罗培和，朱其琼

（1.钦州市食品药品监督管理局，广西 钦州 535000；2.广西食品药品监督管理局,广西 南宁 530022)

实验室与分析

HPLC法测定麻杏止咳糖浆中苦杏仁苷的含量

罗培和1，朱其琼2

（1.钦州市食品药品监督管理局，广西 钦州 535000；2.广西食品药品监督管理局,广西 南宁 530022)

建立高效液相色谱法测定麻杏止咳糖浆中苦杏仁苷含量的方法。采用KromasilC18柱，乙腈-0.1%磷酸溶液（8∶92）为流动相，流速1.0mL·min-1，检测波长207nm。苦杏仁苷在0.0406～0.812μg范围内有良好的线性关系，r=0.9999，平均回收率为99.0%，RSD为0.25%。本方法简便、准确、重现性好，可用于麻杏止咳糖浆的质量控制。

麻杏止咳糖浆；苦杏仁苷；高效液相色谱法；含量测定

麻杏止咳糖浆是由麻黄、苦杏仁、甘草（炙）、石膏等4味药材加工制成的复方制剂，具有镇咳、祛痰、平喘的功效。临床用于急慢性运气管炎及喘息等。目前其检验标准有2个,1个是卫生部《药品标准》中药成方制剂第20册[1]，另1个是《国家药品监督管理局药品标准》（内科肺系二）[2]。第1个标准无含量测定项，第2个标准有盐酸麻黄碱的含量测定。苦杏仁是方中止咳平喘的主药，主要有效成分为苦杏仁苷，其在体内能慢慢分解，产生少量氢氰酸，从而抑制呼吸中枢，使呼吸系统趋于安静而呈现止咳平喘的功效，过量又会出现中毒症状[3], 因此苦杏仁苷的含量将直接影响到麻杏止咳糖浆的安全和疗效, 目前尚无有关麻杏止咳糖浆中苦杏仁苷含量测定的报告,通过测定麻杏止咳糖浆中苦杏仁苷的含量，可以作为控制该产品质量的一个重要指标,因此笔者参考有关文献[4-7]，采用HPLC法建立了麻杏止咳糖浆中苦杏仁苷的含量测定方法,为保证该制剂安全有效提供依据。该方法操作简便、、结果准确、重现性好，可作为麻杏止咳糖浆的质量控制方法。

1 仪器与试药

LC-10Atvp型高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测仪，威玛龙色谱数据工作站，BP211D型电子天平。

苦杏仁苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号110820-200403），麻杏止咳糖浆（自制产品，批号：130101，130102，130103）；乙睛(色谱纯)，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Kromasil C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙晴-0.1%磷酸溶液（8∶92）；检测波长：207nm；流速：1.0mL·min-1；柱温：室温。进样量：10μL。在上述色谱条件下苦杏仁苷对照品的保留时间约为10.45min，理论板数按苦杏仁苷峰计算应不低于7000。

2.2对照品溶液的制备

精密称取在105℃干燥至恒重的苦杏仁苷对照品适量，加甲醇制成40.6μg·mL-1的溶液，用0.45μm的微孔滤膜滤过，作为对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备

取本品适量，摇匀，精密量取5.0mL，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声（功率250W，频率50kHz）处理10min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.4阴性对照溶液的制备

取缺少苦杏仁的其他味药按部颁标准麻杏止咳糖浆处方工艺制成阴性制剂，按供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液。

2.5线性关系考察

分别精密吸取对照品溶液1、3、5、10、15、20μL注入液相色谱仪，按“2.1”项的色谱条件测定，以峰面积积分值为纵坐标，进样量（μg）为横坐标，进行线性回归，苦杏仁苷回归方程为Y＝1.97×106X+2.32×103r＝0.9999，结果表明，苦杏仁苷在0.0406～0.812μg范围内与峰面积线性关系良好。

2.6干扰试验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10μL注入高效液相色谱仪，分别测定，结果表明，供试品溶液与对照品溶液主峰的保留时间一致，阴性样品溶液在与苦杏仁苷相同保留时间处无吸收峰，表明阴性样品无干扰。色谱图见图1。

图1 HPLC色谱图

2.7精密度试验

精密吸取对照品溶液10μL，连续进样6次，测定峰面积。结果苦杏仁苷RSD为1.1%，表明精密度良好。

2.8稳定性试验

精密吸取同一批号的供试品溶液，于0、4、8、12、24h分别测定峰面积。结果苦杏仁苷RSD为0.45%，结果表明供试品溶液在24h内稳定。

2.9重复性试验

取同一供试品（批号130101）6份，按“2.3”项方法制备，照“2.1”项色谱条件测定。结果苦杏仁苷的平均含量为0.5146 mg·mL-1，RSD为1.3%，表明重复性良好。

