梁 勤，乔登嫣，马小明，罗向霞，李喜香，周思彤，窦娇莹

甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050

方 药·道地药材

甘肃道地中药大黄、黄芩对多重耐药菌的抑菌活性

梁 勤，乔登嫣△，马小明，罗向霞，李喜香，周思彤，窦娇莹

甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050

目的：观察甘肃道地中药材大黄、黄芩的体外抑菌活性，为临床中药治疗耐药菌感染提供参考。方法：采用煎煮法制备大黄、黄芩中药原液，用肉汤稀释法测定两种药液对产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的最小抑菌浓度。结果：大黄对产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠杆菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的最小抑菌浓度分别为250mg/mL和125mg/mL。黄芩对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（M RSA）的最小抑菌浓度为250 mg/mL；对产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠杆菌未见明显抑菌作用。结论：大黄、黄芩对临床常见的多重耐药菌有不同程度的抑菌活性，且大黄的抑菌活性优于黄芩；大黄对金黄色葡萄球菌抑菌活性优于大肠埃希菌。

大黄；黄芩；多重耐药菌；抑菌

多重耐药细菌感染的治疗是临床棘手问题，而细菌的耐药性多来自于耐药质粒的传播。中药不易产生药物残留，可避免产生耐药性，也不会造成环境污染，且种类繁多，资源丰富，属天然植物药，具有毒副作用小、应用安全、价格低廉等优点。相关研究显示，中草药对耐药（R）质粒有消除作用［1-6］，本研究选取甘肃省道地中药中的大黄和黄芩，检测二者对产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的抑菌活性，以期为中药治疗耐药菌感染提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验菌株 本组产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株均由甘肃省中医院检验科微生物室依照CLS I文件要求从临床标本中分离并鉴定。

1.2 器材 M-H（Muellle r-Hinton）琼脂平板（麦迪公司提供）；M-H肉汤、营养肉汤、营养琼脂干粉（均由杭州微生物有限公司生产）；XK96-A快速混匀器（姜堰市新康医疗器械有限公司生产）；7 2 1分光光度计（山东高密彩虹分析仪器有限公司生产）。

1.3 中药的选择与提取 两种中药制剂均由甘肃省中医院药剂科用煎煮法制备。大黄、黄芩浓缩提取，浓度均为1g/m L，经121℃下灭菌2 0分钟，-2 0℃保存备用。

1.4 药液制备 排列无菌试管10支，于第2～10管中各加无菌营养肉汤5mL，取大黄10mL，于第一管中加入5mL，第2管中加入5mL，将第2管中溶液混合后取出5mL，加入第3管，再混合后取出5mL，加入第4管，如此连续稀释至第9管，取出5mL弃掉，第10管仅为无菌营养肉汤做对照，则第1～10管为不同浓度药液5mL。黄芩制备方法同大黄。最终每支试管的药物浓度为1000、500、250、125、62.5、31.25、15.63、7.82、3.91、0mg/m L。

1.5 菌液制备 将两种菌株分别用M-H肉汤35℃培养2～6小时，用M-H肉汤稀释菌液到0.5麦氏比浊管浊度（721分光光度计625 n m吸光度为0.08～0.10），约含菌1～2×108cfu/m L。

1.6 抑菌实验 将“1.4”项下配好的菌液分别加入“1.5”项下稀释的两种药液中，每管加菌液1mL，置3 5℃孵厢培养24～48小时，于24、48小时时分别吸取0.1mL转种营养琼脂平板一次，置35℃孵厢培养4 8小时观察细菌生长情况，判断中药的最小抑菌浓度。

2 结果

大黄对产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的最小抑菌浓度分别为25 0mg/mL和125m g/m L；黄芩对MRSA的最小抑菌浓度为250mg/m L；对ESBLs大肠杆菌未见明显抑菌作用，见表1。

表1 大黄、黄芩对产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的M ICmg/mL

3 讨论

相关报告数据显示引起医院感染的病原菌分离率最高的革兰氏阴性菌是大肠埃希菌，阳性菌为金黄色葡萄球菌，且高耐抗生素的产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和MRSA分离率高达70.4%和56.5%［7］。所以寻求有良好抑菌作用的中药成为目前研究的热点。

