刘联斌，薛 灵，周茂华，郭 萍，黄 刚，王小丽，吴 伟

(赣州市肿瘤医院 1、检验科 2、放疗科，江西 赣州 341000)

恶性肿瘤患者免疫功能是削弱的，T 淋巴细胞亚群是一项评价人体细胞免疫功能的重要指标，放疗可加剧由癌症诱发的低免疫功能，而细胞免疫功能与患者的预后密切相关[1-3]。放疗是鼻咽癌的主要治疗手段，放疗通过射线杀灭肿瘤细胞使患者得到康复，但又有可能抑制机体的免疫功能，造成不能完全被消灭的肿瘤细胞重新生长，导致肿瘤的复发和/或转移。本文通过流式细胞仪检测鼻咽癌患者放疗前后T 淋巴细胞亚群，以了解放疗对鼻咽癌患者免疫功能状况的影响。

1 材料与方法

1.1 临床资料 2010年6月至2011年12月来本院就诊的134例初治鼻咽癌患者，均经病理确诊为鼻咽低分化鳞癌，其中男98例，女36例。年龄24～67岁，中位年龄48岁。放疗前及放疗结束后即刻收集外周血标本，做T细胞亚群分析，外周血T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+采用流式细胞术检测。

1.2 仪器和试剂 美国BD 公司FACSCalibur 流式细胞仪，用标准荧光微球校正光电倍增管(PMT)电压,建立荧光补偿,检查仪器灵敏度,使流式细胞仪处于最佳工作状态；美国BD 公司配套四色试剂MultiTESTTMIMK Kit，货号：340503。

1.3 样本制备与检测

1.3.1 所有样品按照要求采集外周静脉血2 ml,EDTA-K2抗凝,均在采样48 h 内完成检测。

1.3.2 在检测管中准确加入20μl MultiTEST 四色试剂和50μl全血,充分混匀后置室温阴暗处15min。加入450μl FACS 溶血剂(1x),充分混匀后室温阴暗处15 min。

1.3.3 标本制备后立即上机运行MultiTEST 程序检测。

1.3.4 每次检测均使用质控品同时检测,质控品的检测值均在其靶值±2s 范围内各样品检测值有效。

1.4 放射治疗 采用西门子直线加速器6MV的X线。采用体位不变的等中心照射，热塑型面罩固定，低熔铅个人专挡，屏蔽非照射区域。常规分割连续放疗，每次2Gy，1次/d，每周5次；鼻咽靶区根治剂量为65～75Gy，颈淋巴结转移灶根治剂量为60～70Gy，颈淋巴结预防性照射剂量为45～50Gy。

1.5 统计分析 采用SPSS12.0软件包处理有关数据，采用单样本t 检验和配对t 检验，P≤0.05 有统计学意义。

2 结果

鼻咽癌患者放疗前后外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比较有明显变化，134例患者放疗后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的均值比放疗前明显降低(P＜0.01)，CD8+明显升高。经统计学分析各组差异显著，见下表。

3 讨论

表1 放疗前后T细胞亚群分析()

T细胞亚群在肿瘤免疫中起重要作用，T细胞各亚群间数量比例适当，才能发挥正常的抗肿瘤作用。T细胞亚群包括总T细胞数(CD3+)、辅助T细胞数(CD4+)、抑制T细胞数(CD8+)以及后两者的比值(CD4+/CD8+)，此四项指标中，CD3+的检测意义已逐渐减小，CD4+和CD8+的结果相互影响，功能相互牵制，单独分析有一定的局限性，而CD4+/ CD8+的值在判断结果时相对稳定，检测更具有实用价值。

CD4+/CD8+比值低于正常时被认为是免疫调节功能紊乱，易发生恶性肿瘤。CD4+T细胞可识别肿瘤细胞分泌的可溶性抗原，参与B细胞、巨噬细胞、NK细胞的激活，进而起到抗肿瘤作用；CD4+T淋巴细胞还可释放IL-2、IFN-γ、IL-4等细胞因子以激活NK细胞、促进B细胞活化和抗体形成以达到抗肿瘤效应。而CD8+T 淋巴细胞是抑制性T细胞，其功能主要是抑制免疫应答。机体维持正常的免疫功能状态，有赖于各种免疫细胞之间的相互制约，以产生适度的免疫应答，CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平在肿瘤患者中常常出现异常[4,5]。

许多外周血T细胞亚群检测的研究结果表明，多种恶性肿瘤患者有T 淋巴细胞亚群状态异常和比例失调，肿瘤患者外周血CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+比值均低于正常人，而CD8+则明显高于正常人。不同肿瘤组之间各项指标无显著性差异，说明肿瘤患者免疫功能较正常人明显低下，细胞免疫受到抑制，降低了清除肿瘤细胞的能力，其机制可能与肿瘤在发生、发展过程中分泌大量的免疫抑制因子有关[6,7]。

放疗后由于T细胞亚群数量及比例均有改变，对患者产生强大而持久的抑制作用，降低其免疫功能。本研究结果示，134例患者放疗后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的均值比放疗前明显降低 (P＜0.01)，CD8+明显升高。统计学检测有极显著性差异，表明放疗在使鼻咽癌病灶消退的同时也损伤机体的免疫功能，致使CD4+/CD8+比例降低或者倒置、细胞免疫功能抑制，减弱宿主免疫细胞抗肿瘤的能力。随着时间的推移，机体的免疫功能是否仍处于抑制状态、放疗后T细胞亚群变化目前仍在随访中，以观察其与生存率的关系，从而得到鼻咽癌预后的指标。

鼻咽癌患者免疫力低下，在放射治疗中，射线将使T细胞亚群发生变化，对细胞免疫功能和T细胞亚群产生影响，对淋巴细胞增殖功能有抑制作用；在放射治疗后T细胞亚群检测CD4+/CD8+的比值比在治疗前显著下降，因此外周血T细胞亚群检测对预测放射治疗效果、预后、转移等有重要价值。在放射治疗时给以免疫增强剂治疗将有助于提高疗效，尤其是中药在放射治疗中具有增敏和固护机体正气，保护机体免疫功能的作用，同时能刺激骨髓造血功能，保护和促进正常组织的修复，巩固疗效[8]。

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