高玉红，李晓云，石艳丽，宋铭忻*

(1.东北农业大学动物医学学院，哈尔滨150030;2.黑龙江职业学院，哈尔滨150080)

1993 年，美国辉瑞(Pfizer)公司研发人员利用突变的阿维链霉菌研制合成更新一代的优秀的大环内酯类抗寄生虫药物—多拉菌素(Doramectin)［1］。这种新研制的多拉菌素是阿维菌素的第二代产品，其合成的机理是在阿维菌素的第25位C上引入一环己烷基而形成的［2］，多拉菌素与阿维菌素相比其优越性在于消除率低，血药浓度维持的时间较长，生物利用度比阿维菌素更高［1－3］。多拉菌素具有内外兼杀的特性，对体内线虫以及体外的节肢昆虫均具有良好的驱杀作用［4－5］。以往多拉菌素的剂型多以注射剂为主，在临床应用时会对动物造成不同程度的刺激性［6］。我室研制出多拉菌素浇泼剂，此种剂型能够延长药物对寄生虫的作用时间从而增强药物的疗效［7］。多拉菌素浇泼剂对家兔无任何毒性反应，对豚鼠皮肤无刺激性反应，不产生致敏作用［8］。自20世纪60年代以来，国内外先后用噻苯咪唑、甲苯咪唑等多种苯并咪唑药物对动物的旋毛虫病进行治疗试验，试验结果表明，这类药物对旋毛虫的各个生活时期的虫体都有不同程度的杀灭效力。丙硫咪唑对线虫有选择性与不可逆性抑制其摄取葡萄糖的作用，致使虫体内源性糖原耗竭，引起死亡［9］。大鼠、小鼠和猪的试验结果揭示，丙硫咪唑对旋毛虫成虫、移行幼虫及包囊幼虫均有很好的杀虫效果［10］。

目前，国内外关于多拉菌素对家畜体内外线虫病治疗的疗效报道已有很多，但对多拉菌素浇泼剂治疗旋毛虫(Trichinella spiralis)的研究国内外尚未见报道。本试验拟用多拉菌素和丙硫咪唑对人工感染旋毛虫的小鼠进行治疗，观察其驱虫效果，为该药进一步的广泛应用于家畜提供理论与试验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药物 多拉菌素浇泼剂，由东北农业大学动物医学学院寄生虫室自行研制。丙硫咪唑片，上海家畜寄生虫病研究所供。

1.1.2 动物 35只清洁级小鼠，哈尔滨兽医研究所提供。随机抽检符合清洁级要求。

1.1.3 虫种 旋毛虫:来自波兰家猪体内(编号ISS3)，小鼠中传代。

1.1.4 主要试剂及仪器 胃蛋白酶 活力单位1∶3000，欧瑞德公司;盐酸(含量36% ～38%，比重1.19)，欧瑞德公司;贝尔曼氏装置东北农业大学寄生虫实验室。

1.2 方法

1.2.1 分组 清洁级健康昆明小白鼠35只，体重18～22 g，根据旋毛虫的3个发育时期和给药的不同时间将35只小鼠随机分为3个试验组和一个阳性对照组，第Ⅰ组为成虫组，第Ⅱ组为新生蚴组，第Ⅲ组为包囊幼虫组;每个试验组根据药物品种将其分为2个药物组:多拉菌素药物组和丙硫咪唑药物组。第Ⅳ组为阳性对照组，以上各组每组5只，感染剂量均为200蚴/只。

1.2.2 旋毛虫肌幼虫的收集 取一只感染了旋毛虫的小鼠，断颈处死，除去鼠皮以及内脏器官，并且去除各种筋膜以及脂肪成分，称重以后放于加入适量人工消化液(人工消化液由1%胃蛋白酶加1%盐酸组成)的捣碎机中，捣碎15 s，将捣碎机中的肉液转入定量容器中，补充加入消化液至使肉液比为1∶20;在37℃的温箱中作用3 h，期间搅拌5～10次，使其消化完全;孵育结束后使消化混合液通过60目(孔径300 μm)网筛，滤液进入小型白色瓷盆中;沉淀洗涤2～3次，每次沉淀20 min，直到滤液变为澄清为止;小心的倾去上清液，剩下100 mL左右液体注入贝尔曼氏装置中收集旋毛虫肌幼虫。

1.2.3 各组的给药时间和剂量

1)第Ⅰ组(10只):感染剂量:200蚴/只，分为2个小组，第1小组5只，小鼠感染旋毛虫2 d后每只小鼠一次经皮给药5 mg·kg－1·bw－1多拉菌素浇泼剂，第2小组5只，小鼠感染旋毛虫2 d后每只每天灌胃丙硫咪唑 30 mg·kg－1·bw－1，连续 5 d。

2)第Ⅱ组(10只):感染剂量:200蚴/只，分为2个小组，第1小组5只，小鼠感染旋毛虫7 d后每只小鼠一次经皮给药5 mg·kg－1·bw－1多拉菌素浇泼剂，第2小组5只，小鼠感染旋毛虫7 d后每只每天灌胃丙硫咪唑 30 mg·kg－1·bw－1，连续 5 d。

3)第Ⅲ组(10只):感染剂量:200蚴/只，分为2个小组，第1小组5只，小鼠感染旋毛虫35 d后每只小鼠一次经皮给药5 mg·kg－1·bw－1多拉菌素浇泼剂，第2小组5只，每只小鼠感染旋毛虫35 d后每只每天灌胃丙硫咪唑30 mg·kg－1·bw－1，连续5 d。

