姚 洁 陈健文

1.湖南省衡阳市中心医院药剂科，湖南 衡阳 421001;2.湖南省衡阳市食品药品检验检测中心，湖南 衡阳 421001

玉叶清火胶囊是由玉叶金花、穿心莲、栀子、墨旱莲、倒扣草等中草药组成的复方制剂，功能清热解毒，消肿止痛。用于喉痹，暴喑，急性咽喉炎属于风热症者。玉叶清火胶囊是玉叶清火片改剂型而来的制剂。穿心莲为本方中有效成分之一，而穿心莲主要成分为穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯。因此测定本品中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，可作为本品质量控制的指标之一。为了更好的控制该制剂的质量，保证药品使用安全、有效，本文参考有关文献［1－3］，采用反相高效色谱法测定了穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。

1 仪器与试药

仪器 大连依利特P200Ⅱ高压恒流泵，UV－200Ⅱ型紫外可变波长检测器;EC2000色谱数据处理站;HypersilODS2柱 (C18，4.6×200mm，5μm);BP211D 电子分析天平;kh－250db型超声处理器。

试药 穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯对照品由中国药品生物制品检定所提供。甲醇为色谱纯，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。玉叶清火胶囊及缺玉叶金花的阴性对照样品。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:HypersilODS2柱 (C18，4.6×250mm，5μm)，流动相:甲醇 －水 (55∶45);流速:0.85ml·min－1，进样量为10μl，检测波长:250nm，柱温:常温。理论板数 (n)按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯计算，应不低于3000。在上述色谱条件下，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯能完全分离，对照品与阴性对照品溶液中没有峰重叠，色谱图见图1。

2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取穿心莲内酯对照品及脱水穿心莲内酯对照品适量，分别加甲醇制成每1ml含穿心莲内酯100ug及脱水穿心莲内酯45ug的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取本品20粒，倒出内容物，精密称定，研细，精密称取1.5g，精密加入甲醇50ml，称定重量，冷浸30分钟，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，以上述色谱条件测定，根据穿心莲内酯对照品及脱水穿心莲内酯峰面积，以外标法计算供试品中穿心莲内酯对照品及脱水穿心莲内酯含量。

2.5 线性关系考察 ①精密称取穿心莲内酯对照品13.49mg，置于10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。分别精密吸取以上对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.8，1.0ml分别置5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样测定。以峰面积积分值为横坐标，对照品浓度为纵坐标绘制标准曲线，则回归方程为:Y(mg·ml－1)=3.4450×10－4X+9.8835×10－5，r=0.9997;②精密称取脱水穿心莲内酯对照品11.21mg，置于50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。分别精密吸取以上对照品溶液0.5，1.0，2.0，4.0，5.0ml分别置5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样测定。以峰面积积分值为横坐标，对照品浓度为纵坐标绘制标准曲线，则回归方程为:Y(mg·ml－1)=6.4815 × 10－4X+9.3661 ×10－5，r=0.9997。结果表明:穿心莲内酯浓度在0.02698～0.2698mg·ml－1范围内，脱水穿心莲内酯浓度在0.02242～0.2242 mg·ml－1范围内，进样浓度与峰面积呈良好线性关系。

2.6 精密度试验 分别精密吸取同一对照品溶液 (穿心莲内酯 0.10792mg·ml－1，脱水穿心莲内酯 0.08968mg·ml－1)各10μl，连续测定5次，依次测定峰面积值，其中穿心莲内酯峰面积平均值为1126.57，RSD为0.56%;脱水穿心莲内酯峰面积平均值为976.16，RSD为0.70%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验 取供试品溶液 (批号20100416)，每隔4小时分别进样10μl，依法测定穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯峰面积值，其峰面积RSD分别为1.47%、1.41%，表明供试品溶液在20小时内保持稳定。

2.8 阴性对照试验 按处方量，取缺穿心莲的阴性样品，按供试品溶液制备项下的方法提取，测定。结果在穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯峰相应的保留时间无吸收峰，表明处方中其它成分对测定无干扰。

2.9 重复性试验 取同一批号供试品 (批号20100416)按供试品溶液项下的方法制备5份供试品溶液，依法测定，结果穿心莲内酯平均值0.968 mg/片，RSD%=1.48，脱水穿心莲内酯平均值1.986 mg/片，RSD%=1.05，表明重复性良好。

2.10 加样回收率试验 精密称取已知含量 (穿心莲内酯的含量为2.42 mg·g－1，脱水穿心莲内酯含量为4.99mg·g－1)的玉叶清火胶囊 (批号20100416，平均粒重0.3996g)约0.75g，分别精密加入一定量的穿心莲内酯 (穿心莲内酯22.64mg，加甲醇定容至50ml，精密加入5ml)及脱水穿心莲内酯 (脱水穿心莲内酯45.12mg，加甲醇定容至50ml，精密加入5ml)，照供试品溶液项下的方法制备，测定，计算回收率，结果穿心莲内酯平均回收率为101.440%，RSD=1.36%(n=5)，脱水穿心莲内酯平均回收率为103.94%，RSD=1.82%(n=5)，表明方法回收率较好。

2.11 样品中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液3批，按上述色谱条件测定，以外标法计算，结果见表1。

表1 玉叶清火胶囊中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量测定结果

3 讨论

在供试品溶液制备过程中，比较了浸渍过夜及超声提取方法，以甲醇和乙醇做不同溶剂进行考察，结果表明，以甲醇浸泡30分钟后超声处理30分钟的提取效率较高，故选择甲醇为提取溶剂。

［1］任睿，张园园.反相高效液相色谱法测定喉舒宁片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量［J］.中南药学，2011，9(4):271－273.

［2］邱宏聪，李茂，廖展苇.高效液相色谱法同时测定金鸡胶囊中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量［J］.中国医院药学杂志，2011，31(13):1142－1143.

［3］张火旺.高效液相色谱法同事测定止痢宁片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量［J］.中国药业，2011，20(21):30－31.