王 华，邹阿玲，张光伟，肖 锐，牛志宏，张建军，刘水涛，张 健，李 强

(1.克拉玛依绿成农业开发有限责任公司，新疆 克拉玛依 834000;2.新疆动物胚胎工程技术研究中心，新疆 呼图壁 831203)

关于超排供体母牛和移植受体母牛的季节性差异，均有不同的报道。但比较不同季节生产的冷冻胚胎的妊娠率方面的报道并不多见。

季节对母牛超排的影响主要表现在四季气候的变化，取决于超排母牛所在的地理位置。在春季和冬季，超排后青年母牛的排卵数和有效胚胎数，明显高于夏季和秋季[1]。Pradhan等(2008)报道，冬季比春、夏和秋季的回收卵数和有效胚胎数明显增加。冬季和春季的可移植胚胎数比夏季和秋季多。虽然不同国家和地区有关季节对超排效果的报道不同，但都一致认为，夏季由于热应激的影响，超排效果和有效胚胎数均较低。

季节对受体移植后的妊娠率也有不同程度的影响。Leon等[2]报道，夏季移植胚胎后，妊娠率最低(58.9%)，春季较高(68%)。他们认为，夏季移植胚胎妊娠率低的部分原因是热应激的影响。热应激降低了母牛的发情持续期和发情强度，延长了发情周期，改变了激素分泌类型，增加了子宫温度而降低了受胎率，这些都与环境温度高有关。虽然前列腺素在四个季节都可以诱发有黄体母牛的发情，但处理后的繁殖力可能由于季节对黄体功能的影响，出现不同结果。

环境温度对移植前胚胎有直接的影响。胚胎死亡率增加与移植前在37℃孵育时间长有关[3]。在加拿大阿尔伯特省，冬季非常寒冷，Shea等报道[4]，在12、1和2月移植胚胎，妊娠率最低，可能与移植前寒冷的环境有关。

本文的目的是验证和比较，在不同季节生产的冷冻胚胎移植后妊娠率是否存在差异。

1 材料与方法

1.1 胚胎生产地点

新疆呼图壁种牛场。

1.2 胚胎生产

在春夏秋冬四个不同季节，按常规FSH减量法(总剂量10 mg)进行15～16月龄青年荷斯坦母牛的超排。母牛发情后按常规配种，第7天后回收胚胎[1]。在解剖显微镜下，将A级致密桑葚胚至扩张囊胚选出，放入0.25 mL细管准备冷冻。冷冻方法为常规的逐步降温法，冷冻液为PBS+乙二醇。

1.3 受体移植地点

新疆南北疆各地州土种母牛。

1.4 受体移植

将受体母牛进行同期发情处理，发情后第7～8天或PG注射后第10天，经直肠检查母牛黄体和生殖道情况，合格受体用于胚胎移植。将不同季节生产的各发育阶段的冷冻胚胎，采用一步细管法移植给受体母牛。私人农牧户的受体牛多以放牧为主，主要在春季和夏季进行移植。一般是在注射PG后第10天，不观察发情，直接经直肠检查后，选出合格的受体母牛移植胚胎。牛场的受体母牛是四季发情配种，秋季和冬季以牛场移植为主。在母牛发情后第7～8天移植胚胎。

2 结果

从表1可以看出，春、夏、秋、冬四个季节冷冻的胚胎，移植后妊娠率分别为49.21%、47.78%、54.31%和55.81%。从结果看，虽然春季和夏季妊娠率稍低一些(49.21%和47.78%)，但与其他季节差异不明显。

表1 不同季节生产的冻胚的妊娠率

3 讨论

本文比较了不同季节生产的冷冻胚胎的质量。结果表明，四季生产的胚胎质量差异不大，移植后的妊娠率接近。由于春季和夏季的受体母牛主要来自私人农牧户，胚胎移植后的妊娠率稍低一些。秋季和冬季的受体母牛主要来自牛场，母牛的饲养管理较好，并进行了准确的发情观察，妊娠率要稍高一些。刘水涛等[5]报道，在农牧户和牛场，受体母牛的平均妊娠率分别为47.92%和52.76%。与本文的结果相近。

夏季热应激对超排反应没有不利影响，但增加了发育停滞和质量差胚胎的比例。胚胎对母牛发情后最初7天的母体热应激是敏感的[4]。Edwards 等也报道[6]，胚胎发育期间的妊娠母牛，在热应激环境下，会造成胚胎损失。胚胎死亡的原因是在升高的温度下，胚胎发育停止。因此，胚胎暴露在热应激环境下，升高了培养温度，阻止或降低了后来的胚胎发育。胚胎死亡的部分原因是降低了蛋白质合成。

Hansen认为[7]，超排母牛配种后(1或2细胞期)，出现热应激，发育到囊胚期时，降低了第8天胚胎妊娠的比例。然而，当热应激发生在配种后第3天(4～8细胞期)，第5天(16细胞到桑葚胚)和第7天(桑葚胚到囊胚期)时，热应激对第8天囊胚的妊娠比例没有不利影响。热应激对发情后第7天接受胚胎移植的受体的影响，比此时发情配种的母牛要小，因为第7天后的胚胎已经渡过了胚胎对热应激最敏感期。

李强等(未发表资料)发现，发情和配种时下雪，供体母牛的有效胚胎数和有效胚胎率明显减少，但配种2天后下雪，对有效胚胎数影响不大。由此看来，在发情和配种时，对母牛的任何应激反应，都有可能降低供体母牛的有效胚胎率。笔者认为，夏季母牛配种后妊娠率低，可能是受热应激影响，卵泡发育缓慢，从而推迟了排卵时间。因此，有些学者，在夏季用胚胎移植替代人工授精，或二者兼顾，大大提高了母牛的妊娠率。

我们的统计结果表明，四季生产的冷冻胚胎(发情后第7天回收的胚胎)，移植后的妊娠率差异不大。与Hansen[7]的结论一致。由此得出结论，季节对胚胎发育的影响，与胚胎日龄有关，日龄越小，影响越大。季节对冷冻后胚胎的质量影响不大。

[1] 李强，张光伟，刘水涛，等.不同季节对荷斯坦青年母牛超排效果的影响 [J].中国奶牛，2013，1.

[2] Leon D，Weaver，John Galland.Factors Affecting Embryo Transfer Success in Recipient Heifers Under Field Conditions[J].J.Dairy Sci.1986，69，10，2711-2717.

[3] Renard J P，Y Heyman，J P Ozil.Importance of gestation losses after nonsurgical transfer of cultured and non-cultured bovine blastocysts.Vet.Rec.1980，107:152.

[4] B F Shea，R E Janzen，D P McDermand.Seasonal variation in response to stimulation and related embryo transfer procedures in Alberta over a nine year period，Theriogenology，1984，21(1)，186-195.

[5] 刘水涛，肖锐，李强，等.注射PG和观察发情后的牛胚胎移植结果的比较 [J].黑龙江畜牧兽医，2010，16.

[6] Edwards J L，Hansen P J.Differential responses of bovine oocytes and preimplantation embryos to heat shock.Mol.Reprod.Dev.1997，46:138-145.

[7] Hansen P J.Embryonic mortality in cattle from the embryo's perspective，J.Anim.Sci.，2002，80(E.Suppl.2):E33-E44.