杨勇??孙伟??吴保华

[摘要] 目的 了解广州新塘地区疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒2型的感染情况，为临床诊断治疗提供依据。 方法 采用实时荧光定量RT-PCR方法对我院门诊475例疑似生殖器疱疹患者进行单纯疱疹病毒2型病毒核酸检测。 结果 （1）在475例疑似生殖器疱疹患者中270例单纯疱疹病毒2型检测阳性，总阳性率为56.84%（270/475），其中男性154例阳性，阳性率为61.16%（154/256）；女性阳性116例，阳性率为52.97%（116/219），男女发病率比较二者差异无统计学意义。（2）四个年龄段即<20岁，20～40岁，41～60岁，>60岁，它们的阳性率分别为29.63%（8/27）、70.23%（184/262）、46.94%（69/147）、23.08%（9/39）；20～40岁年龄段发病率70.23%，明显高于其他3个年龄段组，组间差异有统计学意义。 结论 新塘地区单纯疱疹病毒2型感染率为56.84%，20～40岁病毒核酸检出率最高，但感染率无性别差异；实时荧光定量RT-PCR方法在单纯疱疹病毒2型的检测中具有灵敏度高，方便快捷等优点，可对疑似生殖器疱疹患者进行早期正确诊断以避免漏诊及误诊的发生，值得临床应用。

[关键词] 生殖器疱疹；单纯疱疹病毒2型；RT-PCR

[中图分类号] R75 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2014）14-34-03

单纯疱疹病毒2型（herpes simplex virus type 2，HSV-2）主要感染外生殖器和躯干下部皮肤，引起生殖器疱疹（genital herpes，GH）、新生儿疱疹，并认为与宫颈癌的发生相关。尽管单纯疱疹病毒1型感染导致的生殖器疱疹逐年增加，但许多资料显示生殖器疱疹的主要病原体仍为单纯疱疹病毒2型[1-5]。生殖器疱疹的发病率随着社会的发展在世界各地随之增高，该病也是较为严重的公共卫生问题之一。生殖器疱疹所致的生殖器溃疡增加梅毒及艾滋病的传播。有学者发现生殖器疱疹与人类乳头瘤病毒、念珠菌、杜克雷杆菌感染有密切关系[6]。生殖器疱疹可反复发作，对患者的健康和心理影响较大[7]。 因此早期正确诊断及治疗生殖器疱疹，对其进行有效的防治应引起重视。本研究旨在了解新塘地区疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒2型的感染情况。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2013年1月～2014年2月，男256例，女219例，共计475例在我院皮肤性病科及妇科门诊就诊疑似生殖器疱疹的患者，年龄结构：<20岁27例、20～40岁262例、41～60岁147例、60岁以上39例。已确诊为单纯疱疹病毒2型感染的复发患者除外。

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集 用无菌棉拭子沾取泌尿生殖器及肛周部位皮肤黏膜疱液或渗出液，溃疡取溃疡物和渗出液，将棉拭子置于无菌管中，密闭送检。外阴部无皮损的女性患者宫颈标本的取材：先用无菌棉拭子清除宮颈表面的分泌物，然后再用另一灭菌拭子伸入宫颈管内大约2cm处，停留5～10s左右，均匀旋转后取出，密闭送检，若遇节假日不能立即检测的标本置于-20℃保存。

1.2.2 HSV-2DNA的提取及检测 试剂盒、质控品，DA7600基因扩增仪均由中山大学达安基因公司提供，具体操作按照试剂盒说明书进行操作。

1.3 统计学方法

采用SPSS13.0软件进行数据处理和统计分析。计数资料以百分比表示，各组间感染率率的比较采用x2检验分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 检测单纯疱疹病毒2型的实时荧光定量PCR标准曲线图

有对数增长曲线的为阳性，无对数增长曲线的为阴性，详见图1～2。

2.2 不同性别疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒2型检测结果

在475例疑似生殖器疱疹患者中单纯疱疹病毒2型检测阳性患者270例，总阳性率为56.84%，其中男性患者阳性154例，阳性率为61.16%（154/256）；女性患者阳性116例，阳性率为52.97%（116/219），男女发病率差异无统计学意义（x2=2.49，P=0.11>0.05）。详见表1。

