曹晓燕，王政军，王喆之

（陕西师范大学药用资源与天然药物化学教育部重点实验室西北濒危药材资源开发国家工程实验室，陕西 西安 710062）

秦艽是传统的常用中药材，始载于《神农本草经》，其主要原植物为龙胆属（Gentiana L.）种类秦艽（Gentiana macrophylla Pall.）、麻花秦艽（G.straminea Maxim.）、粗茎秦艽（G.crassicaulis Duthie ex Burk.）或小秦艽（G.dahurica Fisch.），主要药用部位为干燥根。秦艽具有祛风湿、清湿热、止痹痛和退虚热的功效，可治疗风湿痹痛、中风半身不遂、筋脉拘挛、骨节酸痛、湿热黄疸、骨蒸潮热及小儿疳积发热等［1］。秦艽根中含有以龙胆苦苷为主的多种环烯醚萜苷类化合物，是秦艽的主要药用有效成分。其中，龙胆苦苷具有保肝、抑菌、抗炎和抗病毒等多方面作用［2］；马钱苷酸具有一定的抗炎作用［3］；獐牙菜苦苷具有提高皮肤机能、促进毛发生长、抑制中枢神经、镇痛抗炎等作用［4］；獐牙菜苷则具有抗肝细胞损伤的作用［5］。

随着秦艽的深入研究与开发，其需求量日益增加，但野生资源已遭到严重破坏，早在1987年就被列为国家重点保护野生药材物种［6］。由于秦艽的药用部位是根部，其地上部分往往弃之不用，造成大量资源的浪费，因此，对秦艽地上部分的药用成分和药用价值的研究对于秦艽资源的充分利用具有重要意义。迄今为止，关于秦艽地上部分活性成分的研究报道相对较少［7］，尤其是对秦艽不同器官中环烯醚萜苷含量的比较研究尚未见报道。

作者在前期研究的基础上［8-9］，采用HPLC法对秦艽、麻花秦艽、粗茎秦艽和小秦艽的根、茎、叶及花中4种环烯醚萜苷（马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷）含量进行了测定和比较分析，以期为秦艽资源特别是地上部分的深度开发利用提供基础研究资料。

1 材料和方法

1.1 材料

供试的秦艽、麻花秦艽、粗茎秦艽和小秦艽的采集地及生长类型见表1。原植物经陕西师范大学植物学教研室鉴定。在每一产地随机采集植物的全株，分成根、茎、叶和花4个部分，自然阴干、粉碎后过80目筛，备用。

表1 供试4种秦艽属植物的基本信息Table1 Basic information of four species of Gentiana L.tested

仪器和试剂：日本岛津SHIMADZU LC-2010高效液相色谱仪（包括自动进样器、紫外检测器和LC solution色谱工作站等）、MILLI-QS超纯水仪（美国MILLIPORE公司）、RE-52AA旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）和KQ5200型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；甲醇为色谱纯级，磷酸为分析纯级（天津市化学试剂三厂），超纯水；龙胆苦苷（批号110770-200611）和獐牙菜苦苷（批号0785-200203）对照品均购自中国药品生物制品检定所，马钱苷酸（批号020230S）和獐牙菜苷（批号C16H2209）对照品均购自北京中西化玻有限公司，纯度均大于99.5％。

1.2 方法

1.2.1 对照品溶液制备及标准曲线绘制 分别精密称取龙胆苦苷、马钱苷酸、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷对照品适量，用甲醇分别配成质量浓度1.0、0.3、0.3和0.1 mg·mL-1的对照品溶液，经0.22μm滤膜过滤，滤液用于HPLC分析。

参照文献［9］的色谱条件进行HPLC分析。分别精密吸取马钱苷酸对照品溶液0.5、2.0、4.0、8.0、16.0和32.0μL，獐牙菜苦苷对照品溶液0.5、1.0、3.0、9.0和27.0μL，龙胆苦苷对照品溶液0.5、2.0、8.0、16.0、32.0和64.0μL，獐牙菜苷对照品溶液0.1、0.5、2.0、8.0、32.0和64.0μL，依次进样分析。

