陈海飞，卞 俊，鲍蕾蕾，柳正良

CHEN Hɑi-fei，BIAN Jun，BAO Lei-lei，LIU Zheng-liɑng

(Depɑrtment of Phɑrmɑcy，No.411 Hospitɑl of CPLA，Shɑnghɑi 200434，Chinɑ)

绝经后女性的雌激素水平下降是导致骨质加速丢失、引发骨质疏松症的重要原因［1］。据此，学者们采用切除双侧卵巢的方法建立了大鼠骨质疏松症模型［2-3］，并在相关研究中广泛运用。本实验按照中医肾主骨的理论，以补肾方复方健骨胶囊为实验药物，通过观察卵巢切除诱导的骨质疏松症大鼠模型用药前后骨钙含量和骨密度，评价该药治疗骨质疏松的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 60只雌性SD大鼠，清洁级，体质量300 g左右，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，许可证号SCXK(沪)2003-0003。

1.2 药品 复方健骨胶囊，由骨碎补、淫羊藿、丹参、补骨脂、牛膝、山药组方，胶囊内容物为棕褐色颗粒，由本院制剂室自制。

1.3 仪器 原子吸收分光光度计(HG9620A型，沈阳光华精密仪器有限公司)、双能X线骨密度仪(LUNAR EXPERT#1170型，美国)、精密卡尺、动物解剖器械、电子天平(SL-1001型，精度0.1 g，上海民桥电子仪器厂)、电子天平(JA2003型，精度0.001 g，上海精科天平)、烘箱。

1.4 卵巢切除术［2-3］及术后筛查 摘除卵巢后5 d进行阴道涂片检查，1次/d，连续7 d，如涂片呈动情反应(镜下见大量半透明、扁平的表皮细胞)，表明卵巢切除不完全，应弃去不用。假手术组按同法进行手术，去除1小块脂肪代替卵巢。

1.5 动物分组及给药方法 大鼠术后经1周适应性喂养后分组，除假手术组外，卵巢摘除大鼠随机分组为模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性药对照组，本组10只。假手术组和模型组给予蒸馏水，低剂量组、中剂量组和高剂量组分别给予复方健骨胶囊内容物200、400、800 mg/kg，阳性药对照组给予碳酸钙100 mg/kg，1次/d，连续90 d。所有试验动物均食用配制的饲料，自由摄食饮水，单笼饲养，定期观察一般情况，每周测1次体质量。

1.6 骨钙含量测定 动物喂养90 d后处死，剥离出左右侧股骨，于烘箱中105℃烘烤至恒重，称量骨干重。左侧股骨用于测量骨长。右侧股骨置于100 ml洁净烧杯中，加入混合酸(硝酸∶高氯酸=4∶1)15 ml，盖上表面皿，在电热板上加热消化(冒白烟)，酸液不够时可以再加入少量混合酸。待消化液透明无色后加数毫升去离子水，煮沸以除尽剩余的酸，重复2次，最后消化液的体积不超过1 ml。消化样品时同时作空白对照，加入与样品消化时相同体积的混合酸，在相同条件下消化。按照原子吸收分光光度计操作说明书进行测定。测定液、标准溶液和空白对照均用氧化镧溶液稀释、定容。

1.7 股骨密度测量 左侧股骨用生理盐水浸泡的纱布包裹，冷藏保存，用双能X线骨密度仪测定股骨中点和股骨远心端骨密度。

2 结果

2.1 对体质量的影响 见表1。实验第30天、第60天和第90天，模型组体质量明显高于假手术组(P＜0.05)，各剂量组与模型组相比差异无统计学意义(P＞0.05)。表明200、400、800 mg/kg剂量复方健骨胶囊对模型动物体质量均无明显影响。

表1 给药前后各组大鼠体质量变化(±s，各组n=10，g)

表1 给药前后各组大鼠体质量变化(±s，各组n=10，g)

