蜂的天然寄主昆虫，卵壳表面可能含有驱避螟黄赤眼蜂雌蜂的化学成分，经冷藏一段时间后化学成分挥发或降解;同时，卵内物质经过冷藏后可能产生了更适合赤眼蜂寄生的变化，从而使得螟黄赤眼蜂雌蜂更喜欢在经冷藏过一段时间后的米蛾卵上产卵。已有研究表明，烟青虫Helicoverpa assulta Guenée 和亚洲玉米螟的性外激素成分对螟黄赤眼蜂雌蜂具有引诱作用(Boo ＆ Yang，2000)。从欧洲玉米螟蛾鳞片上分离出来的利它素也会影响欧洲玉米螟赤眼蜂的寄主栖息定位 (Shu et al.，1990)，另外，植物释放出的挥发性物质也会影响螟黄赤眼蜂雌蜂的寄主搜索行为(Romeis et al.，1997)。因此，在后续研究中将针对米蛾卵壳表面挥发性化学物质和冷藏后卵内营养物质的变化规律进行分析，以检验经过紫外杀胚的米蛾卵经冷藏后对繁育赤眼蜂的寄主影响的机制。研究结果进一步证实，冷藏米蛾卵30 d的子代雌蜂高寄生量更有利于目标害虫的控制，而冷藏米蛾卵15 d的子代赤眼蜂更有利于田间种群的建立。

表3 米蛾卵的冷藏对螟黄赤眼蜂后代生命表参数的影响Table 3 Influence of cold storage of C.cephalonica eggs on the life table parameters of T.chilonis offspring

在规模化生产中，常常用生命表参数评价赤眼蜂质量好坏的(Hassan and Zhang，2001)，除此以外，羽化率、雌蜂平均寿命、雌性比例也是衡量赤眼蜂田间释放后控制害虫能力的主要指标(Hassan and Zhang，2001;Lundgren and Heimpel，2003)，同时，寄生卵量也常常用来评估低温冷藏卵作为赤眼蜂替代寄主的适合度 (Qiu et al.，1980;Hu and Xu，1983;Bao and Chen，1989;Liu et al.，2000;Ma et al.，2001;Zhang et al.，2008;Yuan et al.，2013)。根据本文的研究结果，冷藏寄主卵影响了螟黄赤眼蜂子代种群的生命表参数，种群增长指数随着冷藏时间增加而降低，反之种群世代周期和倍增时间则延长。

螟黄赤眼蜂不能寄生冷藏60 d 经紫外光杀胚的米蛾卵，这与张国红等(2008)认为冷藏米蛾卵不宜超过50 d的研究结果基本一致，但张国红等(2008)同时认为采用米蛾卵繁殖赤眼蜂时，在4℃冰箱中贮存米蛾卵不宜超过15 d。根据本文的研究结果，在4℃条件下冷藏至45 d 时，子代雌蜂平均寿命、寄生量、羽化率和性比与未冷藏米蛾卵相比，分别下降了 39.80%、28.22%、2.76%和22.55%，说明在生产中如果出现寄主卵短缺的情况，即使冷藏45 d的米蛾卵还可以在生产上应用，只是需要增大赤眼蜂的释放量。此外，有人认为米蛾卵在0-5℃条件下冷藏米蛾卵时间不宜超过3 d (马德英等，2001)，这可能是在冷藏米蛾卵前没有进行杀胚处理的原因。此外，在螟黄赤眼蜂的生产过程中，不能使用冷藏超过60 d 米蛾卵作为替代寄主。

综上所述，长时间冷藏米蛾卵影响了子代螟黄赤眼蜂的质量，具体表现在子代雌蜂的平均寿命、寄生量、羽化率、性比、净增值率(R0)、内禀增长率(rm)和周限增长率等(λ)均不同程度下降，世代平均周期(Tc)和种群倍增时间(T2)不同程度延长;在螟黄赤眼蜂的繁育中，经紫外杀胚处理的米蛾卵冷藏时间超过45 d 后需要审慎对待;冷藏过程中米蛾卵壳表面挥发性化学物质和卵内营养成分的变化是值得进一步研究的问题。

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