翁志聪，朱中元，蒋艳琴，李 敏

(1.海南大学环境与植物保护学院，海南海口570228;2.海南省农垦总医院 检验科，海南海口570311)

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)是一种主要通过性传播的致癌病毒，在分类学上，它隶属乳多空病毒科(Papovaviridae)的乳头瘤病毒属，常侵染人生殖道，引起人类上皮内瘤变(Cervical intraepithelial neoplasias，CIN)，最终可能导致宫颈癌的发生.根据DNA碱基序列的差异，大约可分为200多种基因分型［1］. 与人类疾病相关的主要有 HPV 6，11，16，18，31，33，35，39，42，43，44，45，51，52，56，58，66，68，70，73，83等型别，不同型别对人的致癌性不同.研究表明，对于不同地区的不同人群，其感染HPV的型别有较大的差异性.这不利于正式上市的HPV6，11，16，18四种型别疫苗的使用.因此，对本地区进行HPV型别的筛查，确定主要的流行型别，有利于研发适合的HPV疫苗，从而促进海南国际旅游岛的健康发展.

1 材料与方法

1.1 样本来源 抽取2010－10－18～2012－05－10送至海南省农垦总医院检验科检测的样本，样本总数为1 045份，女性为宫颈脱落细胞，男性为精液，剔除二次复查数据.

1.2 仪器及试剂 PCR仪为Applied Biosystems 2720 Thermal Cycler，杂交仪为Robbins Scientific Model 1000;人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒为深圳亚能公司生产.

1.3 样本采集及保存 以专用宫颈脱落细胞采集器采集.使用阴道张开器暴露宫颈，用棉拭子去除过多的分泌物.利用宫颈刷于宫颈口单方向旋转数周后，放入洗脱管中，折断刷柄，拧紧管盖，做好样本标识;2～8℃保存不超过7 d，－20℃保存不超过3个月.

1.4 HPV分型 根据人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒操作.首先进行HPV DNA提取;以DNA提取物为模板进行PCR扩增;产物进行Southern杂交;最后洗膜显色判断结果.

1.5 统计分析 数据利用SPSS 16.0和SAS软件进行统计分析.

2 结果

2.1 不同性别感染HPV的情况 在检测的1 045份样本中，男性样本为16份，阳性率为31.25%(5/16);其余均为女性样本，阳性率为41.89%(431/1 029).

2.2 不同年龄组比例 将所有阳性标本检测者的年龄分成:30岁以下，30～40岁和40岁以上3个年龄组，结果30岁以下131人，30～40岁有118人，40岁以上107人(注:80个受感染样本的年龄不详)，比例分别为30.05%，27.06%和24.54%.30岁以下与30～40岁年龄组比较;30岁以下与40岁以上年龄组比较，均无统计学意义(χ2=0.809 5，P ＞0.05;χ2=3.057 1，P ＞0.05)，受感染人群不同年龄组比例见图1.

图1 受感染人群不同年龄组比例

2.3 总阳性率和多重侵染情况 抽取的1 045份样本中，有436份检出HPV，总阳性率为41.72%(436/1045);其中有337份只检出1种型别感染(单侵染)，65份检出受2种型别感染(二重侵染)，34份检出受3种或3种以上型别感染(三重或三重以上侵染)，分别占感染样本的77.29%，14.91%和7.80%，见图2.另外，在单侵染中，高危型所占比例为74.78%(252/337)，主要型别为 HPV16，18，33，52，56，58，83 等 .

2.4 不同HPV型别检出情况 436份样本一共检测出21种不同的 HPV型别，主要的型别有 HPV16，HPV58，HPV43，HPV52 和 HPV6，分别占 22.25%，17.89%，16.74%，16.06% 和8.94%，见表 1.

图2 单侵染、二重侵染和多重侵染的结果

表1 不同HPV型别的阳性率 n=436

3 讨论

李晓阳［2］报道北京石景山地区20.8%的感染者为多重侵染(非单侵染)，高危型感染率为64.4%.CLIFFORD［3］等对全球各大洲HPV型别作了筛查分析，总感染率为83% ～89%;HPV16，HPV18为主要的感染型别，分别占45.9% ～62.6%和10% ～14%.而在亚洲，HPV58，HPV52型别的感染率紧随其后，分别占 5.8%和4.4%.陈汶［4］在我国筛查总结报告中指出:HPV6(46.6%)和 HPV11(42.4%)是最常见的HPV型别，其次是HPV16(11.8%).广州地区尖锐湿疣患者HPV单侵染以HPV6，HPV11和HPV16型别为主［5］. 深圳地区主要的高危型别是 HPV 16(22.4%)，HPV52(12.1%)，HPV58(11.3%)［6］. 浙江地区感染率前 5 位的型别分别为 HPV52(3.1%)，HPV16(2.5%)，HPV58(2.1%)，HPV68(1.0%)及 HPV81(0.9%)［7］.