2.3 不同年龄段疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒2型检测结果

本研究将475例疑似生殖器疱疹患者按年龄分为四个年龄段即<20岁，20～40岁，41～60岁，>60岁。它们的阳性率分别为29.63%（8/27），70.23%（184/262），46.94%（69/147），23.08%（9/39）。其中20～40岁年龄段发病率70.23%，明显高于其他3个年龄段（x2分别为18.09，21.65，32.81，均P<0.05）组间差异有统计学意义。20～40岁的发病率最高。详见表2。

3 讨论

单纯疱疹病毒感染是所有人类病毒感染性疾病中常见的疾病之一[8]。发作期、恢复期患者，以及无明显症状的感染病毒者为该病的传染源。依据抗原性的差别，目前将其分为1型和2型。2型主要引起生殖器部位皮肤黏膜感染。本次对广州新塘地区疑似生殖器疱疹患者进行单纯疱疹病毒2型检测分析发现在475例疑似生殖器疱疹患者中270例患者单纯疱疹病毒2型检测结果阳性，阳性率为56.84%。154例男性患者单纯疱疹病毒2型检测结果阳性，阳性率为61.16%；116例女性患者单纯疱疹病毒2型检测结果阳性，阳性率为52.97%，男性与女性的感染率相比较二者差异无统计学意。这一结果与周雪莲等[9]报道四川成都地区检测单纯疱疹病毒2型55.65%的阳性率十分接近，但男性与女性的感染率二者差异不一致。广州新塘地区男性与女性的感染率相比较二者差异无统计学意。四个年龄段即<20岁，20～40岁，41～60岁，>60岁。它们的阳性率分别为29.63%（8/27），70.23%（184/262），46.94%（69/147），23.08%（9/39）。其中20～40岁年龄段发病率70.23%，明显高于其他3个年龄段，分析其原因可能与广州新塘地区流动人口所占比例较高且以青壮年流动人口为主相关。因此临床医务工作者对本地区流动青壮年进行一定的宣传教育工作对生殖器疱疹及其他性传播疾病的预防和控制尤为关键，同时取得患者对治疗的积极配合，以减少疾病的继续传播。endprint

生殖器疱疹根据典型临床表现结合病史即可作出临床诊断，但临床表现不典型、无症状感染也相当常见，因此单一依靠症状就进行诊断存在不足[10]。早期进行实验室检测准确诊断[11-13]十分重要，且有必要在做单纯疱疹病毒检测的同时进行分型[14]。单纯疱疹病毒的检测方法较多：（1）直接病毒细胞培养鉴定：该法需时间长，耗费多，对标本的运送、保存等技术条件要求相当高，只能在极少数大型的医学研究中心应用，绝大部分医院不能开展。（2）免疫学检测：检测抗单纯疱疹病毒抗体的血清学试验可用于证实既往单纯疱疹病毒感染、回顾性诊断原发性感染，对恢复期或复发性生殖器疱疹的诊断意义不大，因此单纯疱疹病毒IgM/IgG抗体仅作为辅助诊断生殖器疱疹一种筛查方法。（3）分子生物学检测：包括核酸杂交技术和PCR。应用DNA杂交技术检测单纯疱疹病毒DNA片段，但操作较为复杂，实验要求较高，不能普遍应用。而荧光定量聚和酶链反应（PCR-荧光探针法） 检测标本中的单纯疱疹病毒抗原单纯疱疹病毒DNA是一种比较简单的分子生物学技术，与普通的PCR相比，具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优式。并且通过定量分析可以提供更可靠的诊断依据，目前，利用该技术在我国进行有关单纯疱疹病毒感染的研究报道逐渐增多

本实验采用的荧光定量聚和酶链反应PCR-荧光探针法）对生殖疱疹病毒感染进行检测同时进行了分型，具有全封闭反应特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确结果客观的优点、与潘大虎等的观点相一致[15]。可用于临床快速诊断的需要，能在较短时间内提供可靠的诊断依据，避免漏诊及误诊的发生并且能帮助识别亚临床和不典型生殖器疱疹。该检测方法不但为临床研究和流行病学提供强有力的手段，而且使患者得到及时正确的诊断及治疗，可早期促进皮损的愈合、缩短排毒时间防止并发症，降低传染性，值得临床推广应用。

[参考文献]