以峰面积为纵坐标y、进样量为横坐标x绘制标准曲线。马钱苷酸对照品的线性回归方程为y=1.468×106x+5.526×104（r=0.9993），线性范围为0.15～9.60μg；獐牙菜苦苷对照品的线性回归方程为y=5.343×105x+3.851×103（r=0.9999），线性范围为0.15～8.10μg；龙胆苦苷对照品的线性回归方程为y=1.231×106x+1.786×105（r=0.9997），线性范围为0.50～64.00μg；獐牙菜苷对照品的线性回归方程为y=1.794×106x-3.698×104（r=0.9996），线性范围为0.01～6.40μg。

1.2.2 供试样品溶液制备及HPLC分析 参照文献［9］的方法和条件制备供试样品溶液并进行HPLC分析，进样量为2μL。依据各对照品的标准曲线，采用外标法计算样品中马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷的含量。

1.2.3 方法学考察

1.2.3.1 精密度实验 取龙胆苦苷对照品溶液，按上述色谱条件进行HPLC分析，连续进样5次。峰面积的RSD值为0.8％，表明仪器的精密度良好。

1.2.3.2 稳定性实验 取粗茎秦艽根部样品粉末，按上述方法制备供试样液；分别于0、4、8、16、24和48 h吸取供试样液2μL，按上述色谱条件进行HPLC分析。样液中马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷峰面积的RSD值分别为1.3％、0.9％、1.7％和2.2％，表明样品溶液在48 h内稳定。

1.2.3.3 重复性实验 取粗茎秦艽根部样品粉末5份，按上述方法制备供试样品溶液，并按上述色谱条件进行HPLC分析，进样量2μL。样品溶液中马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷含量的平均值分别为质量分数0.84％、0.76％、10.03％和0.04％，RSD值分别为1.1％、2.9％、2.1％和1.8％，表明该方法重复性好。

1.2.3.4 加样回收率测定 精密称取各成分含量已知的粗茎秦艽根部样品粉末5份，每份0.25 g，分别准确加入龙胆苦苷对照品25 mg、马钱苷酸对照品溶液3 mL、獐牙菜苦苷对照品溶液3 mL和獐牙菜苷对照品溶液0.5 mL，按照上述方法制备供试样品溶液；吸取供试样品溶液2μL，按上述色谱条件进行HPLC分析，计算加样回收率。供试样品溶液中马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷的加样回收率分别为98.7％、99.1％、102.0％和97.5％，RSD值分别为1.0％、1.9％、2.2％和2.1％。

2 结果和分析

2.1 不同植物种类间4种成分含量的差异分析

供试的4种秦艽属种类不同器官中4种环烯醚萜苷成分含量的测定结果见表2。

2.1.1 龙胆苦苷和马钱苷酸总量的差异 由表2可见：供试4种秦艽属植物不同器官中龙胆苦苷和马钱苷酸总量差异较大，其中，根中的质量分数为5.996％～10.869％，茎中为0.310％～4.065％，叶中为0.235％～4.138％，花中为0.545％～5.591％。小秦艽各器官中龙胆苦苷和马钱苷酸总量均最低，粗茎秦艽各器官中龙胆苦苷和马钱苷酸总量均最高。

在实际应用过程中，要求中药材秦艽中龙胆苦苷和马钱苷酸的总量不得少于质量分数2.5％［1］，以此为标准对表2的结果进行分析，可见：供试的4种秦艽属植物的药用部位（即根部）中龙胆苦苷和马钱苷酸总量均大于质量分数2.5％，其中，秦艽和粗茎秦艽根中龙胆苦苷和马钱苷酸总量均明显高于小秦艽和麻花秦艽。值得注意的是：秦艽和粗茎秦艽的茎、叶和花3个地上部位中龙胆苦苷和马钱苷酸总量也均高于质量分数2.5％，其中，粗茎秦艽花中龙胆苦苷和马钱苷酸总量达质量分数5.591％，甚至与小秦艽根中龙胆苦苷和马钱苷酸总量相近；在麻花秦艽和小秦艽茎、叶和花中，除了麻花秦艽花中龙胆苦苷和马钱苷酸总量（质量分数4.741％）高于质量分数2.5％这一标准外，其他部位龙胆苦苷和马钱苷酸总量都很低，质量分数仅为0.235％～1.321％。