注:与同期模型组相比aP＜0.05

组别 第0天 第30天 第60天 第90天假手术组 306.5±11.7 337.7±12.0a352.8±12.0a363.8±12.4a模型组 306.2±10.9 368.9±11.4 391.9±13.4 408.7±13.9低剂量组 306.5±10.2 371.8±9.2 393.5±10.6 408.8±13.4中剂量组 306.4±10.1 365.4±11.0 387.3±12.9 401.0±12.5高剂量组 306.5±9.9 367.2±19.9 387.6±22.3 402.1±22.3阳性药对照组306.5±9.6 370.5±7.0 392.8±10.1 407.4±10.6

2.2 对骨钙含量的影响 见表2。模型组大鼠骨钙含量明显低于假手术组(P＜0.05)，说明骨质疏松症大鼠模型建立成功。复方健骨胶囊中、高剂量组和阳性药对照组骨钙含量明显高于模型组(P＜0.05)，表明400、800 mg/kg剂量复方健骨胶囊具有增加骨钙含量的作用。

表2 给药90 d后各组大鼠股骨重、骨长和骨钙含量(±s，各组n=10)

表2 给药90 d后各组大鼠股骨重、骨长和骨钙含量(±s，各组n=10)

注:与模型组相比aP＜0.05

组别 骨重(g) 骨长(cm) 骨钙含量(mg/g假手术组 0.407±0.013 3.51±0.02 270.3±17.2)a模型组 0.429±0.021 3.57±0.03 213.8±11.8低剂量组 0.422±0.024 3.54±0.03 218.0±14.4中剂量组 0.420±0.030 3.55±0.03 234.3±11.0a高剂量组 0.413±0.023 3.54±0.04 251.0±16.7a阳性药对照组 0.416±0.029 3.53±0.04 240.0±9.4a

2.3 对骨密度的影响 见表3。模型组骨密度明显低于假手术组(P＜0.05)，说明骨质疏松动物模型建立成功。复方健骨胶囊高剂量组骨密度明显高于模型组(P＜0.05)，表明800 mg/kg剂量复方健骨胶囊具有增加骨密度的作用。

表3 给药90 d后各组大鼠骨密度(±s，各组n=10)

注:与模型组相比aP＜0.05

组别 股骨中点骨密度(g/cm2)股骨远心端骨密度(g/cm2)假手术组 0.241±0.017a 0.268±0.013a模型组 0.199±0.017 0.221±0.007低剂量组 0.211±0.008 0.228±0.018中剂量组 0.213±0.013 0.234±0.018高剂量组 0.228±0.017a 0.254±0.011a阳性药对照组 0.218±0.012a 0.243±0.018a

3 讨论

中医学把骨质疏松症归属于骨痿、骨枯、骨痹的范畴，认为肾虚和脾虚是重要病机，血瘀是促进因素。复方健骨胶囊为中医验方，由骨碎补、淫羊藿、补骨脂、牛膝、山药、丹参等组成。该方以补肾强骨的骨碎补和补肾阳、强筋骨的淫羊藿为主药，辅以归肾、脾经、温肾助阳的补骨脂;归脾、肺、肾经、补脾养胃、生津益肺、补肾涩精的山药;以及归心、肝经，祛瘀止痛、活血通经的丹参，并佐以牛膝，共奏益补脾肾、强筋健骨、活血通络之效。

本研究通过测定模型大鼠骨钙含量和骨密度，评价复方健骨胶囊的抗骨质疏松作用。结果表明复方健骨胶囊能够提高骨钙含量，增加骨密度，有一定的抗骨质疏松作用，这为复方健骨胶囊治疗骨质疏松症提供了药理依据。

［1］Christiansen C，Lindsay R.Estrogens，bone loss and preservation［J］.Osteoporosis Int，1990，1(1):7-13.

［2］Devlin H，Ferguson MW.Compositional changes in rat femur following ovariectomy［J］.Acta Anatomica，1989，136(1):38-41.

［3］Tabuchi C，Simmons DJ，Fausto A，et al.Bone deficit in ovariectomized rats［J］.J Clin Invest，1986，78(9):637-642.

(本文编辑:施 莼)