赵学涛，杨从容，任晓亮，李 明，解晓元，巨红妹(河北医科大学第四医院输血科，河北 石家庄 050011)

·论著·

铯137辐照对库存红细胞表面分子CD35、CD47的影响

赵学涛，杨从容，任晓亮，李 明，解晓元，巨红妹
(河北医科大学第四医院输血科，河北 石家庄 050011)

目的探讨铯137(137Cs)辐照对库存红细胞表面分子红细胞1型补体受体(complement receptor type 1,CR1 or CD35) 及CD47分子的影响。方法采集60例健康献血者静脉血，制备去白细胞的悬浮红细胞，并将其分为2组各30例，未辐照组常规4℃保存，辐照组采用25Gy137Cs辐照后4℃保存。分别于第0、7、14、28、35天收集2mL样本。采用直标法流式细胞术检测红细胞表面分子CD35、CD47。结果辐照组和未辐照组红细胞CD35、CD47的表达均随着4℃保存时间的延长而减少，2组的时点间以及组间·时点间交互作用比较差异均有统计学意义(P<0.01)，但组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论25Gy137Csγ射线辐照对保存期内红细胞CD35、CD47表面分子表达无明显影响。

红细胞;γ射线;受体,补体3b;抗原,CD47

输血相关移植物抗宿主病(transfusion-associatedgraft-versus-hostdisease,TA-GVHD)是严重的输血不良反应之一，为减少其发生，现国内外普遍采用γ射线辐照血液制品进行预防[1]。另外，红细胞的免疫作用已被大量的实验证实，红细胞表面分子红细胞1型补体受体(complementreceptortype1,CR1orCD35)的表达与很多疾病的发病机制和转归密切相关[2]。分化群47(clusterofdifferentiation,CD47)作为红细胞自身标志在红细胞库存损伤中扮演着重要角色。CD47抑制性受体信号调节蛋白α(signalregulatoryproteinα,SIRPα)信号系统是老化红细胞清除的重要理论之一[3]。然而，γ射线对红细胞表面分子CD35、CD47的影响，国内外文献报道甚少。为此，本研究观察γ射线辐照后红细胞表面分子CD35、CD47的变化规律，旨在为临床规范使用辐照血液制品提供理论依据，报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源：随机选择河北省血液中心提供的全血60单位(每个单位由1例健康献血者提供，每单位含全血200mL及柠檬酸葡萄糖抗凝液保存液50mL)，制备去白细胞的悬浮红细胞，分为辐照组与未辐照组各30例。未辐照组常规4℃保存；辐照组应用德国GM2000(BIOBEAM,Germany)辐照仪，铯137(137Cs)γ射线为辐照源，辐照总剂量为25Gy，137Cs辐照后4℃保存。2组分别于保存前及保存7、14、21、28、35d采用无菌操作取样2mL待测。

1.2 红细胞CD35、CD47分子水平测定：将悬浮红细胞2mL以3 500r/min离心5min,从红细胞层中部吸取红细胞10μL,用0.01mol/LPBS稀释至1×105个/μL;各分子测定均设同型对照(阴性对照)管和测试管,在CD35、CD47测定的2管,分别加入异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanat，FITC)标记鼠IgG1κ同型对照(Biolegend公司产品)和鼠抗人CD35、CD47单克隆抗体各5μL，然后每管分别加入100μLPBS,室温避光反应30min;每管中加入500μLPBS摇匀,将红细胞悬液移入1.5mL环氧树脂管,2 500r/min离心5min;吸弃上清,沉淀中加入300μLPBS,重悬红细胞,避光,即刻上机测试。采用CellQuest软件分析数据,测定结果以平均荧光强度比值(meanfluorescenceintensity,MFI)表示[4]。

2 结 果

2组保存前红细胞CD35、CD47差异无统计学意义。在4℃保存的条件下，2组红细胞CD35、CD47随时间的延长逐渐降低，其时点间和组间·时点间交互作用差异均有统计学意义(P<0.01)，但组间差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

GroupsCD350d7d14d21d28d35dNon⁃irradiation8．56±0．548．41±0．468．32±0．777．02±0．656．43±0．745．96±0．66Irradiation8．52±0．488．37±0．507．84±0．646．89±0．686．35±0．725．87±0．59GroupsF=0．768 P=0．385TimeF=1854．47 P=0．000Groups·timeF=11．459 P=0．001GroupsCD470d7d14d21d28d35dNon⁃irradiation9．62±0．659．54±0．738．78±0．818．53±0．768．01±0．677．32±0．69Irradiation9．54±0．628．91±0．568．20±0．777．56±0．697．23±0．346．73±0．48GroupsF=0．873 P=0．157TimeF=1191．385 P=0．000Groups·timeF=28．231 P=0．000

3 讨 论

TA-GVHD是有严重免疫缺陷和免疫抑制患者在接受含有免疫活性的淋巴细胞输血后出现的一种病理状态[5]。尽管TA-GVHD发生率很低，但是病死率很高[6]。目前有效的预防措施之一是输血前对血液制品进行γ射线辐照。美国血库协会建议，137Csγ射线照射最小剂量为25Gy。