2.10加样回收率试验

精密量取已知含量的样品9份（含量为0.5146 mg·mL-1），每份2.5 mL，分别精密加入苦杏仁苷对照品溶液（0.4060 mg·mL-1）1mL、2mL、3mL，按供试品溶液制备方法制备，按上述色谱条件测定含量，计算加样回收率，结果见表1。

表1 苦杏仁苷量测定加样回收率测定结果（n=9）

2.11样品测定结果

取3批麻杏止咳糖浆（130101、130102、130103），按2.3项方法制备供试品溶液6份（每批2份），精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，照外标法（峰面积）计算苦杏仁苷的含量，结果见表2。

表2 样品测定结果表

3 讨论

3.1溶剂的选择

先后采用甲醇、70%甲醇、乙醇作为溶剂对样品进行超声提取，提取液进行HPLC测定。结果表明，以甲醇作溶剂杂质峰干扰少，样品分离完全，分离度较好，测得的苦杏仁苷含量较高，故选用甲醇为提取溶媒。

3.2提取方法研究

采用甲醇回流法、甲醇浸提法和甲醇超声法提取样品，提取液进行HPLC测得，考察了不同的提取方法对样品中苦杏仁苷含量测定的影响，结果发现传统溶剂浸提法与回流提取法测得的苦杏仁苷含量相近，而超声提取法测得的苦杏仁苷含量较高，且操作简单，提取时间短。

3.3流动相的选择

对相关文献报道的流动相进行筛选，分别采用甲醇-水（17∶83）、水-甲醇-乙腈（75∶20∶5）、乙腈-0.1%磷酸溶液（8∶92）、甲醇-0.1%磷酸溶液（20∶80）进行考察，结果表明以乙腈-0.1%磷酸溶液（8∶92）作为流动相，对照品与样品中其他组分达到基线分离，分离度达6.5，分离效果最好，且保留时间适中，阴性对照无干扰峰出现。

3.4超声时间对含量提取的影响

比较不同的超声时间，分别采用10、20、30min，甲醇超声提取制备供试品溶液，经含量测定比较发现，样品含量在10～30min保持恒定，故选择超声提取10min。

4 结论

本实验建立了麻杏止咳糖浆中苦杏仁苷的HPLC含量测定方法，方法简便、可靠、准确，可用于该制剂的质量控制。

[1] 中华人民共和国药典委员会. 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第20册[M]. 北京：中华人民共和国药典委员会，1991：338.

[2] 国家药品监督管理局. 国家中成药标准汇编内科肺系（二）分册[M]. 北京：人民卫生出版社，2002：263-264.

[3] 江苏新医学院. 中药大辞典（上）[M]. 上海：上海科学技术出版社，1986：1100-1102.

[4] 中华人民共和国药典委员会. 中华人民共和国药典一部[M]. 北京：中国医药科技出版社，2010：187-188.

[5] 甄攀.麻杏止咳片中苦杏仁苷的HPLC分析[J].中成药，2003，25（2）：115.

[6] 王乾蕾，李运景，余健，夏宪平，等.高效液相色谱法测定清肺合剂中苦杏仁苷含量[J].中国药业，2008，17（19）：31-32.

[7] 税丕先，孙琴，庄元春，等.HPLC测定止嗽定喘片中苦杏仁苷的含量[J].中成药，2007，29(12)：1870-1872.

[8] 韦志英，杨志丽，陆海琳，等.HPLC法测定桃仁配方颗粒中苦杏仁苷的含量[J].广西中医学院学报，2010，13（4）：49-50.

Determination of Amygdalin in Maxing Cough Syrup by HPLC

LUO Pei-he1,ZHU Qi-qiong2
(1.Qinzhou Food and Drug Administration,Qinzhou 535000,China; 2.Guangxi Food and Drug Administration,Nanning 530022，China）

A HPLC method for determination of amygdalin in Maxing cougy syrup by HPLC was established.Applied KromasilC18 column(250mm×4.6mm,5μm), the mobile phase was acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution(8:92), the fow rate of 1.0mL·min-1, the detecting wavelength was at 207nm. The linear range of amygdalin was 0.0406～0.8112μg (r=0.9999),the average recovery was 99.0%, RSD was 0.25%.The method was simple，accurate and reproducible，it could be used for quality control of maxing cough syrup.

Maxing cough syrup; amygdalin；HPLC；content determination

R 927.2 O 657.7+2

A

1671-9905(2014)02-0042-03

2013-11-20