曹红云，洪燕萍，邱丰艳



枇杷根与枇杷叶的抗氧化活性比较

曹红云，洪燕萍，邱丰艳

(龙岩学院 生命科学学院，福建 龙岩 364012)

试验测定枇杷根与枇杷叶中的黄酮、总酚的含量及抗氧化活性的大小．结果表明在枇杷叶、枇杷根皮、枇杷根木质部3个部位中，根皮的黄酮、总酚含量最高，根木质部较低、叶最低．通过DPPH法和FRAP法抗氧化能力的测定，枇杷根皮抗氧化活性最强、根木质部较弱、叶最差．黄酮、总酚含量与自由基清除能力及总还原能力均呈极显著的正相关．

枇杷根；枇杷叶；黄酮；总酚；抗氧化

枇杷叶是常见的中药材，具清肺止咳、降逆止呕之功效，药理研究表明具有较好的抗炎和止咳作用，多制成枇杷叶膏，是镇咳剂、化痰剂和利尿剂．有研究表明枇杷叶的功效与其所含的抗氧化活性成分如黄酮、酚类以及萜类成分有关．枇杷根也具有一定的药用价值，《民间常用草药汇编》记载：枇杷根有“镇痛，下乳”之功效；《生草药手册》中认为枇杷根可以“治咳嗽、吐血伤症”；《四川中药志》中记载枇杷根能“治久年咳嗽，疗虚劳咳嗽”．目前关于枇杷的药用研究主要集中在枇杷叶，枇杷的其它器官如花、果实等也有相关报道，而关于枇杷根的研究除传统疗效的描述外则近乎空白．本文对枇杷根和枇杷叶中的黄酮和总酚含量进行检测，以期比较枇杷根、叶的抗氧化活性，及抗氧化活性与黄酮、总酚含量间的关系，探讨枇杷根潜在的药用价值．

1 材料与方法

1.1 材料

普通栽培枇杷()叶片和根采自福建莆田．叶片采集后在40 ℃左右烘干，粉碎过40目得叶片干粉．采集枇杷侧根部位，自然阴干，根皮与根木质部分开粉碎过40目得根皮和根木质部干粉．

1.2 仪器试剂

仪器:超声波清洗机8210LHC(1500w)、旋转蒸发仪LABOROTA4000 (Heidolph)、紫外可见分光光度计(UV-2000)．

药品与试剂：DPPH(1,1-二苯-2-苦肼基)、TPTZ(三吡啶三吖嗪)、Folin-Ciocalteu试剂和没食子酸购买于Sigma公司；其它试剂均为分析纯．

1.3 方法

1.3.1 材料的提取

取枇杷根皮、根木皮部、叶片的干粉各0.5 g，分别加入体积分数为70 %的乙醇20 mL，超声波振荡处理40 min，中间间隔10 min，静置过夜．离心取上清液置于4 ℃冰箱保存．

1.3.2 枇杷根、叶黄酮含量的测定

黄酮含量测定采用亚硝酸钠、硝酸铝比色法，参照Heimler et al(2005)和Wang et al(2005)，方法稍微改动．

芦丁标准曲线的制作：取芦丁标准品烘干至恒重，用体积分数为30 %的乙醇配制成0.2 mg·mL芦丁标准母液．分别取母液300, 350, 400, 450, 500, 550, 600 , 650, 700, 750, 800 μL，各加体积分数为30 %乙醇至1 mL，再加入质量分数为5 %亚硝酸钠60 μL，静置5 min；加入质量分数为10 %硝酸铝60 μL，静置6 min，最后加入 1.0 mol·L氢氧化钠400 μL和质量分数为30 %乙醇480 μL，静置15 ~ 20 min，测定510 nm O.D值．

提取液黄酮含量的测定：取质量浓度为5 mg·mL提取液50 μL，代替芦丁标准母液，按上述标准曲线的测定方法测定O.D值．结果表示为每克干粉中含有黄酮相当于芦丁的毫克数，即黄酮含量mg芦丁/g干粉．每个样品重复3次．

1.3.3 枇杷根、叶总酚含量的测定

总酚含量测定采用Folin-Ciocalteu法，结果表示为每克干粉中含有总酚相当于没食子酸的毫克数．

没食子酸标准曲线的制作：没食子酸用纯水配制成1 mg·mL母液，再将母液稀释至质量浓度10 μg·mL~ 90 μg·mL；取0.3 mL的各稀释液，加入0.2 mol·L的福林酚试剂(原液2 mol·L，稀释10倍)和质量分数为7.5 %碳酸钠1.2 mL，45 ℃水浴15 min，测定760 nm处的O.D值．

