林丽君 严晓岚 俞丽玲 丁建祖 陈 文 闻礼永

(浙江省医学科学院，杭州 310013)

血吸虫病是国家重大传染病之一。经过积极防治，全国先后有5个省达到血吸虫病传播阻断标准，但这些省份仍存在一定面积的残存钉螺，随着人口流动的日益频繁，输入性传染源也时有发现，血吸虫病重新传播流行的因素依然存在(闻礼永等，2011)。湖北钉螺是日本血吸虫Schistosomajaponicum唯一中间宿主，血吸虫毛蚴感染钉螺宿主是血吸虫病流行不可缺失的重要环节。研究发现，钉螺的感染率与每只钉螺暴露于血吸虫毛蚴的数量呈正相关(何毅勋等，1994)。当钉螺与毛蚴都减少至很少的程度时，即便多次投放毛蚴，钉螺也不感染(何尚英等，1989)。不同地区存在不同血吸虫品系和不同亚种湖北钉螺，且相互之间的相容性存在明显差异(周晓农等，2005)。不同地区、不同环境类型钉螺对血吸虫的易感性不同，来自同一地区但属于不同环境类型的钉螺，以及属于同一环境类型而来自不同地区的钉螺也具有不同的易感性(洪青标等，1995)。本研究通过了解传播阻断地区钉螺与输入性血吸虫毛蚴的相容性，以期为传播阻断地区血吸虫病防治、监测及科学研究提供依据。

1 材料与方法

1.1 血吸虫毛蚴

采取安徽、江西省现场捕获的阳性钉螺及江苏省血吸虫病防治研究所实验室饲养阳性钉螺逸取血吸虫尾蚴感染家兔，每只家兔感染毛蚴1 500只，饲养45 d后取兔肝虫卵孵化毛蚴。以孵出4 h内的毛蚴作感染用。

1.2 钉螺

采集浙江省山丘型流行区长兴、常山、婺城光壳钉螺Oncomelanianosophora和水网型流行区秀洲、平湖微肋钉螺O.sublevis，分别经逸蚴试验(何尚英等，1989)，并抽取其中100只钉螺解剖观察无血吸虫感染，剩余钉螺做试验用。采集安徽、江西和江苏省现场湖沼型流行区肋壳钉螺分别经逸蚴试验，并抽取其中100只钉螺解剖观察无血吸虫感染，剩余钉螺作阳性对照组实验用。

1.3 方法

1.3.1钉螺群体感染：吸取含毛蚴水于玻片上，抽样3次，在解剖镜下计数后，推算水中的毛蚴密度，按每只钉螺20只毛蚴的比例加入50 mL烧杯中，加水至50 mL，杯中预先放入50只钉螺，并加纱网固定。在室温25℃左右，日光灯光照下感染2 h。每组感染200只钉螺。

1.3.2单个钉螺感染：吸取含毛蚴水于玻片上，在解剖镜下计数，用水冲入24孔细胞培养板孔内，在每孔内加钉螺一只，上盖纱盖，在室温25℃左右，日光灯光照下感染2 h。感染过程中，钉螺爬至纱盖上时，用解剖针轻轻拨入水中。毛蚴量分别为5、10、20、40只，每组分别感染浙江省山丘型长兴、常山、婺城钉螺和水网型秀洲、平湖钉螺各200只，感染同地域钉螺200只作阳性对照。

1.3.3饲养、鉴别：感染后钉螺采用搪瓷盘底部放置一层海绵，上铺草纸置于25℃左右室温分别饲养。每隔1周喂食1次，更换草纸1次。45 d后采用压碎法对钉螺进行镜检，如见钉螺软体有收缩反应为活螺，反之为死螺，有血吸虫母胞蚴、子胞蚴或尾蚴的钉螺为阳性螺，并做计数。

1.4 统计方法

采用SPSS13.0统计软件分析。

2 结果

2.1 钉螺群体感染情况

用湖沼型血吸虫病流行区血吸虫毛蚴感染血吸虫病传播阻断地区钉螺结果见表1。

表1 不同地区血吸虫毛蚴感染传播阻断地区钉螺的结果Tab.1 Susceptibility of Oncomelania hupensis from areas Schistosomiasis transmission-interrupted to Schistosoma japonicum miracidia from different areas

湖沼型血吸虫病流行区安徽、江西和江苏血吸虫毛蚴均可感染浙江山丘型长兴、常山、婺城钉螺和水网型秀洲、平湖钉螺。三地血吸虫毛蚴感染其本地钉螺，感染率均高于感染浙江各地钉螺。浙江水网型秀洲钉螺对三地血吸虫易感性高，感染率分别为29.88%、26.35%和18.18%，三者感染率有显著性差异(χ2=12.97，P<0.01)。浙江山丘型婺城钉螺对三地血吸虫易感性低，感染率分别为1.69%、0.56%和0.57%，三者感染率无统计学差异(χ2=1.62，P>0.05)。

2.2 单个钉螺感染情况

用湖沼型血吸虫病流行区血吸虫毛蚴以5、10、20和40个不同数量感染传播阻断地区单个钉螺结果见表2。

湖沼型血吸虫病流行区安徽、江西和江苏省血吸虫毛蚴5个/螺的量感染浙江山丘型长兴、常山和婺城钉螺，除江西血吸虫感染浙江山丘型常山钉螺发现2只阳性螺，其余均未感染；感染浙江水网型秀洲、平湖钉螺感染率为5.52%～8.11%，差异无统计学意义(χ2=1.83，P>0.05)，均处于较低感染率。浙江山丘型婺城钉螺用上述三地血吸虫毛蚴5、10个/螺感染后，除江苏血吸虫感染组发现1只阳性钉螺，其余组均未发生感染。用湖沼地区血吸虫20、40个/螺毛蚴量感染浙江各地钉螺，均有阳性钉螺发现。各地钉螺随着感染血吸虫毛蚴量的增加，感染率也随之增大。三地血吸虫毛蚴感染浙江钉螺后感染率均低于感染其本地钉螺。

