张 颖

安徽中医药高专药学系，安徽芜湖，241000

茯苓为多孔菌科真菌茯苓（Poria cocs （Schw.）Wolf）的干燥菌核，具有利水消肿、健脾安神的疗效［1］；茯苓多糖和茯苓酸还可用于抗肿瘤和调节免疫［2］。传统的茯苓道地产区是大别山和云贵一带，特别是云南茯苓“云苓”，被认为是所有产地中质量最好的，现有文献也多集中于云南茯苓的研究。安徽大别山一带和湖北茯苓GAP种植基地是目前茯苓产量最大的产区，占全国产量七成以上。在文献和前期研究的基础上，笔者发现安徽岳西所产的茯苓药材在外观性状和化学成分上与其他产地的茯苓有一些区别，如色泽、气味，且当地传统的用药经验认为其质量和疗效优于云苓。由于岳西茯苓具有独特之处和优良品质，对岳西茯苓进行特征性鉴别的指纹图谱研究具有一定必要性，且有关岳西茯苓质量控制的研究未见报道。本研究收集了安徽岳西及其周边一带的茯苓药材，采用HPLC法对其进行指纹图谱的分析研究，建立了安徽岳西一带茯苓的特征图谱，探讨了该区域茯苓药材色谱学行为的独特之处，为安徽岳西茯苓的鉴别和质量控制提供了科学依据。

1 材料与仪器

1.1 仪器

E600型高效液相色谱仪为美国Waters公司生产；检测器为waters 2489紫外可见光检测器，也为美国Waters公司生产；FA21048型分析天平为上海越平仪器厂生产；ATM40－1B超声波清洗机为苏州爱拓玛机械公司生产。

1.2 药材

本实验共收集了安徽省大别山一带5个县区13个批次的茯苓药材，由安徽中医药高等专科学校中药教研室鉴定为多孔菌科真菌茯苓（Poria cocs（Schw.）Wolf）的干燥菌核（表1）。

表1 药材采集信息

1.3 试剂

乙腈（色谱纯，Merck公司）、磷酸（分析纯，南京试剂一厂）；水为娃哈哈纯净水；对照品茯苓酸为上海纯优生物科技有限公司提供，批号201301P0734。

2 方 法

2.1 色谱条件

色谱柱为 waters symmetry C18（5μm，4.6＊150 mm）。检测波长为243nm。流动相为乙腈和0.5%磷酸水溶液梯度洗脱［3］，洗脱条件如表2所示。

表2 HPLC梯度洗脱条件

2.2 对照品溶液的制备

取茯苓酸对照品适量，精密称定，甲醇溶解后定容于10mL容量瓶中，即得浓度为0.13mg／mL的茯苓酸对照品溶液，微孔滤膜过滤，待用。

2.3 供试品溶液的制备

将茯苓药材粉碎后，精密称取0.5g，置适宜的圆底烧瓶中，定量加入甲醇50mL，称定质量后超声提取30min，冷却后补足损失重量，静置后取上清液用0.45μm微孔滤膜滤过，待用。

2.4 稳定性试验

取茯苓药材（安徽岳西）1份，按既定方法制备溶液，并按既定方法分别在0、2、4、6、12、24h进样分析，记录各共有峰的峰面积和保留时间，通过分析，24h内共有峰保留时间RSD值均小于0.82%，相对面积的RSD值均小于3.7%，实验结果表明常温下供试品溶液24h内稳定。

2.5 重现性试验

取同一批茯苓药材（安徽岳西）5份，按既定方法制备溶液，并按既定方法分别进样20μL测定。计算各共有峰相对保留时间RSD值小于1.7%，相对峰面积RSD小于2.4%，实验结果表明该方法重现性良好。

2.6 精密度试验

取茯苓药材（安徽岳西）1份，按既定方法制备溶液，并按既定方法平行测定6次。计算各共有峰相对保留时间RSD值小于0.94%，相对峰面积RSD小于3.1%，实验结果表明仪器精密度良好。

2.7 供试品的检测

取5个产地13批茯苓药材，按既定方法制备供试药液，分别取已制备好的各供试样品20μL，注入高效液相色谱仪分析，记录60min内的色谱图，记录所有峰相对保留时间和相对峰面积。

3 指纹图谱及各项技术参数

茯苓药材指纹图谱见图1，分析比对5个不同产地的茯苓药材供试品HPLC指纹图谱（图2），确定其中8个峰为共有峰，详见表3。采用国家药典委员会颁布的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2004A版），对5个产地13批茯苓药材指纹图谱进行分析，各图谱相似度介于0.893～0.963之间，详见表4。其中10份药材指纹图谱相似性在0.96以上，仅有霍山县所产茯苓药材的相似性略低，为0.90左右，说明岳西及其周边县市所产茯苓所含成分种类及含量具有一致性，差异较小。

图1 茯苓药材及加入茯苓酸标准品色谱图

其中峰4经与标准品比对为茯苓酸，设定其为基础峰，各检测图谱以基础峰的保留时间、峰面积为参照，计算图谱中各特征峰的相对保留时间和相对峰面积RSD，结果显示：5批茯苓药材相对保留时间RSD＜0.98%，相对峰面积RSD小于4.79%，说明5批茯苓药材所含成分及含量均较相似，详见表5。

图2 13批茯苓药材指纹图谱

表3 岳西及周边地区茯苓药材共有特征峰

表4 岳西及周边地区图谱相似度分析结果

表5 茯苓指纹图谱测定结果（RT－保留时间，Area－峰面积）

4 讨 论

（1）安徽大别山一带自古以来就是茯苓药材的重要产区，特别是岳西县所产茯苓远近闻名，并且在药材性状上具有独特之处。通过与其他产区茯苓药材的比对，发现安徽茯苓的化学成分与其他产地存在差异［4］。本实验采用高效液相色谱法，建立了岳西及周边县区茯苓药材指纹图谱。通过分析比对，安徽岳西及周边一带所产茯苓药材样本整体相似度较高，保留时间和峰面积均较为相似，提示该区域药材质量相近、稳定一致，具有良好的相关性。这可能是由于大别山一带地理位置、气候、土壤等因素均较为相似，所产茯苓药材的化学成分种类及含量较为相似和一致。

（2）本实验所建立的指纹图谱分析方法简单易行、稳定可靠，具有良好的系统性、特征性和重现性，特征峰数目较多，且峰型较好，所用材料易于处理，可作为岳西大别山一带茯苓药材与其他产区鉴别及质量控制的参考方法。

（3）岳西茯苓的色谱图显示保留时间54min左右存在一个色谱峰，而其他产地茯苓药材在此峰位没有明显峰型。这提示岳西茯苓在小极性区域存在一个独特成分，相比其他产区茯苓含量明显较高。结合岳西茯苓具有特有的香气，猜测该成分或为一种挥发油或萜类，详情有待进一步研究。

［1］凌一揆，颜正华.中药学［M］.3版.上海：上海科学技术出版社，1984：95

［2］张思访，刘静涵，蒋建勤，等.茯苓的化学成分和药理作用及开发［J］.中华实用中西医结合杂志，2005，18（2）：227－230

［3］段启，李霞兰，王少军，等.HPLC法测定茯苓皮中茯苓酸［J］.中草药，2006，37（2）：284－285

［4］许腊英，万芳，付文强，等.不同产地茯苓中萜类成分的HPLC指纹图谱研究［J］.湖北中医学院学报，2007，9（3）：41－43

［5］芦锰，贺海花，杨云，等.反相高效液相色谱法对茯苓饮片指纹图谱的研究［J］.时珍国医国药，2009，20（10）：2531－2533