李 爽，顾 敏，刘卓刚，郝良纯，王 弘

慢性粒细胞白血病(Chronic myelocytic leukemia，CML)属于骨髓增生疾病，是一种由多能干细胞病变所致、以粒细胞系统无限制增生为特征的白血病［1］。病程发展较慢，患者中数生存期40个月左右。树突细胞(Dendritic cell，DC)是一种重要的抗原呈递细胞(Antigen presenting cell，APC)，是体内最强的肿瘤免疫载体。DC通过巨胞饮、受体介导的内吞方式及吞噬3种方式摄取抗原与主要组织相容性复合物-Ⅱ(Major histocompability complex，MHC)、MHC-Ⅰ类分子结合形成 MHC-Ⅱ、MHC-Ⅰ抗原肽复合物激活CD4+、CD8+T细胞，产生细胞毒性T细胞作用(Cytotoxic t lymphocyte，CTL)，具有显著的抗肿瘤作用［2］。本实验通过检测干扰素 α(Interferon-α，IFN-α)、伊马替尼(Imatinib)、羟基脲(Hydroxycarbamide，HU)3 种药物治疗后慢性粒细胞白血病患者体内树突细胞(Dendritic cells，DC)的含量变化，观察3种药物的抗肿瘤作用，为临床治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2008年1月至2012年1月，我院血液科收治的经骨穿及融合基因确诊的慢性粒细胞白血病患者，均无髓外肿瘤浸润，随机分为3组，选择不同方法规律治疗(无间断用药，外周血白细胞维持在正常范围内)3～12个月的慢性期患者26例。其中单独应用羟基脲9例，年龄48～72岁，中位年龄62.3岁;应用IFN-α 8例，年龄45～74岁，中位年龄63.7岁;应用伊马替尼9例，年龄46～72岁，中位年龄62.8岁。正常人对照组9例，年龄43～75岁，中位年龄63.3岁。四组一般资料比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 实验方法 取流式试管，加入Lin1 20 μL及Anti-HLA-DR 10 μL。采患者抗凝外周血 2～3 mL，摇匀，取其中200 μL血加入流式试管中，不要碰到管壁，轻轻混匀，室温避光保存15 min。取出试管，每管加入10倍稀释的FACS Lysing Solution 2 mL，轻轻混匀，避光10 min。待管内液体透亮。然后1 300 r/min离心5 min，弃去上清液。每管加入2 mL PBS，轻轻混匀，1 300 r/min离心5 min，弃去上清液。然后加入0.5 mL PBS混匀，置暗处保存，1 h内上机检测。检测在CellQuest软件，圈定门，以对照管确定阴性范围，FSC v SSC界定出外周血中单个核细胞区，LIN1(包括 CD3、CD14、CD16、CD19、CD20、CD56)表达阴性和 HLADR表达阳性界定排除T、B、NK细胞，圈定外周血DC。然后检测试验管。分析细胞含量。

1.3 统计分析 采用SPSS 13.0软件进行统计学处理。计量资料以±s表示，两组间比较使用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

羟基脲组外周血DC含量与正常组比较，差异有统计学意义(P＜0.05);伊马替尼组、IFN-α组与正常人组比较，差异无统计学意义(P＞0.05);伊马替尼组、IFN-α组与羟基脲组比较，差异有统计学意义(P＜0.05);IFN-α组和伊马替尼组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

表1 不同治疗组外周血DC含量(%)

3 讨论

慢性粒细胞白血病(CML)是一种由多能干细胞病变所致、以粒细胞系统无限制增生为特征的恶性血液肿瘤。病程发展较慢，如果能长期维持在慢性期，可以很大程度上延缓患者的生存时间。而DC是一种重要的APC，是体内最强的肿瘤免疫载体，具有显著的抗肿瘤作用。患者应用不同治疗后，体内DC的含量可以代表体内肿瘤免疫、抗肿瘤的状态。