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（收稿日期：2014-04-02）endprint

生殖器疱疹根据典型临床表现结合病史即可作出临床诊断，但临床表现不典型、无症状感染也相当常见，因此单一依靠症状就进行诊断存在不足[10]。早期进行实验室检测准确诊断[11-13]十分重要，且有必要在做单纯疱疹病毒检测的同时进行分型[14]。单纯疱疹病毒的检测方法较多：（1）直接病毒细胞培养鉴定：该法需时间长，耗费多，对标本的运送、保存等技术条件要求相当高，只能在极少数大型的医学研究中心应用，绝大部分医院不能开展。（2）免疫学检测：检测抗单纯疱疹病毒抗体的血清学试验可用于证实既往单纯疱疹病毒感染、回顾性诊断原发性感染，对恢复期或复发性生殖器疱疹的诊断意义不大，因此单纯疱疹病毒IgM/IgG抗体仅作为辅助诊断生殖器疱疹一种筛查方法。（3）分子生物学检测：包括核酸杂交技术和PCR。应用DNA杂交技术检测单纯疱疹病毒DNA片段，但操作较为复杂，实验要求较高，不能普遍应用。而荧光定量聚和酶链反应（PCR-荧光探针法） 检测标本中的单纯疱疹病毒抗原单纯疱疹病毒DNA是一种比较简单的分子生物学技术，与普通的PCR相比，具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优式。并且通过定量分析可以提供更可靠的诊断依据，目前，利用该技术在我国进行有关单纯疱疹病毒感染的研究报道逐渐增多

本实验采用的荧光定量聚和酶链反应PCR-荧光探针法）对生殖疱疹病毒感染进行检测同时进行了分型，具有全封闭反应特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确结果客观的优点、与潘大虎等的观点相一致[15]。可用于临床快速诊断的需要，能在较短时间内提供可靠的诊断依据，避免漏诊及误诊的发生并且能帮助识别亚临床和不典型生殖器疱疹。该检测方法不但为临床研究和流行病学提供强有力的手段，而且使患者得到及时正确的诊断及治疗，可早期促进皮损的愈合、缩短排毒时间防止并发症，降低传染性，值得临床推广应用。

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[15] 潘大虎，翟海燕，雷妍.276例疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒Ⅱ型检测结果分析[J].分子诊断与治疗杂志，2010，2（1）：43-45.

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生殖器疱疹根据典型临床表现结合病史即可作出临床诊断，但临床表现不典型、无症状感染也相当常见，因此单一依靠症状就进行诊断存在不足[10]。早期进行实验室检测准确诊断[11-13]十分重要，且有必要在做单纯疱疹病毒检测的同时进行分型[14]。单纯疱疹病毒的检测方法较多：（1）直接病毒细胞培养鉴定：该法需时间长，耗费多，对标本的运送、保存等技术条件要求相当高，只能在极少数大型的医学研究中心应用，绝大部分医院不能开展。（2）免疫学检测：检测抗单纯疱疹病毒抗体的血清学试验可用于证实既往单纯疱疹病毒感染、回顾性诊断原发性感染，对恢复期或复发性生殖器疱疹的诊断意义不大，因此单纯疱疹病毒IgM/IgG抗体仅作为辅助诊断生殖器疱疹一种筛查方法。（3）分子生物学检测：包括核酸杂交技术和PCR。应用DNA杂交技术检测单纯疱疹病毒DNA片段，但操作较为复杂，实验要求较高，不能普遍应用。而荧光定量聚和酶链反应（PCR-荧光探针法） 检测标本中的单纯疱疹病毒抗原单纯疱疹病毒DNA是一种比较简单的分子生物学技术，与普通的PCR相比，具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优式。并且通过定量分析可以提供更可靠的诊断依据，目前，利用该技术在我国进行有关单纯疱疹病毒感染的研究报道逐渐增多

本实验采用的荧光定量聚和酶链反应PCR-荧光探针法）对生殖疱疹病毒感染进行检测同时进行了分型，具有全封闭反应特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确结果客观的优点、与潘大虎等的观点相一致[15]。可用于临床快速诊断的需要，能在较短时间内提供可靠的诊断依据，避免漏诊及误诊的发生并且能帮助识别亚临床和不典型生殖器疱疹。该检测方法不但为临床研究和流行病学提供强有力的手段，而且使患者得到及时正确的诊断及治疗，可早期促进皮损的愈合、缩短排毒时间防止并发症，降低传染性，值得临床推广应用。

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[14] 徐文严，邵长庚，王千秋，等.临床性病学[M].南京：江苏科学技术出版社，2007：77-78.

[15] 潘大虎，翟海燕，雷妍.276例疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒Ⅱ型检测结果分析[J].分子诊断与治疗杂志，2010，2（1）：43-45.

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