表2 4种秦艽属植物不同器官中4种环烯醚萜苷成分的含量1）Table2 Contents of four iridoid glucosides in different organs of four species of Gentiana L.1）

2.1.2 獐牙菜苦苷和獐牙菜苷含量的差异 由表2可见：4种秦艽属植物不同器官中獐牙菜苦苷和獐牙菜苷含量也有一定差异，根中的质量分数分别为0.516％～0.953％和0.042％～0.210％，茎中分别为0.173％～0.383％和0.031％～1.700％，叶中分别为0.068％～0.684％和0.020％～3.208％，花中分别为0.460％～0.832％和0.138％～3.827％；其中，獐牙菜苷含量的差异幅度明显大于獐牙菜苦苷。值得注意的是：小秦艽的茎、叶和花中獐牙菜苷含量均最高，而秦艽的茎和叶及粗茎秦艽的花中獐牙菜苷含量均最低，前者分别为后者的54.8、160.4和27.7倍。

2.2 同种植物不同器官间4种成分含量的差异分析

由表2还可知：在同种植物的不同器官中4种环烯醚萜苷的含量也有明显差异。4种秦艽属植物根部的龙胆苦苷含量均明显高于茎、叶和花，且在茎、叶和花3个地上部位的含量分布没有一致的规律性。4种秦艽属植物根部马钱苷酸的含量也高于茎、叶和花，其中，粗茎秦艽和麻花秦艽根中的马钱苷酸含量分别是其叶中的13.7和27.9倍，差异最大；而小秦艽根和花中马钱苷酸含量差异最小，前者仅为后者的1.2倍。獐牙菜苦苷在根和花中的积累较多，而獐牙菜苷在花中的含量均相对最高。值得注意的是：小秦艽茎、叶和花中獐牙菜苷的含量均明显高于其根部，分别为根部的11.4、21.5和25.7倍。

从4种环烯醚萜苷成分的含量来看：除了小秦艽的地上部位外，不同器官中含量最高的均为龙胆苦苷，且这4种环烯醚萜苷成分在4种植物根部的分布具有一定的规律，基本表现为：龙胆苦苷的含量最高（质量分数5.605％ ～10.033％）；马钱苷酸（质量分数0.391％～0.836％）或獐牙菜苦苷的含量（质量分数0.516％ ～0.953％）居中；獐牙菜苷的含量最低（质量分数0.042％～0.210％）。

2.3 同种植物不同产地间4种成分含量的差异分析

对来源于3个不同产地的秦艽及2个不同产地的小秦艽不同器官中4种环烯醚萜苷成分含量的分析结果见表3。由表3可见：来自3个不同产地的秦艽样品中，不同器官中4种环烯醚萜苷成分含量具有一定的差异；来源于甘肃马狭的秦艽根、茎和叶中龙胆苦苷的含量均高于产自陕西太白和甘肃西河乡的秦艽，而花中龙胆苦苷的含量则以陕西太白产秦艽最高；产自陕西太白的秦艽根、茎和花中的马钱苷酸含量最高，而叶中马钱苷酸含量则以甘肃西河乡产秦艽最高；产自陕西太白的秦艽花中獐牙菜苦苷和獐牙菜苷含量均高于来源于另2个产地的秦艽。但4种环烯醚萜苷成分含量在不同产地秦艽根、茎、叶、花中的分布规律具有较高一致性，即龙胆苦苷含量最高、獐牙菜苷含量最低。

由表3还可见：来自青海互助和陕西麟游的2个小秦艽样品不同器官中4种环烯醚萜苷成分含量也有明显差异。陕西麟游产小秦艽不同器官中龙胆苦苷和獐牙菜苦苷的含量均略高于青海互助产小秦艽对应器官；马钱苷酸含量在不同产地小秦艽根、茎和叶中差异不大，但在花中差异非常大，其中产自青海互助的小秦艽花中马钱苷酸含量是来源于陕西麟游小秦艽花的6.4倍；而产自青海互助的小秦艽茎、叶和花3个地上部位中獐牙菜苷的含量不但明显高于产自陕西麟游的小秦艽，在供试的4种秦艽属植物的7个样品中也最高，其茎、叶和花中獐牙菜苷的质量分数分别高达2.884％、5.215％和7.321％。