羟基脲是一种核苷二磷酸还原酶抑制剂，可阻止核苷酸还原为脱氧核苷酸，干扰嘌呤及嘧啶碱基生物合成，选择性地阻碍DNA合成，对RNA及蛋白质合成无阻断作用。作用于DNA合成期细胞，是一种周期特异性抗肿瘤药物。在CML患者中单纯服用羟基脲组外周血DC含量明显下降。说明在瘤负荷状态下，体内肿瘤抗原递呈及抗肿瘤作用的下降。

干扰素是天然的细胞因子，有抗病毒、免疫调节及诱导分化的作用。应用IFN-α治疗慢性粒细胞白血病可以使慢性期及生存时间均显著延长，有效地治疗CML，延长患者生存时间。但IFN-α治疗CML的机制尚不清楚。有研究认为，IFN-α在CML中的治疗反应与抗CML特异性T细胞的存在呈高度相关性，提示IFN-α引起的临床反应可能与促进CML自体白血病特异性效应T细胞的扩增有关，而DC作为效应最强的抗原递呈分子，在免疫调节中处于中心地位，能有效刺激T细胞的增殖［3］，提示 IFN-α可能通过 CML来源 DC(CML-DC)发挥作用，上调CML-DC共刺激分子及MHC-Ⅰ抗原分子的表达，从而促进T细胞免疫反应。以上研究都是基于体外IFN-α对DC的培养或是体外培养出的DC加入IFN-α再刺激而得出的结论［4-5］。并不能说明IFN-α对体内DC的作用及临床注射IFN-α治疗CML的真正机制。本实验基于以上原理直接检测CML患者注射IFN-α后患者体内外周血DC的含量，结果表明，IFN-α治疗后体内DC含量也明显增加，说明IFN-α可以直接作用于体内DC，增强DC增殖，从而发挥IFN-α抗肿瘤、免疫调节的作用。同样，Sato［6］研究证实，伊马替尼作为特异性的酪氨酸激酶抑制剂，是目前有效的靶向治疗CML的药物［7］，除了对表达Bcr/Abl细胞直接作用外，还上调Ph+CML外周血单核细胞来源的DC协同刺激因子的表达，可培养出典型 DC，且 HLA-DR、CD86、CD83表达水平较对照组显著增加，刺激同种T淋巴细胞增殖能力比对照组增强。本实验证实患者服用伊马替尼后体内外周血DC的含量明显增加，表明伊马替尼可以直接作用于体内DC，增强DC增殖从而发挥其抗肿瘤的作用。

综上所述，CML患者体内DC含量明显减少，抗肿瘤作用下降，而伊马替尼和IFN-α可促使体内DC增殖，从而达到抗肿瘤的作用。两者间促使DC增殖的作用无显著差异。

［1］ Schiffer CA.BCR-ABL tyrosine kinase inhibitors for chronic myelogenous leukemia［J］.N Engl J Med，2007，357(3):258-265.

［2］ 刘俊峰，何志旭，沈冬，等.树突细胞骨髓瘤疫苗的体外抗肿瘤活性［J］.实用儿科临床杂志，2008，3(23):176-178.

［3］ Molldrem JJ，LeePP，Wang C.Evidence that specific T lymphocytes may participate in the elimination of chronic myelogenous leukemia［J］.Nat Med ，2000，6:1018-1023.

［4］ Korthals M，Safaian N，Kronenwett R.Monocyte derived dendritic cells generated by IFN-alpha acquire mature dendritic and natural killer cell properties as shown by gene expression analysis［J］.Transl Med，2007，25(1):46.

［5］ 金洁，郑水儿，童向民.干扰素-α联合GM-CSF诱导慢性髓性白血病细胞向树突状细胞分化［J］.中国病理生理杂志，2006，22(3):481-485.

［6］ Sato N，Narita M，Takahashi M.The effects of ST1571 on antigen presetation of dendritic cells generated from patients with chronic myeloid leukemia［J］.Hematol Oncol，2003，21:67-75.

［7］ Bumbea H，Vladareanu AM，Voican I，et al Chronic myeloid leukemia theray in the era of tyrosine kinase inhibitors-the first molecular targeted treatment［J］.J Med Life，2010，3(2):162-166.