邓晋芳方蕾巴恩平赵云金永三★

•论 著•

柴胡复方水提物对大鼠亚急性胃溃疡的治疗作用

邓晋芳1方蕾2巴恩平1赵云3金永三3★

目的研究柴胡复方水提物对大鼠亚急性胃溃疡的治疗作用。方法大鼠胃浆膜层注射乙酸复制亚急性胃溃疡模型,然后进行实验分组，分别灌胃配给高、低剂量柴胡复方水提物进行治疗，同时以灌注生理盐水组和胃溃疡药Stillen治疗组为对照，通过比较各组间溃疡愈合率、血清中一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）活性水平以及观察胃组织形态学的改变，探讨该复方中药对实验性亚急性胃溃疡损伤的保护作用。结果阳性药物Stillen组（100 mg/kg）、柴胡复方水提物低剂量（100 mg/kg）和高剂量组（200mg/kg），溃疡面积明显低于溃疡模型组（P＜0.01），溃疡愈合率分别为93.5%、40%和92.9%，血清SOD较模型组显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，阳性药物和柴胡复方水提物低剂量组血清NO增加（P＜0.01）；胃组织病理形态学观察，模型组胃黏膜脱落坏死，大量炎性细胞浸润，阳性药物组和柴胡复方高低剂量组胃组织病变有明显改善。结论柴胡复方水提物对大鼠亚急性胃溃疡模型有明显的治疗作用。

亚急性胃溃疡模型；一氧化氮；超氧化物歧化酶

胃溃疡属于临床常见的消化系统疾病，其发病机制主要涉及胃酸和胃蛋白酶分泌过多，或胃黏膜屏障作用的减弱，而氧自由基被认为是胃黏膜损伤的重要起始因子[1]。中药治疗胃溃疡的实验研究表明，柴胡的有效单体成分如柴胡皂苷，柴胡复方如小柴胡汤、柴胡桂枝汤等，均对胃溃疡模型有改善和治疗效果[2～3]。本实验中采用的柴胡复方水提物由柴胡、黄连、白芍和甘草水提物组成，通过建立胃浆膜层注射乙酸致大鼠亚急性胃溃疡模型，测定并计算溃疡面积及溃疡愈合率、血清一氧化氮（NO）、血清超氧化物歧化酶（SOD）和胃组织形态学改变来研究柴胡复方水提物对实验性亚急性胃溃疡损伤的保护作用及其机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物

清洁级雄性Wistar大鼠60只，体重200±20 g，购于中国医学科学院实验动物中心，许可证编号：SCXR京2004-0006。

1.1.2 实验药物和试剂

柴胡复方（柴胡、黄连、白芍和甘草）水提物由北京中医药大学基础医学院组胚教研室提供；Stillen，（东亚制药公司，7A002）；NO试剂盒和SOD试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：071102和071009）；甲醛（北京化学试剂公司，批号07010）。

1.2 实验方法

1.2.1 动物分组与造模[4～5]

大鼠随机分为5组，每组10只动物。空白对照组、模型组、阳性药物Stillen对照组（200 mg/kg）、柴胡复方水提物低剂量组（100 mg/kg）和高剂量组（200 mg/kg）。除空白对照组以外，其余40只大鼠禁食不禁水24 h，以1.5%戊巴比妥（0.25 mL/100g）进行麻醉后，常规手术消毒，于剑突下纵向切开腹壁2 cm，暴露全胃，用1 mL的注射器在胃前壁体窦交接处（避开血管），注射0.05 mL的冰乙酸。然后将胃放回腹腔，逐层缝合切口，术后常规护理。进行常规消毒。之后大鼠每天灌胃给药1次，空白对照组和模型组给予等体积的生理盐水，连续给药14 d后，大鼠10%水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，取全胃，沿胃大弯剪开，生理盐水冲洗胃内残留物，观察胃黏膜损伤情况。

1.2.2 溃疡面积和溃疡愈合率

以游标卡尺测定每只大鼠胃部所有溃疡面积（mm2），溃疡面积 =溃疡最大长径×垂直于最大长径的最大宽径，并以测得大鼠所有溃疡面积的总和作为大鼠的溃疡面积。溃疡愈合百分率=[（模型组溃疡面积-实验组溃疡面积）/模型组溃疡面积]×100%

1.2.3 胃组织病理形态学观察

胃窦部取1 cm×0.5 cm×0.5 cm组织，于10 %福尔马林固定，进行常规石蜡包埋，切取5 μm的切片，HE染色（苏木精-伊红染色），置于光学显微镜下观察溃疡病变情况。