国内血站分离的红细胞4℃保存期为35d。红细胞表面存在着多种免疫物质(如CD35)，对机体的免疫功能发挥着重要作用。研究证明红细胞CD35的改变与机体许多疾病发病机制和转归密切相关;在抗肿瘤免疫监控中也起着一定的作用[6-7]。本研究25Gy137Cs辐照组红细胞表面分子CD35在7d逐渐下降，但与未辐照组比较差异不明显，与李志强等[8]的结果基本一致。

CD47又称整合素相关蛋白(integrin-associated protein,IAP),是一种广泛表达的抗原,存在于所有组织的不同细胞上。它是一个相对分子质量为5 000的膜糖蛋白,属于免疫球蛋白超家族的成员。Oldenborg[9]首次报道了CD47作为红细胞自身标志的新观点,认为CD47存在于正常红细胞膜表面,正常红细胞以CD47与巨噬细胞表面SIRPα结合,产生抑制性信号,从而不被吞噬。巨噬细胞依靠CD47的存在或缺失来区别自身或异己。CD47缺失的红细胞被视为“异物”,迅速在脾脏被巨噬细胞清除,从而发生溶血。Anniss等[10]发现,浓缩红细胞在4℃储存14d后,CD47表达有少量进行性减少,由此推测输入体内的红细胞在循环中的迅速清除与此有关,从另一个角度也表明CD47表达可能与红细胞破坏有关。本研究辐照组红细胞表面分子CD47与未辐照组相比差异无统计学意义。

总之，本研究结果显示，25Gy137Csγ射线辐照库存红细胞对红细胞表面分子CD35、CD47表达没有显著影响。

[1] PATIDAR GK,JOSHI A,MARWAHA N,et al.Serial assessment of biochemical changes in irradiated red blood cells[J].Transfus Apher Sci,2014,50(3):479-487.

[2] LAPIN ZJ,HÖPPENER C,GELBARD HA,et al.Near-field quantification of complement receptor 1 (CR1/CD35) protein clustering in humanerythrocytes[J].J Neuroimmune Pharmacol,2012，7(3):539-543.

[3] BURGER P,HILARIUS-STOKMAN P,DE KORTE D,et al.CD47 functions as a molecular switch for erythrocyte phagocytosis[J].Blood,2012，119(23):5512-5521.

[4] 胡金川,田亚平,江朝光，等.直标法流式细胞术测定人红细胞表面CD35水平的方法学研究[J].标记免疫分析与临床,2008,15(6):396-399.

[5] SUNUL H,ERGUVEN N.Transfusion-associated graft-versus-host disease[J].Transfus Apher Sci,2013，49(2):331-333.

[6] ZIMMERMANN R,SCHOETZ AM,FRISCH A,et al.Influence of late irradiation on the in vitro RBC storage variables of leucoreduced RBCs in SAGM additive solution[J].Vox Sang,2011,100(3):279-284.

[7] CREHAN H,HOLTON P,WRAY S,et al.Complement receptor 1 (CR1) and Alzheimer's disease[J].Immunobiology,2012，217(2):244-250.

[8] 李志强,徐文皓,乐嘉宜,等.60Co辐照血红细胞CR1分子数目的变化[J].河南诊断与治疗杂志,2002,16(1):1-2.

[9] OLDENBORG PA.CD47:a cell surface glycoprotein which regulates multiple functions of hematopoietic cells in health and disease[J].ISRN Hematol,2013,2013:614619.

[10] ANNISS AM,SPARROW RL.Expression of CD47(integri-associated protein) decreases on red blood cells during storage[J].Transfus Apher Sci,2002,27(3):233-238.

(本文编辑：赵丽洁)

EFFECTOF137CsRADIATIONONCD35ANDCD47OFSTORAGEERYTHROCYTES

ZHAOXuetao,YANGCongrong,RENXiaoliang,LIMing,XIEXiaoyuan,JUHongmei
(DepartmentofBloodTransfusion,theFourthHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050011，China)

ObjectiveToinvestigatetheeffectsof25Gy137Csradiationontheredcellsurfacemoleculecomplementreceptortype1(CD35)orCD35andCD47instorageerythrocytes.MethodsTheveinbloodsamplesofhealthydonorswerecollected,leukocyte-depletedsuspendederythrocyteswereprepared.Thespecimensof60caseswererandomlydividedintotwogroupswith30casesineachgroupandstoredat4℃,namelynon-irradiationgroup(controlgroup)andirradiationgroup.Thesuspendederythrocytes(2mL)wererespectivelycollectedonthe0,7th,14th,21st,28th,and35thdayafterthestorageoftwogroups.ThequantityofCD35andCD47oferythrocyteswereassessedbydirectcalibrationmethodusingflowcytometry.ResultsThequantityoferythrocytesCD35andCD47ofnon-irradiatedgroupandirradiationgroupdecreasedduringstorageat4℃.Thedifferencehadstatisticalsignificanceindifferentstoragetimesandinteractionsbetweengroupsandtime(P<0.01).However,intergroupdifferencewasofnosignificance(P>0.05).Conclusion25Gy137CsradiationdoesnothavesignificanteffectsontheCD35andCD47expression.

erythrocytes;gammarays;receptors,complement3b;antigens,CD47

2014-09-05；

2014-11-05

河北省卫生厅医学科学研究重点课题(20090532)

赵学涛(1977-)，男，河北阜城人，河北医科大学第四医院主管技师，医学博士,从事输血与肿瘤免疫研究。

R331.122

A

1007-3205(2014)12-1414-03

10.3969/j.issn.1007-3205.2014.12.018