提取液总酚含量的测定：取质量浓度为5 mg·mL提取液50 μL，加纯水950 uL稀释．取0.3 mL稀释液，按上述标准曲线测定方法测定O.D值，每个样品重复3次．

1.3.4 DPPH法测定枇杷根、叶自由基清除能力

1,1-二苯基-2-苦肼基自由基( DPPH·)分析法是一种进行定量分析筛选自由基清除剂的简便方法(Mellors et al.，1966)．

DPPH吸光度曲线：DPPH乙醇溶液0.01，0.02，0.03，0.04，0.05 mg·mL，分别测定517 nm的O.D值，绘制DPPH浓度与O.D值标准曲线．

提取液DPPH自由基清除能力的测定：样品提取液稀释5个浓度，取稀释液20 uL，加1.98 mL DPPH无水乙醇溶液，反应30 min．测定517 nm的O.D值，计算DPPH自由基清除率%．以提取物的不同浓度为横坐标，以%为纵坐标作图，根据清除率线性回归曲线计算EC．EC即SR %为50 %时的提取物溶液浓度．EC越低，自由基清除能力越大．提取物对DPPH自由基的清除率(The percentage of scavenging radical capacity)表示为%．由于实验中样品自身的O.D值仅千分之几，忽略不计，的计算公式简化成% = (A－A)/A* 100 %，式中：A—DPPH乙醇溶液的O.D值，A—加入提取物溶液后的DPPH乙醇溶液的最终O.D值．各样品DPPH自由基清除能力以EC(mg干粉/mL提取液)表示．每个样品重复3次．

1.3.5 FRAP法测定枇杷根、叶总还原能力

FRAP法测总还原能力参考Benzuie和Strain (1996)的方法．根据Fe－三吡啶三吖嗪(tripyridyl-triazine, TPTZ)被还原后于593 nm处O.D值的大小检测样品抗氧化活性的大小．

FRAP标准曲线：TPTZ工作液1.8 mL 加浓度为0.025 mmol·Lmmol·LFeSO0.2 mL，以TPTZ工作液1.8 mL加纯水0.2 mL为空白，测定其在593 nm 处O.D值，绘制标准曲线．(TPTZ工作液：pH3.6，0.3 mol·L醋酸盐缓冲液，10 mmol·LTPTZ(以40 mmol·LHCl配制)，20 mmol·LFeCl，按10∶1∶1比例混合)

提取液总还原能力的测定：以每豪克干粉相当于FeSOumol表示总还原能力．各样品提取液稀释50 ~ 100倍，取稀释液0.2 mL加TPTZ工作液1.8 mL，37 ℃反应10 min，测定593 nm处的吸光值．每个样品重复3次．

2 结果与分析

2.1 枇杷根、叶黄酮含量的比较

不同样品的黄酮含量测定结果见表1所示，结果表明枇杷根皮含量最高、枇杷根木质部次之、枇杷叶含量最低；其中枇杷根皮含量与枇杷根木质部、叶的黄酮含量差异显著(< 0.05)，枇杷根木质部、叶之间的黄酮含量差异不显著(> 0.05)．

2.2 枇杷根、叶总酚含量的比较

不同样品的总酚含量测定结果见表2，结果表明枇杷根皮含量最高、枇杷根木质部次之、枇杷叶含量最低．其中枇杷根皮含量与枇杷根木质部、叶的总酚含量差异显著(< 0.05)，枇杷根木质部、叶之间的总酚含量差异不显著(> 0.05)．

表1 各样品黄酮含量

表2 各样品总酚含量

2.3 DPPH法测枇杷叶、枇杷根提取物自由基清除能力

不同样品自由基清除能力%的测定结果见表3所示，结果表明：枇杷根皮清除自由基能力最强、枇杷根木质部较弱、枇杷叶最差，且各个样品的清除能力差异已达到显著水平(< 0.05)．

2.4 FRAP法测枇杷叶、枇杷根提取物总还原能力

不同样品的总还原能力测定结果见表4所示，枇杷根皮总还原能力最强，枇杷根木质部次之，枇杷叶最低，且各个样品之间的总还原能力差异已达到显著水平(< 0.05)．

表3 各样品提取液EC50

2.5 抗氧化能力与黄酮、总酚含量的关系

黄酮和多酚是自然界中较好的抗氧化物质，因此在测定黄酮多酚的含量及DPPH自由基清除能力与FRAP法测定总还原力的基础上，分别以黄酮含量、多酚含量及黄酮与多酚的总量与DPPH自由基清除能力、FRAP法测定总还原力之间进行比较，判断它们之间是否存在相关关系．