2.3 单个钉螺感染后死亡情况

不同数量血吸虫毛蚴感染钉螺后，钉螺显示出不同的死亡率，结果见表3。

表2 血吸虫毛蚴数量与传播阻断地区钉螺易感性Tab.2 Susceptibility of Oncomelania hupensis from Schistosomiasis transmission-interrupted areaswith different dose of Schistosoma japonicum miracidia

表3 传播阻断地区钉螺与不同量血吸虫毛蚴感染后死亡率Tab.3 Mortolity of Oncomelania hupensis infected in different dose of Schistosoma japonicum miracidia

用湖沼型血吸虫病流行区安徽、江西和江苏省血吸虫毛蚴5个/螺感染钉螺，钉螺死亡率最低是安徽血吸虫感染浙江山丘型长兴钉螺组为5.50%，最高是安徽血吸虫感染浙江水网型秀洲钉螺组和江西血吸虫感染浙江山丘型常山钉螺组，均为12%，5个毛蚴感染各组平均死亡率为9%。10只毛蚴感染钉螺，死亡率最低是江苏血吸虫感染常山钉螺为6.5%，最高为安徽、江西省血吸虫感染浙江水网型秀洲钉螺组，均为17.5%，各组平均死亡率为11.69%。20只毛蚴感染钉螺，死亡率最低是江西血吸虫感染浙江山丘型婺城钉螺组为10.5%，最高是江西血吸虫感染浙江水网型秀洲钉螺，为25.5%，各组平均死亡率为17.14%。40只毛蚴感染钉螺，死亡率最低是江西血吸虫感染浙江山丘型长兴和婺城钉螺组，均为14.5%，最高是安徽血吸虫感染长兴钉螺，为28.5%，各组平均死亡率为19.47%。不同毛蚴量感染钉螺后平均死亡率具有显著性差异(χ2=204.43，P<0.01)，钉螺随着感染血吸虫毛蚴量的增加死亡率也随之增高。

3 讨论

血吸虫中间宿主钉螺是血吸虫病流行的重要环节，钉螺对血吸虫的易感性直接影响血吸虫病的流行程度，在血吸虫病传播动力学中发挥重要作用。全国先后有5个省达到血吸虫病传播阻断标准，但尚有一定面积的残存钉螺，其中浙江省残存钉螺面积最大，螺情抽样调查结果显示浙江省有螺面积约为150～200 hm2(闻礼永等，2004)。本文根据传播阻断地区残存钉螺面积大小和地域分布特点抽取了浙江省3个山丘型血吸虫病历史流行区长兴、常山、婺城和2个水网型历史流行区秀洲、平湖钉螺作为实验螺。随着城市化建设的进展，流动人口日益增多，传播阻断地区输入性血吸虫病例也呈上升势头(张剑锋等，2007；江西均等，2007)。研究显示，浙江省66%以上输入性血吸虫病人来自江西、安徽，而浙江省近年来发现的输入性血吸虫病病例多以江西、安徽居多(李理等，2012)。上海市流动人口中来自安徽省流动人口的血清学阳性数和发病人数均占首位(周晓农等，2007)。因此本研究选用血吸虫地域株分别为与浙江省和上海市毗邻的尚未达到血吸虫病传播阻断标准的安徽、江西和江苏省血吸虫。

结果显示，输入性的血吸虫可以感染浙江钉螺，提示血吸虫病流行区外源性传染源的输入可感染传播阻断地区钉螺形成疫水，从而导致血吸虫病在这些地区重新传播流行。浙江钉螺对湖沼型血吸虫病流行区血吸虫毛蚴易感性低，与许学积等(1987)报道血吸虫毛蚴对异地钉螺的感染率一般低于本地的感染率相符。不同类型血吸虫病历史流行区钉螺对输入性的血吸虫表现出了不同的易感性，水网型地区钉螺对湖沼型地区血吸虫毛蚴易感性高，山丘型历史流行区钉螺对湖沼型地区血吸虫毛蚴易感性低。水网型血吸虫病历史流行区一旦钉螺面积回升，只要输入少量病原体，即有可能引起血吸虫病重新传播流行，因此需加强查灭残存钉螺力度，以巩固血防成果。山丘型历史流行区钉螺对湖沼型流行区血吸虫的易感性低，但当血吸虫毛蚴数量达到一定程度，仍可引发血吸虫病重新传播流行，且本次研究未采集到阳性光壳钉螺，我省山丘型光壳钉螺可能对这些地域株血吸虫的易感性高，因此，这些地区仍不能放松警惕。

研究结果显示，用安徽、江西和江苏血吸虫毛蚴以5个/螺感染浙江山丘型血吸虫病历史流行区长兴、常山和婺城钉螺，除江西血吸虫感染常山钉螺发现2只阳性螺，其余均未感染，提示当血吸虫的毛蚴量下降后，钉螺可不发生感染。如果通过大量研究，找到钉螺与血吸虫幼虫的感染阈值，可为开展血吸虫病流行病学研究、制定防治对策和监测指标、预测流行趋势等提供理论依据，具有重要的现实指导意义。