1.2.4 血清NO和SOD的测定

全血于3000 rpm，4℃离心15 min取血清，参照南京建成生物工程研究所试剂盒说明书，测定血清NO和SOD的含量。

1.2.5 统计学方法

所有数据通过SPSS16.0软件包用单因素方差分析进行两两比较检验，用（±s）表示结果，P＜0.05表示有统计学意义。

2 结果

2.1 柴胡复方水提物对乙酸注射亚急性胃溃疡模型大鼠的影响

2.1.1 溃疡面积和溃疡愈合率

结果如表1所示，阳性药物Stillen和柴胡复方水提物高低剂量均可使乙酸注射大鼠亚急性溃疡模型的溃疡面积明显减少（P＜0.01），抑制率分别为93.5%、40%、92.9%，表明柴胡复方水提物对乙酸注射亚急性胃溃疡动物模型有明显的保护作用。

表1 柴胡复方水提物对胃溃疡模型溃疡面积和溃疡愈合率的影响（±s，n=10）Table1 The effect of radix bupleuri compound water extractionon ulcer areas and ulcer healing ratio in rat with gastric ulcer (±s, n=10)

表1 柴胡复方水提物对胃溃疡模型溃疡面积和溃疡愈合率的影响（±s，n=10）Table1 The effect of radix bupleuri compound water extractionon ulcer areas and ulcer healing ratio in rat with gastric ulcer (±s, n=10)

*注：和模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

（mg/kg） Ulcer areas Ulcer healing ratio （%）Control 0 0△△ 100 Model 0 12.189±4.897 0 Stillen 100 0.784±1.612△△ 93.5 Low Dose 100 7.474±2.669△△ 40 High Dose 200 0.862±2.651△△ 92.9 Group Dose

2.1.2 胃组织病理形态学观察

如图1所示，正常组大鼠胃黏膜结构完整，无坏死。模型组大鼠胃组织黏膜层脱落坏死，大量炎细胞浸润。阳性药物Stillen组胃黏膜层有部分缺失、坏死，伴少量炎细胞浸润。柴胡复方水提物高低剂量组胃黏膜基本完整，黏膜下层无充血、水肿，无坏死，或见极少量渗出物。

图1 柴胡复方水提物对胃溃疡模型病理形态学的影响（HE×10）Figure 1 The effect of radix bupleuri compound water extraction for the rats with gastric ulcer on pathology (HE×10)*注：A：空白对照组，B：模型组，C：阳性药物Stillen组，D：复方低剂量组，E：复方高剂量组

2.2 柴胡复方水提物对乙酸注射亚急性胃溃疡模型大鼠血清NO和SOD的影响

2.2.1 血清NO

结果如表2所示，阳性药物Stillen组和柴胡复方水提物低剂量组的血清NO含量较模型组均见明显增加（P＜0.01）。

2.2.2 血清SOD

结果如表3所示，与模型组比较，阳性药物Stillen组和柴胡复方水提物高低剂量组的血清SOD明显增加（P＜0.01），表明柴胡复方水提物对消炎痛胃溃疡大鼠有明显的抗氧化作用。

3 讨论

胃溃疡是十分常见的疾病，但是目前由于大量胃溃疡疾病得不到及时的治疗或者因为治疗不彻底导致的反复发作，甚至进一步恶化为胃癌。因此，及时预防和有效治疗胃溃疡具有重要的意义。本实验采用胃浆膜层注射乙酸复制大鼠亚急性胃溃疡模型，模型组溃疡面积显著高于空白对照组，病理形态学观察到胃组织黏膜脱落坏死，伴大量炎性细胞浸润，以上结果表明急性胃溃疡模型成功。而应用柴胡复方水提物可明显降低溃疡面积和改善胃组织病理改变，表明该药对亚急性胃溃疡具有保护作用。

表2 柴胡复方水提物对胃溃疡模型大鼠血清NO的影响（±s，n=10）Table 2 The effect of radix bupleuri compound water extraction on NO of blood serum in rat with gastric ulcer(±s, n=10)

表2 柴胡复方水提物对胃溃疡模型大鼠血清NO的影响（±s，n=10）Table 2 The effect of radix bupleuri compound water extraction on NO of blood serum in rat with gastric ulcer(±s, n=10)

*注：和模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

Group Dose（mg/kg） NO（μmol/L）Control 0 0.056±0.011 Model 0 0.064±0.017 Stillen 100 0.110±0.039△△Low Dose 100 0.126±0.028△△High Dose 200 0.075±0.013

表3 柴胡复方水提物对胃溃疡模型大鼠血清SOD的影响

NO是一种血管活性物质。作为内源性血管舒张因子的NO在消化系统有广泛的调节作用。在溃疡的愈合过程中，NO可明显扩张胃黏膜血管，增加肉芽组织中微循环血流量，促进修复过程，是细胞保护中递质之一。研究表明，乙酸致胃溃疡模型血清NO明显降低[6]，本实验中阳性药物Stillen和柴胡复方提取物可增加血清NO含量，从而增加黏膜血流量，缓解了溃疡损伤。