本研究结果表明，大黄对产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和MRSA有较好的抑制作用，与费娜等［8］研究结果相符。黄芩对MRSA有抑制作用，与苏广珠等［9］的研究结果类似；对产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌未见明显抑菌作用，说明不同药物在MRSA最小抑菌浓度方面差异明显；同一种药物对MRSA和产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌可表现出不同的抑菌浓度；经稀释的黄芩没有表现出明显抑菌浓度，其原因可能是本实验采用的煎煮方法不利于提取其有效抑菌成分。需要强调的是，中药对厌氧菌的药物敏感性实验还没有制定统一标准，且需要进一步规范中药的品种、产地、炮制方法，以便为中药治疗厌氧菌感染提供更科学的实验依据［10］。近年来随着抗生素的广泛使用，由金黄色葡萄球菌导致的院内感染的发生率也逐年升高，临床多可出现对多种抗菌药物耐药，且此细菌分布广、传播快，故临床对其感染者的治疗较为困难。本研究结果表明黄芩、大黄对常见院内感染细菌具有抑制作用。

［1］鞠洪涛，韩文瑜.中草药消除大肠埃希氏菌耐药性及耐药质粒的研究［J］.中国兽医科技，2000，30（3）：27-29.

［2］彭元丽，邹坤，陈国华.中药消除大肠杆菌耐药质粒研究［J］.时珍国医国药，2009，20（1）：139-140.

［3］黄金珠，雍刚，廖菁，等.土茯苓加减方对淋病奈瑟菌耐药质粒的消除作用［J］.实用医院临床杂志，2010，7（6）：35-37.

［4］肖潇，李英伦，杨锐.复方蒲公英对金黄色葡萄球菌耐药质粒的体外消除试验［J］.中国兽医科学，2010，40（3）：307-311.

［5］王永芬，席磊，边传周，等.猪致病性大肠杆菌耐药质粒检测及其中药消除作用研究［J］.中国预防兽医学报，2011，33（12）：932-935.

［6］陈世彪.3种中药对产β-内酰胺酶金黄色葡萄球菌R质粒的消除作用［J］.畜牧与兽医，2010，42（1）：81-83.

［7］陈晓，杨青，张伟丽，等.Mohnarin 2010年报告：西北地区细菌耐药监测［J］.中华医院感染学杂志，2011，21（23）：4933-4938.

［8］费娜，杨俊杰.大黄等四种中草药体外抑菌活性比较［J］.黑龙江医药科学，2010，33（1）：18-19.

［9］苏广珠，贺坤，裴凤艳.6种中草药抑菌活性的研究［J］.中国临床研究，2012，25（8）：801-802.

［10］史跃杰.黄芩黄连水煎剂对厌氧菌的体外抑菌活性［J］.中国实验方剂学杂志，2011，17（17）：226-227.

Antibacterial Activity of Gansu Genuine Herbs DaHuang and HuangQin on Multiple Resistant Bacteria

LIANG Qin，QIAO Dengyan△，MA Xiaoming，LUO Xiangxia，LI Xixiang，ZHOU Sitong，DOU Jiaoying
Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730050，China

Objective：To provide reference for herbs in treating drug resistant bacteria infection by observing antibacterial activity of Gansu genuine herbs DaHuang（Rheum palmatum L.）and HuangQin（Scutellaria Baicalensis）in vitro.Methods：The decoctions of DaHuang and HuangQin were prepared，the minimum antibacterial concentrations of two kinds of decoctions for extended spectrum β lactamases（ESBLs）E.coli and methicillin-resistant staphylococcus aureus（MRSA）were detected with broth dilution method.Results：The minimum antibacterial concentrations of DaHuang for producting ESBLs E.coli and MRSA were 250mg/mL and 125 mg/mL.The minimum antibacterial concentrations of HuangQin for producting MRSA were 250mg/mL，and it didn′t show notable antibacterial function to ESBLs E.coli.Conclusion：DaHuang and HuangQin show different degrees of antibacterial activity to common multiple resistant bacteria，and antibacterial activity of DaHuang is superior to that of HuangQin；antibacterial activity of DaHuang to MRSA is superior to that of ESBLs E.coli.

DaHuang；HuangQin；multiple resistant bacteria；antibacterial Activity

R284

A

1004-6852（2014）05-0005-03

2014-01-10

梁勤（1972—），女，副主任检验师。研究方向：临床检验及微生物学检验。

△通讯作者：乔登嫣（1973—），女，副主任检验师。研究方向：临床微生物学检验。