李居安，王 丽（宁夏固原市药品检验所，宁夏固原 756000）

RP-HPLC法同时测定酚酞含片中酚酞及杂质荧光母素的含量

李居安＊，王 丽（宁夏固原市药品检验所，宁夏固原 756000）

目的：建立同时测定酚酞含片中酚酞及杂质荧光母素含量的方法。方法：采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Phenomenex-C18，流动相为甲醇-水（80∶20），流速为1.0mL·min－1，检测波长为285nm，进样量为20µL。结果：酚酞与荧光母素色谱峰可有效分离，酚酞、荧光母素检测浓度的线性范围分别为4～100（r＝0.9999）、0.21～5.30（r＝0.9999）µg·mL－1，平均回收率分别为100.27%、99.89%，RSD分别为0.45%、1.04%；3批样品中杂质含量＜0.11%。结论：本方法专属性强，操作简便，结果准确可靠，可用于该制剂的质量控制。

反相高效液相色谱法；酚酞含片；荧光母素；含量测定

酚酞为刺激性泻药，主要用于治疗慢性便秘。酚酞含片是化学药品地标升国标第14册[1]收载的品种，含量测定方法为滴定法，该法操作烦琐，容易引起误差。另由于在酚酞合成过程中伴有荧光母素生成，各国药典都规定了酚酞中荧光母素的限量检查。《中国药典》（2010年版二部）采用薄层色谱法检查[2]，酚酞原料药中其检测限量为0.10%；酚酞片中其检测限量为0.5%，但该法容易造成判断误差；酚酞含片标准项下尚无荧光母素限量检查。为控制该制剂质量，笔者采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法对酚酞含片中酚酞及荧光母素含量进行测定，结果表明，该法专属性强，操作简便，结果准确可靠，可用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器

1200系列HPLC仪、G1314BVMD紫外检测器（美国Agilent公司）；AG-135双量程电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

1.2 试药

酚酞对照品（批号：100091-199601，纯度：100%）、荧光母素对照品（批号：100075-197902，纯度：100%）均来源于中国食品药品检定研究院；酚酞含片（宁夏启元国药有限公司，批号：090615、20090612、110328，规格：每片0.1g）；甲醇为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Phenomenex-C18（250mm×4.6mm，5µm）；流动相：甲醇-水（80∶20），流速：1.0mL·min－1；检测波长：285nm；进样量：20µL；柱温：30℃。在该色谱条件下，取“2.2.1”项下样品溶液和“2.2.3”项下对照品溶液分别进样，理论板数按酚酞计不低于5000。结果，酚酞保留时间为3.130min，荧光母素保留时间为6.186min，色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.对照品；B.样品；1.酚酞；2.荧光母素Fig1 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test sample；1.phenolphthalein；2.fluoran

2.2 溶液制备

2.2.1 样品溶液的制备。取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于酚酞10mg）置于100mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为样品溶液。

2.2.2 荧光母素对照溶液制备。精密称取荧光母素对照品10mg置于100mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为对照溶液。

2.2.3 对照品溶液制备。精密称取酚酞对照品10mg置于100mL量瓶中，加流动相溶解，再精密量取“2.2.2”项下对照溶液5mL，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

2.3 线性关系考察

精密量取“2.2.3”项下对照品溶液2、5、10、25、50mL分别置于50mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。进样分析，以峰面积（A）为纵坐标，浓度（c）为横坐标进行线性回归，得酚酞、荧光母素回归方程分别为A＝12752.36c+36.24（r＝0.9999）、A＝20272.88c+7.18（r＝0.9999）。结果，酚酞、荧光母素检测浓度线性范围分别为4～100、0.21～5.30µg·mL－1。

2.4 精密度试验

取“2.2.3”项下对照品溶液，连续进样5次，记录峰面积。结果，酚酞、荧光母素的RSD分别为0.8%、1.0%。

2.5 稳定性试验

取同一样品溶液，于0、3、6、12、24h分别进样，依法测定。结果，酚酞、荧光母素的RSD分别为0.51%、0.66%。

2.6 回收率试验

精密量取10mL已知酚酞含量的样品溶液9份，分别精密加入对照品溶液8、10、12mL（相当于样品中已知酚酞含量的80%、100%、120%）各3份，测定含量，计算低、中、高浓度酚酞回收率。另精密量取10mL已知荧光母素含量的样品溶液9份，分别精密加入对照品溶液0.16、0.20、0.25mL（相当于样品中已知荧光母素含量的80%、100%、120%）各3份，测定含量，计算低、中、高浓度荧光母素回收率。回收率结果见表1。

表1 回收率试验结果（n＝9）Tab 1Results of recovery tests（n＝9）

2.7 样品中酚酞、荧光母素含量测定

取样品和对照品溶液依法测定，按外标法计算酚酞、荧光母素含量，并与化学药品地标升国标第14册滴定法[1]比较，结果2种方法测定的酚酞含量结果无明显差异，详见表2。

表2 样品中酚酞、荧光母素含量测定结果（n＝5）Tab 2Content determination of phenolphthalein and fluoran in samples（n＝5）

3 讨论

（1）波长的选择。对荧光母素和酚酞对照品溶液进行紫外扫描，发现二者最大吸收波长分别为285、275nm，由于荧光母素浓度为5µg·mL－1，与酚酞（100µg·mL－1）浓度相差20倍，故本方法检测波长选用荧光母素的最大吸收波长，即285nm。

（2）流动相的选择。笔者曾试验用甲醇-0.02mol·L－1磷酸溶液（80∶20）[3]作为流动相，结果与本文采用的流动相比较分离效果相差不大，但由于该流动相制备相对烦琐，因此选择甲醇-水（80∶20）作为流动相。

[1]WS-10001-（HD）-1324-2003，酚酞含片标准（第14册）[S].2003：14-72.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：882.

[3] 梁选革，武国怡.高效液相色谱法测定酚酞溶液与酚酞片中荧光母素含量[J].医药导报，2006，25（11）：1210.

Simultaneous Determination of Phenolphthalein and Fluoran in Phenolphthalein Buccal Tablets by RP-HPLC

LI Ju-an，WANG Li（Ningxia Guyuan Institute for Drug Control，Ningxia Guyuan 756000，China）

OBJECTIVE：To establish a method for simultaneous determination of phenolphthalein and fluoran in Phenolphthalein buccal tablets.METHODS：RP-HPLC method was adopted.The determination was performed on Phenomenex-C18column with mobile phase consisted of methanol-water（80∶20）at the flow rate of 1.0mL·min－1.The detection wavelength was set at 285nm and injection volume was 20µL.RESULTS：Phenolphthalein and fluoran could be separated completely.The linear range was 4～100µg·mL－1for phenolphthalein（r＝0.9999）with average recovery of 100.27%（RSD＝0.45%）and 0.21～5.30µg·mL－1for fluoran（r＝0.9999）with average recovery of 99.89%（RSD＝1.04%）.The content of impurity in 3batches was lower than 0.11%.CONCLUSION：The method is specific，simple，accurate and reliable for quality control of Phenolphthalein buccal tablets.KEY WORDS RP-HPLC；Phenolphthalein buccal tablets；Fluoran；Content determination

R927.2

A

1001-0408（2012）33-3148-02

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2012.33.31

2011-09-03

2011-11-07）