分析结果见图1，结果表明：枇杷叶、根中黄酮、多酚与抗氧化能力呈正相关关系，黄酮、多酚含量越高，DPPH自由基清除能力越强，且FRAP总还原能力也越强，说明黄酮、多酚在抗氧化中起着重要的作用．

图1 黄酮、总酚含量及DPPH自由基清除EC50和FRAP法总还原能力关系比较图

3 讨论

作为中药，枇杷根与枇杷叶一样对咳嗽有一定疗效，但针对的是不同类型的咳嗽．枇杷叶主要是针对热咳，而枇杷根则针对虚劳久咳，不同的疗效应该是基于不同的活性成分．研究表明，许多植物的药用活性与其抗氧化活性密切相关．黄酮、总酚是自然界存在的天然抗氧化成分，许多植物的抗氧化活性与黄酮、总酚的含量有关．本实验在黄酮、总酚提取的预实验中先比较了乙醇浓度、料液比对枇杷根、枇杷叶的黄酮、总酚提取率的影响，结果显示枇杷根、枇杷叶均在体积分数为70 %乙醇，1∶40的料液比的条件下提取率最高．在枇杷叶、枇杷根皮、枇杷根木质部3个部位中，枇杷根皮的黄酮、总酚含量最高，枇杷根木质部次之、枇杷叶最低．

检测植物的抗氧化活性有许多不同的方法，其中DPPH自由基清除力实验及FRAP法测定抗氧化能力，由于实验简单易行，被广泛采用．本实验采用这两种方法进行抗氧化能力检测．通过DPPH法测定枇杷叶、枇杷根提取物自由基清除能力和FRAP法测枇杷叶、枇杷根提取物总还原能力的测定结果表明，枇杷根皮的抗氧化活性最强、枇杷根木质部较弱、枇杷叶最差．该结果表明黄酮、总酚含量与自由基清除能力及总还原能力均呈极显著的正相关，说明黄酮、总酚物质是枇杷叶、根中起抗氧化作用的重要活性成分．枇杷根木质部的黄酮、总酚含量高于枇杷叶的含量，但两者之间的含量差异经方差分析不显著；枇杷根木质部的抗氧化能力则显著高于枇杷叶的抗氧化能力，说明起抗氧化活性的成分除了黄酮、总酚外，可能还有其它成分．

枇杷叶是传统的中药，本实验结果表明枇杷根作为和枇杷叶一样是枇杷树的营养器官，也含有一些生物活性成分，具有一定的药效活性．虽然枇杷根从取材上比枇杷叶困难，但是枇杷根的疗效与枇杷叶不同，有它自身的独特性，同时如果通过播种获取大量实生苗，从而大量获得枇杷根原料在生产上也是可行的，因此只要在枇杷根的成分研究上有所突破，并进一步研究其疗效，枇杷根的开发应用应该是确实可行的．

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The Comparison of Antioxidant Activity Between Loquat Root and LoquatLeaf

CAO Hong-yun, HONG Yan-ping, QIU Feng-yan)

(College of Life Science, Longyan University, Longyan, Fujian 364012, China)

Experiments were conducted to examine variation in the contents of total phenolics and flavonoids, and antioxidant activities of loquat root and loquat leaf. It is shown that in the three component of loquat leaf, loquat phlorrhizin and loquat root xylem, the contents of flavonoids and total phenolics from the loquat phlorrhizin were highest, while that form the loquat root xylem were lowest. The antioxidant activity was evaluated by DPPH method and FRAP method. The order of antioxidant activity was: loquat phlorrhizin>loquat root xylem>loquat leaf. And that the contents of flavonoids or total phenolics were significantly correlated with free radical scavenging activity/antioxidant activity.

loquat root; loquat leaf; flavonoids; total phenolics; antioxidant activity

(责任编校：李建明 英文校对：李玉玲)

Q946；S667.3

A

1673-2065(2013)04-0031-04

2013-05-01

福建省自然科学基金项目(2012D100)

曹红云(1973-),女,福建龙岩人,龙岩学院生命科学学院讲师,理学硕士;洪燕萍(1970-),女,福建龙岩人,龙岩学院生命科学学院教授,理学博士.