表3 不同产地秦艽和小秦艽不同器官中4种环烯醚萜苷成分的含量1）Table3 Contents of four iridoid glucosides in different organs of Gentiana macrophylla Pall.and G.dahurica Fisch.from different locations1）

3 讨论和结论

由文献［8-10］可见：马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷在秦艽根中均有分布，其中龙胆苦苷的含量最高，獐牙菜苷的含量最低。本实验也得到了基本一致的研究结果，说明供试的4种秦艽属植物根部环烯醚萜苷成分的次生代谢过程具有相似性。秦艽和粗茎秦艽根中龙胆苦苷和马钱苷酸总量高于小秦艽和麻花秦艽，这一结果与李建民等［11］和汪荣斌等［12］的相关研究结果也基本一致。

李建民等［11］对粗茎秦艽、麻花秦艽、小秦艽不同器官龙胆苦苷含量的测定结果显示：这3种植物地上部分龙胆苦苷含量均较高，质量分数最低为3.90％；而本实验测定的小秦艽地上部分龙胆苦苷含量均较低，质量分数为0.157％～0.219％（表3），测定结果差异较大，推测可能与供试样品的产地不同有关。张兴旺等［13］对麻花秦艽不同器官獐牙菜苦苷含量的测定结果表明：麻花秦艽根、茎、叶和花中獐牙菜苦苷的质量分数分别为0.43％、0.15％、0.51％和0.38％；本实验所测的麻花秦艽根、茎、叶和花中獐牙菜苦苷的质量分数分别为0.711％、0.173％、0.068％和0.618％，测定结果有一定的差异，尤其是叶中獐牙菜苦苷的含量差异很大。推测造成这种差异的原因除了与供试样品的产地不同有关外，可能还与不同的采收时间有关。张兴旺等［13］使用的样品采收时间为具有果实的开花晚期，而本研究使用的样品均采自没有果实的开花中期。但是，本研究测得的麻花秦艽花中獐牙菜苷的质量分数为0.387％，与张兴旺等［14］对青海10个不同产地麻花秦艽花中獐牙菜苷含量的测定结果（质量分数0.346％～0.453％）基本一致。

现有的研究资料显示：在麻花秦艽花中龙胆苦苷含量差异很大。李建民等［11］曾报道采自青海的野生麻花秦艽花中龙胆苦苷的质量分数为4.88％；张华等［15］测得来自青海7个产区麻花秦艽花中龙胆苦苷的质量分数为0.25％ ～0.82％；胡一晨等［16］测得四川、青海、西藏等不同产地7批麻花秦艽花中龙胆苦苷的质量分数为1.50％～5.84％；而本实验测得青海湟源产麻花秦艽花中龙胆苦苷的含量为质量分数4.318％，说明产地对植物次生代谢成分的积累有很大影响。

在小秦艽地上部分（茎、叶和花）中，獐牙菜苷的平均含量不但高于其根部，也高于其他3种植物，差异极大，特别是产自青海互助的小秦艽地上部分的獐牙菜苷含量最高，分别是其根部的22.9、41.4和58.1倍。獐牙菜苷是龙胆科（Gentianaceae）植物的苦味成分及活性成分之一，具有退热和抗惊厥的作用［14］，因此，若以獐牙菜苷为目的成分，小秦艽地上部分值得进一步开发利用。由此也可见：供试的秦艽、粗茎秦艽、麻花秦艽和小秦艽不用器官中4种环烯醚萜苷成分含量各有不同，因而，从不同的药用活性成分角度出发，可对这些植物的不同部位进行深度开发。

致谢：云南丽江玉龙县新主村的杨杰武师傅和青海大学医学院的李永平老师在样品收集方面给予较大帮助，谨此致谢!

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