氧自由基诱导细胞和组织损伤的机制是使生物膜中的不饱和脂肪酸过氧化，形成多种脂质过氧化物，破坏线粒体和溶酶体膜，造成细胞死亡，促进溃疡的发生。胃肠黏膜受化学物质作用或缺血等因素刺激后，可产生大量的氧自由基。氧自由基在整体水平和细胞水平都可以引起胃黏膜或黏膜细胞的脂质过氧化，引发胃黏膜损伤。机体内SOD活性与脂质过氧化反应产生的分解产物，不仅可以反映机体局部或整体的炎症反应情况，也可反映机体抗氧化反应的能力[7]。实验中，阳性药物Stillen和柴胡复方水提物高低剂量均可使溃疡模型大鼠的血清SOD明显增加，表明柴胡复方水提物对消炎痛胃溃疡大鼠有明显的抗氧化作用，进而抑制溃疡的发生和发展。同时低剂量组的柴胡复方水提物效果略次于高剂量组，但是不能说明剂量越高，治疗效果越好，这有待进一步的研究。

[1] Augusto A C, Miguel F, Mendonca S, et al. Oxidative stress expression status associated to Helicobacter pylori virulence in gastric diseases[J]. Clin Biochem, 2007, 40(9-10): 615-622.

[2] 刑德伦, 郑邦英. 中药复方治疗胃溃疡的实验研究进展[J].贵阳中医学院学报, 2009, 31(1): 69-72.

[3] 马海燕, 马玉奎. 柴胡皂苷治疗胃溃疡作用的研究[J]. 齐鲁药事, 2011, 30(6): 318-319.

[4] 樊拖迎, 周虎, 樊群. 加味黄芪建中汤对大鼠乙酸胃溃疡胃黏膜的保护作用[J]. 现代中西医结合杂志, 2011, 20(15): 1846-1847.

[5] 曲怡, 才丽平, 郑洪新, 等. 中药消痈溃得康对乙酸胃溃疡模型大鼠PGE_2及EGF含量的影响[J]. 中华中医药杂志, 2011, 26(10): 2255-2257.

[6] 冯云霞, 时昭红, 张介眉, 等. 促愈颗粒对乙酸胃溃疡大鼠血清一氧化氮、胃泌素和血浆神经降压素的影响[J]. 中国实验方剂学杂志, 2011, 17(17): 181-184.

[7] Amagase H, Murakami T, Misaki M, et al. Possible mechanism of gastric mucosal protection by epidermal growth factor in rats[J]. Life Sci, 1990, 47(14): 1203-1211.

Effects of radix bupleuri compound water extraction on treatment in rats with subacute gastric ulcer

DENG Jingfang1, FANG Lei2, BA Enping1, ZHAO Yun3, JIN Yongsan3★
(1.Department of Pathology, Chinese PLA General Hospital 301 Hospital, Beijing 100853, China; 2.Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Science, Beijing 100193, China; 3.Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China)

Objective To study effects of radix bupleuri compound water extraction on prevention in rats with subacute gastric ulcer. Methods The model of subacute gastric ulcer was established by acetic acid to observe effects of radix bupleuri compound water extraction on therapeutical effect in rats with subacute gastric ulcer. The ulcer areas and healing ratio of ulcer were measured. The slices of gastric tissues were observed after HE staining. Nitric oxide (NO) and superoxide dismutase (SOD) in serum were measured by nitric oxide reductase assay and xanthine oxidase assay. Results In Stillen group (100 mg/kg), low dose of radix bupleuri compound water extraction group (100 mg/kg) and high dose group (200 mg/kg), the ulcer areas were decreased compared with those in model group (P＜0.01). The ulcer inhibition ratios were 93.5%、40% and 92.9%, and the activities of SOD in serum were increased in drug-administrated groups (P＜0.01). The content of NO of serum in radix bupleuri compound water extraction groups were increased compared with those in model group (P＜0.05). In model group, deciduous and necrotic gastric mucosas with in fl ammatory cells in fi ltration were observed. Morphological changes were improved in drugs-administrated groups. Conclusion Radix bupleuri compound water extraction can be a therapeutical effect on the rats with subacute gastric ulcer.

Subcute gastric ulcer model; Nitric oxide (NO); Superoxide dismutase (SOD)

1.中国人民解放军总医院301医院病理科，北京 100853 2.中国医学科学院药用植物研究所，北京 100193 3.北京中医药大学基础医学院，北京 100029

★通讯作者：金永三，E-mail:honglei@lenet.com.cn