崔旭光，杜立娟，徐茂伟，陈艳红

(吉林华康药业股份有限公司，吉林 敦化 133700)

HPLC测定活力源片中人参皂苷Rg1、Re含量

崔旭光*，杜立娟，徐茂伟，陈艳红

(吉林华康药业股份有限公司，吉林 敦化 133700)

目的：建立高效液相色谱法测定活力源片中人参皂苷Rg1、Re的含量。方法：采用Agilent TC C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相：乙腈-水(20∶80)；流速：0.8 mL·min-1，检测波长：203 nm。结果：人参皂苷Rg1在0.120～2.040 μg呈良好线性关系，r=0.999 6，平均回收率为97.1%，RSD=0.7%(n=6)；人参皂苷Re在0.297～5.049 μg呈良好线性关系，r=0.999 8，平均回收率为97.4%，RSD=0.3%(n=6)。结论：本方法分离效果好、准确、重复性好，可用于该制剂的质量控制。

高效液相色谱法；人参皂苷Rg1；人参皂苷Re；活力源片

活力源片收载于《卫生部药品标准》[1]，是由人参茎叶皂苷、黄芪、麦冬等5味中药组成的复方制剂，具有益气养阴、强心益肾的功效。方中人参茎叶皂苷为君药，原方法采用高效液相色谱测定其中人参皂苷Re(C48H82O18)含量，要求每片不得少于5.0 mg。为了提高对产品质量的控制，作者采用高效液相色谱法同时测定人参皂苷Re和Rg1含量。

1 仪器与试药

LC-2010 A HT高效液相色谱仪、 LC solution色谱工作站；Sartorius BP211D 电子天平；CQX25-06型超声波清洗器(250W，50 kHz)。

人参皂苷Rg1对照品(批号：110703-200322)、人参皂苷Re对照品(批号：110754-200421)，含量测定用，购于中国食品药品检定研究院。活力源片(天津和治药业有限公司，批号：080101，080102，080103)。乙腈为色谱纯；水为经SG型超纯水器制备的纯化水；其他试剂均为分析醇。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent TC C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(20∶80)；流速：0.8 mL·min-1；柱温：35 ℃；检测波长：203 nm；进样量5 μL。理论板数按人参皂苷Re计算应不低于2 500。

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液的制备 取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取细粉约0.5 g，精密称定，置容量瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声处理(250 W，25 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品适量，加甲醇制成每1 mL含人参皂苷Rg10.1 mg、人参皂苷Re 0.3 mg的混合溶液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按照处方配比投入除人参茎叶总皂苷之外的其余中药和辅料，制成阴性对照品，按供试品溶液的制备方法制备。

2.3 检测波长的选择

分别取人参皂苷Rg1、Re对照品的甲醇溶液，经紫外分光光度计在190～400 nm扫描，人参皂苷Rg1与Re均在204 nm波长处有最大吸收，并参照《中国药典》2010年版一部中收载的人参与人参叶含量测定项下方法，选择203 nm波长处，作为测定波长。

2.4 阴性干扰试验

在2.1色谱条件下，分别取对照品溶液、阴性对照溶液、供试品溶液各5 μL注入色谱仪，记录色谱图，结果见图1。由测定结果可见，阴性对照溶液及空白溶剂溶液对测定无干扰。

1.人参皂苷Rg1 2.人参皂苷ReA.人参皂苷Rg1、Re对照品 B.供试品 C.阴性对照品图1 活力源片及对照品HPLC图

2.5 线性关系考察

精密称量人参皂苷Rg1对照品6.00 mg、人参皂苷Re对照品14.85 mg，分别置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得人参皂苷Rg1对照品溶液(0.120 mg·mL-1)和人参皂苷Re对照品溶液(0.297 mg·mL-1)。分别精密吸取1，5，9，13，17 μL，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标，对照品进样量(μg)为横坐标，进行线性回归，得人参皂苷Rg1回归方程为Y=427 053X-3 233.2，线性范围0.120～2.040 μg，r=0.999 6；人参皂苷Re回归方程为Y=406 812X-1 847.5，线性范围0.297～5.049 μg，r=0.999 8。

