崔金鑫 田志高

（张家港出入境检验检疫局，江苏张家港 215600）

犬瘟热病毒检测技术浅述

崔金鑫 田志高

（张家港出入境检验检疫局，江苏张家港 215600）

犬瘟热（CD）由犬瘟热病毒（CDV）感染引起，是临床上犬科等多种动物的常见疾病之一，传染性强，致死率高，发病急，危害较大。目前国内外已有多种有效的检测方法，主要分为病原学、血清学和分子生物学三类。本文对犬瘟热病毒的检测技术进行了综述。

犬瘟热病毒；检测；技术

犬瘟热临床症状主要有典型的双相热、呼吸道和消化道卡他性炎症以及神经症状等[1]，对养殖业、宠物业和野生动物保护业的危害有目共睹，有效的检测手段是防控该病的一个必要条件。本文对犬瘟热病毒的各种检测方法进行简要的综述，为广大兽医工作者选择有效检测方法提供参考。

1 病原学检测方法

1.1 病毒分离鉴定

病原分离鉴定通常是疾病确诊的根本方法，近年来，不少学者成功在CDV细胞培养分离上取得了成功。该方法准确可靠，但目前主要用于实验室研究，临床使用受限较多。CDV环境生存能力很弱，且在感染中后期受抗体影响较大，因此，在自然感染的病例中该病毒的分离成功率很低。

1.2 包涵体检查

包涵体是CDV感染细胞所产生的特征性病理变化，通过诊断病理学可以检查到包涵体的存在，从而证实CDV的感染[2]。鉴于其他一些病毒也会产生包涵体，仅靠该方法不能确诊，需与其他方法配合。

1.3 电镜检查和动物接种试验

CDV的电镜检查较为困难，该病毒颗粒与同科病毒在形态结构上难以区分，同时其采样获取较为困难。常国权等[3]采取粪便作为病料，分别使用免疫电镜技术和离子捕获电镜技术对病料做出了检查，取得了一定效果。目前，该方法通常作为一种辅助方法，不作为CDV检测的常规手段。

动物接种试验作为一种病原学诊断方法，在某些病原的诊断上有重要的作用，CDV目前尚无理想的动物接种试验诊断效果的报道。

2 血清学检测方法

2.1 血清中和试验

血清中和试验是常用的CDV抗体标准检测方法，该方法既可以检测待检血清中的CDV抗体，又可以测定CDV抗体的效价，具有敏感性高、特异性强、稳定性好等特点。该方法首次由国外学者Lo JP等应用到CDV的检测中来，现已得到了较为广泛的使用。由于该方法作出诊断时间较长，不能满足临床上快速诊断的要求，目前多用于实验室研究。

2.2 免疫组化技术

免疫组化技术通常用于检测CDV在动物机体内各组织器官的分布情况，多在动物死亡后的病理检查中使用，敏感性和稳定性较高。有学者用PAP检测犬CDV抗体，发现该试验特异性与中和试验相似。

2.3 免疫荧光技术

免疫荧光技术结合了抗原抗体反应的特异性和染色技术的快速性，目前是国际通用的CDV诊断方法，同时适用于体外细胞培养物和组织脏器中CDV的检测。袁书智等[4]分别在犬瘟热病犬死亡前后用直接FA染色法检测CDV抗原，结果表明该方法可作为CDV是否感染的指标。

2.4 酶联免疫吸附试验（ELISA）

酶联免疫吸附试验结合抗原抗体反应的特异性和酶促反应的高敏感性，建立起准确率高、敏感性好、特异性强的抗原抗体检测技术。同时，ELISA具有良好的商品化产品，可批量快速检测。因此，该方法目前在临床实践中得到了大量应用。

2.5 胶体金免疫层析

胶体金免疫层析技术是一种基于单克隆抗体建立起来的技术，该方法操作简单，可批量快速检测，但具有一定的假阳性率，这点值得注意。该方法在临床应用上拥有很好的推广前景，如果在敏感度上再加以改进，相信会得到更好的发展。

2.6 琼脂免疫扩散试验和凝集试验

琼脂免疫扩散法是利用抗原抗体反应建立起来的一种简单快捷的检测方法。该方法在敏感度上虽有一定局限性，但操作简单，不需要复杂设备技术，适合在广大基层单位进行推广。

凝集试验是一种操作简单、快速的血清学检测手段，该方法也是基于抗原抗体反应建立。该方法要求条件较低，诊断时间短，利用粪便或尿液检测抗原能够不受免疫接种的影响，在临床上应用具有很大的优势。

3 分子生物学检测方法

3.1 核酸杂交技术

核酸杂交技术通过检查两种核酸分子碱基排列有无互补关系或互补程度来判断二者关系，从而达到检测特有核酸序列的目的。王宏俊等[5]建立了一种核酸探针检测CDV的方法，结果显示该方法的特异性和敏感性均较好。

3.2 聚合酶链式反应

目前在CDV的检测中，国内外学者较多地使用了PCR技术。刘大飞等[6]建立了检测CDV和其他几种犬病毒的多重PCR方法，该方法缩短了临床上检测病料的时间，敏感性和特异性较好。PCR因其特异性强、敏感性高以及检测快速的优势，在实验研究中得到了广泛应用。

3.3 环介导等温扩增和基因芯片

环介导等温扩增技术是日本学者Notomi等开发的一种恒温核酸扩增方法，该方法特异性高、简单快捷，避免了常规核酸扩增方法的繁琐扩增、检测程序。基因芯片技术是最近发展很好的一种新型分子生物学技术，该方法快速、准确、敏感，可以批量检测，具有很好的应用前景。这两种方法要求较高，目前主要用于实验室研究，在临床上推广尚需时日。

[1] 陈溥言.兽医传染病学[M].北京: 中国农业出版社，2006，415-419.

[2] 贺永明，刘艳红，刘淑芳.犬瘟热临床诊治[J].安徽农业科学，2007，35（ 13） : 3930．

[3] 常国权，杨盛华.用离子捕获电镜技术快速检测犬瘟热病毒[J].畜牧与兽医，1994，26（6）: 243-244.

[4] 袁书智，夏咸柱.犬瘟热荧光抗体技术的应用研究[J].中国兽医学报，1994，14（2） :146-150.

[5] 王宏俊，丁少忠.核酸探针检测犬瘟热病毒方法的建立和初步应用[J].中国兽药杂志，2006，40（5）: 19-22.

[6] 刘大飞，姜一曈，戚亭，等.同时检测犬瘟热病毒、犬细小病毒I型和II型犬腺病毒多重PCR方法的建立[J].中国预防兽医学报，2012，34（11）: 911-914.

崔金鑫（1988-），研究生，张家港出入境检验检疫局，动物传染病防治；田志高，张家港出入境检验检疫局。