男女都可以受到HPV的感染，本次检测以女性占绝大部分，主要原因有:1)现今缺乏明显可靠的方法检测男性是否携带HPV;2)感染HPV后，在免疫力正常的情况下很少出现临床症状;3)尖锐湿疣等HPV感染症状也可以完全治愈.虽然男性样本少，但是阳性率为31.25%(5/16)，因此，寻找可靠有效的检测男性携带HPV的方法有利于提前发现疾病，维持健康.

HPV的传播主要是通过性行为，首次性行为的年龄和性伴侣的数量也与感染率相关.从本次检测的不同年龄组可以看出，虽然3个年龄组之间没有统计学意义，但是感染最多的是年龄在30岁以下性行为活跃的人群;随着年龄的增长，感染率有下降的趋势.宫颈癌多发生在年轻时受高危型HPV重复感染的人群，随着年龄的不断演变，在35岁以后为宫颈癌发病高峰期.因此，要重点筛查30岁以下性行为活跃的人群.

高危型HPV感染是子宫颈癌变的必要条件，但不是充分条件.从宫颈癌前病变到宫颈癌是一个量变到质变的过程，其持续时间长，是多基因、多因素综合作用的结果，因此，要早发现早治疗，避免重复侵染.本次检测的所有样本中，总阳性率为41.72%，不同型别的检出率从高到低分别是 HPV16，HPV58，HPV43，HPV52 和 HPV6，分别占22.25%，17.89%，16.74%，16.06%和8.94%. 受感染样本中有22.71%的受感染者感染了2种或者2种以上型别，并且在77.29%的单侵染人群中，有74.78%的人受到高危型HPV的感染.在检测出的前5名中，高危型HPV16，HPV58和HPV52占有3个席位，高危型检出率高，与北京石景山地区相似.从地区分布情况上看，与全国相比，海口地区的HPV11检出率相对低，HPV58，HPV43，HPV52检出率相对较高，但是HPV58和HPV52皆为亚洲地区常感染的型别.而HPV18检出率为4.13%(18/436)，与亚洲其他地区相比，其检出率较低，因此，海口地区HPV的分布具有一定的区域性.

目前，正式上市的疫苗主要是用于预防HPV6，11，16，18四种型别.因此，了解不同地区不同HPV型别的分布情况，有利于疫苗的研发.海口地区型别分布表明，上市疫苗不能预防HPV58，HPV43和HPV52的感染，不利于宫颈癌的控制和治疗，为此，应该根据型别分布情况来研发适合本地区的新型疫苗，继续加强对不同地区的HPV型别分布进行调查研究，以提高人群健康水平.

［1］EILEEN M B.Human papillomavirus and cervical cancer［J］.Clin Microb Reviews，2003，16:1 －17.

［2］李晓阳，郭学青.北京石景山地区人乳头瘤病毒HPV感染的分子流行病学研究［J］.国际检验医学杂志，2011，32(8):866－868.

［3］CLIFFORD G M，SMITH J S，PLUMMER M，et al.Human papillomavirus types in invasive cervical cancer worldwide:a metaanalysis［J］.Br J Cancer，2003，88(1):63 －73.

［4］陈汶.中国生殖器疣和子宫颈癌HPV感染型别流行病学研究［D］.北京:北京协和医学院，2010:15－16.

［5］冯琼，肖青，邱秀.广州地区尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒检测与基因分型［J］.中国热带医学，2010，10(2):142－143.

［6］王月云，彭绩，周海滨，等.深圳市妇女子宫颈人乳头瘤病毒感染分子流行病学分析［J］.中国慢性病预防与控制，2012，20(3):293－295.

［7］叶菁.浙江地区HPV流行病学调查及宫颈癌危险因素在HPV筛查中的作用［D］.杭州:浙江大学，2010:16－17.