2.6 精密度试验

取0.103 mg·mL-1的人参皂苷Rg1对照品溶液和0.307 mg·mL-1的人参皂苷Re对照品溶液，分别重复进样6次，记录色谱图，结果人参皂苷Rg1峰面积RSD=0.5%，人参皂苷Re峰面积RSD=0.1%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于0，2，4，8，10，12 h注入高效液相色谱仪，测定人参皂苷Rg1和人参皂苷Re含量，计算人参皂苷Rg1的RSD=0.6%(n=6)和人参皂苷Re的RSD=1.2%(n=6)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.8 重复性试验

精密称取同一批号的样品6份，按2.2供试品溶液制备方法制备，按2.1色谱条件测试，测定人参皂苷Rg1峰面积的RSD=1.1%(n=6)，人参皂苷Re峰面积RSD=1.0%(n=6)，结果表明本法的重复性好。

2.9 回收率试验

采用加样回收测定法，精密称取已知含量的样品(批号：080101)约0.25 g，分别精密加入人参皂苷Rg1对照品溶液、人参皂苷Re对照品溶液各10 mL，依法测定，结果见表1，表明方法可靠，回收率符合要求。

表1 活力源片中人参皂苷Re、Rg1加样回收率试验

2.10 样品含量测定

分别精密称取3批活力源片，按供试品溶液制备方法制备，精密吸取对照品溶液及供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定人参皂苷Rg1和人参皂苷Re含量，结果见表2。

表2 活力源片中人参皂苷Re、Rg1含量测定 mg/片

3 讨论

3.1 流动相的选择

参考有关文献[2-5]，分别选择乙腈-水(20∶80)、乙腈-0.05%磷酸溶液(20∶80)为流动相，均可用于该含量测定，乙腈-水配制起来更为方便。

3.2 供试品制备方法的选择

实验比较了甲醇超声提取、甲醇回流提取两种制备方法，结果两种方法无显著差异，但甲醇超声提取更为快捷、简便，故选择甲醇超声提取。

3.3 色谱柱的选择

选择3种品牌的色谱柱试验，(1)Agilent TC-C18；(2)Diamonsil(R)钻石 C18；(3)Agilent ZORBAX Extend-C18。结果表明人参皂苷Rg1与Re的结构相似，分离比较难，但还是能适用多种品牌的色谱柱，只是当色谱柱被较长时间使用后，色谱柱的柱效降低，使分离变得比较困难。

实验建立的含量测定方法操作简便、准确，重现性好，可作为控制活立源片内在质量的方法。

[1] 卫生部.卫生部药品标准·中药成方制剂[S].第十七册.1998：186.

[2] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：8.

[3] 刘建顺，徐春波，温艳，等.丹莪妇康颗粒中人参皂苷Rg1、Rb1含量测定[J].中国药师，2007,(3)：262-263.

[4] 于桂兰，杨建春，王春艳，等.阿参养血胶囊质量标准研究[J].中国药业，2008,17(7)：29-30.

[5] 刘文启.HPLC法测定消渴降糖片中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re含量[J].山东中医杂志，2007,26(9)：637-639.

HPLCDeterminationofGinsenosideRg1andGinsenosideReinHuoliyuanTablet

CUI Xu-guang*，DU Li-juan,XU Mao-wei,CHEN Yan-hong

(JiLinHuakangPharmceuticalCo.，Ltd，Dunhua133700，China)

Objective：To establish HPLC method for determination of Ginsenoside Rg1 and Ginsenoside Re in Huoliyuan tablet.Methods：The Agilent TC-C18 column(4.6 mm×250 mm，5 μm)，acetonitrile-Water(20∶80)as the mobile phase.Flow rate 0.8 mL·min-1，the detection wavelength was 203 nm.Results：Ginsenoside Rg1on 0.120～2.040 μg showed good linear relationship，r=0.999 6，the average recovery was 97.1%，RSD=0.7(n=6)；Ginsenoside Re in 0.297～5.049 μg showed good linear relationship，r=0.999 8，the average recovery was 97.4%，RSD=0.3(n=6).Conclusion：This method is good in separation effect，accurate，and with good reproducibility，can be used for Huoliyuan tablet quality control.

HPLC；Ginsenoside Rg1；Ginsenoside Re；Huoliyuan tablet

2013-03-04)

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崔旭光，E-mail：hkyycxg@163.com