4)第Ⅳ组(5只):感染旋毛虫组 小鼠感染剂量:200蚴/只。

各组小鼠于感染后50 d后一起剖杀，取膈肌压片镜检，观察多拉菌素治疗组和丙硫咪唑治疗组各个时期旋毛虫的形态变化。并用消化法计算对照组每克肌肉平均幼虫数(LPG)和试验组每克肌肉平均残存幼虫数，按常规方法计算杀虫率。

取膈肌压片镜检，观察旋毛虫幼虫包囊及虫体内部结构在药物作用下发生的形态学变化。以包囊内出现虫体结构破坏、模糊不清、虫体断裂、虫体钙化及虫体被吸收遗留空包囊和包囊变形、缩小、破损等作为判定旋毛虫幼虫在药物作用下死亡损伤的标志。

2 结果与分析

各组小鼠于感染后50 d后一起剖杀，取膈肌进行压片且镜检。观察旋毛虫幼虫包囊及虫体内部结构在药物作用下发生的形态学变化。以包囊内出现虫体模糊不清、结构破坏、虫体钙化、虫体断裂及虫体被吸收遗留空包囊和包囊缩小、变形、破损等特征作为判定幼虫在药物作用下死亡损伤的标志(图1－图7)。

图1 多拉菌素浇泼剂治疗成虫

图2 丙硫咪唑治疗成虫

图3 多拉菌素浇泼剂治疗新生蚴

图4 丙硫咪唑治疗新生蚴

图5 多拉菌素浇泼剂治疗包囊期幼虫

图6 丙硫咪唑治疗包囊期幼虫

图7 空白对照组

由图可见，多拉菌素浇泼剂治疗成虫组和治疗新生蚴组小鼠的膈肌内仍有存活的旋毛虫存在，而丙硫咪唑治疗成虫组和治疗新生蚴组小鼠的膈肌内没发现有旋毛虫包囊。多拉菌素浇泼剂治疗包囊期幼虫组小鼠膈肌内的小部分旋毛虫包囊结构模糊不清，虫体变性，出现颗粒状不透明物，钙化成灰黑色椭圆形团块。丙硫咪唑治疗组旋毛虫虫体变性，出现颗粒状且不透明物，包囊结构模糊不清，大部分虫体断裂、钙化成灰黑色椭圆形团块。对照组小鼠的肌幼虫包囊完整透明，结构清晰，内有卷曲的旋毛虫幼虫1～2条。

用消化法计算对照组每克肌肉平均幼虫数(LPG)和试验组每克肌肉平均残存幼虫数。按常规方法计算驱虫率及形态学变化(表1)。

表1 多拉菌素浇泼剂和丙硫咪唑对小鼠旋毛虫不同发育期的驱虫效果 (n=5)

丙硫咪唑按30mg/kg连续治疗5 d，对小鼠旋毛虫的成虫、移行幼虫和包囊幼虫均有100%的杀虫效果。多拉菌素浇泼剂按5 mg·kg－1·bw－1给药一次，对旋毛虫成虫期、移行幼虫期和包囊期幼虫均有治疗作用，实验结果表明，多拉菌素浇泼剂对旋毛虫成虫的杀虫效果最好，杀虫率可达99.5%，其次是旋毛虫的移行幼虫期，杀虫效果达96.62%，而对包囊期的幼虫杀虫效果最差，只有31.98%。在治疗过程中未见小鼠有不良反应。

3 结语

研究结果表明，多拉菌素治疗小鼠旋毛虫的成虫期和新生蚴虫期疗效显著，对小鼠旋毛虫的成虫和新生蚴有显著驱杀效果，而对包囊期幼虫效果不明显。出现以上结果的原因是否与包囊期幼虫形成包囊有关，还是可能与多拉菌素浇泼剂的剂量、剂型、给药途径、治疗时间以及动物品系、感染旋毛虫的时间长短、旋毛虫隔离种的生物学特性等因素有关，有待进一步研究。

［1］Goude A C，Evaas N A，Gration K A F，et al.Doramectin，a potent novel endectocide［J］.Vet Parasitol，1993，49:5－15.

［2］Vercruysse J，Dorny P，Hong C，et al.Efficacy of doramectin in the prevention of gastrointestinal nematode infections in grazing cattle［J］.Vet Parasitol，1993，49:51 －59.

［3］李海琴，陈 云，朱华君等，多拉菌素浇泼剂在犬体内的药代动力学［J］.中国畜牧兽医，2012，39(6):156 －160.

［4］Firkins L D，Jones C J，Keen D P，et al.Preventing transmission of Sarcoptes scabiei var.suisfrom infes－ ted sows to nursing piglets by a prefarrowing treat－ment with doramectin injectable solution［J］.Vet Parasitol，2001，99(4):323 －330.

［5］李晓云，高玉红，路义鑫.多拉菌素浇泼剂对昆明小鼠消化道线虫驱杀效果研究［J］.东北农业大学学报，2010，41(8):104－108.

［6］房春林.多拉菌素的研究进展［J］.中国畜牧兽医，2006，33(5):55－57.

［7］符华林.兽用抗寄生虫药物新剂型及其新技术的研究进展［J］.中国兽药杂志.2004，38(3):38－42.

［8］高玉红，路义鑫，石艳丽，等.多拉菌素浇泼剂临床前毒理学试验研究［J］.东北农业大学学报，2010，44(1):41 －43.

［9］朱兴全.旋毛虫病［M］.河南科学技术出版社.1993，158.

［10］黄 勇，范光辉.丙硫咪唑和甲苯咪唑对实验家兔旋毛虫病的疗效及其抗体动态的观察［J］.中国人兽共患病杂志.1990，6(4):58－59.