刘弘涛，李凤金，刘锦泉，张玉昆，牛雯颖，肖洪彬

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

止咳平喘胶囊是临床经验方。主要含有麻黄、陈皮、贝母、苦杏仁、石膏、甘草、紫菀、桑叶、款冬花、元柏等。用于肺热感冒引起的咳嗽痰喘的治疗，具有清肺、祛痰、抗炎、抑菌的功效。本实验主要针对该药进行了止咳、平喘、祛痰、抗炎、抑菌等方面的药效学研究，为止咳平喘胶囊的临床应用提供药效学依据。

1 材料

1．1 药物

止咳平喘胶囊(由麻黄15g，陈皮15g，贝母15g，苦杏仁 10g，石膏 15g，甘草 15g，紫菀 15g，桑叶 15g，款冬花15g，黄柏15g组成。口服，每次4～8粒，每日3次。或遵医嘱。规格:每粒装0．3 g。由郑庆海中医内科诊所提供);橘红胶囊(四川美大康药业股份有限公司，国药准字Z20010005，每粒0．5g;口服，1 次5 粒，每日2次)。

1．2 试剂

碳酸氢钠(天津东丽区天大化学试剂厂，批号20080608);苯酚红(北京化工厂，批号:840920);氨水(哈尔滨市化工试剂厂，批号20081118);二甲苯(北京化工厂，批号20061123);氯化钠(天津市科密欧化学试剂有限公司，批号20080310);磷酸组胺(国药集团化学试剂有限公司，批号20090915);脂多糖(sigma化学试剂有限公司，批号20100368)。

1．3 实验动物

昆明种小白鼠，体质量18～22g，由黑龙江中医药大学实验动物中心繁殖提供，合格证为 SCXK(黑)2008004;健康豚鼠，体质量(190±20)g，由黑龙江中医药大学实验动物中心繁殖提供，合格证为SCXK(黑)2008004。

金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、乙型溶血性链球菌由黑龙江中医药大学实验中心微生物实验室提供。

1．4 主要仪器

722型可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司);分析天平(梅特勒－托利多仪器(上海)有限公司);HTC－150恒温恒湿培养箱(上海三腾仪器有限公司);YXQ－SG46－280手提式高压灭菌锅(上海比朗仪器有限公司);BSW－100型超声雾化器(深圳贝尔医疗器械有限公司)。

2 实验方法

2．1 镇咳作用

采用小鼠氨水引咳法［1］。昆明种小鼠50只，雌雄各半，按体重随机分成空白对照组、阳性对照组(橘红胶囊，0．65g/kg)、止咳平喘胶囊高剂量组(4．0g/kg)、止咳平喘胶囊中剂量组(2．0g/kg)、止咳平喘胶囊低剂量组(1．0g/kg)，每组10只。将药物制成混悬液，连续口服给药7天，末次给药2h后，把小鼠放入悬挂吸有0．5ml浓氨水滤纸片的玻璃罩内引咳30s，迅速取出，放入烧杯内，观察小鼠出现腹肌收缩、缩胸、张大嘴(咳声有无均可)作为咳嗽标准，记录5min中的咳嗽次数和咳嗽潜伏时间(S)。

2．2 祛痰作用

采用小鼠酚红祛痰法［2］。昆明种小鼠50只，雌雄各半，实验分组、给药剂量同上。禁食不禁水8～12h，给药2h 后，腹腔注射 0．5% 酚红溶液 0．5ml，0．5h 后脱颈椎处死小鼠，背位固定，分离气管，于喉头下将磨平头的7号针头插入气管内约0．3cm，用丝线结扎固定，用1ml注射器吸取0．5ml 5%碳酸氢钠溶液，通过针头来回灌洗呼吸道3次(每次不作停留)，将灌洗液注入试管内，重新吸取碳酸氢钠0．5ml，如上再灌洗3次，3次共用洗液1．5ml，抽洗9次，将3次的洗液合并置比色管中，用分光光度计测定吸光度A546。

2．3 抗炎作用

采用小鼠耳肿胀法［1］。昆明种小鼠50只，雌雄各半，实验分组、给药剂量同上。口服给药1h后，每只小鼠右耳廓两面均匀涂抹0．02ml二甲苯致炎。4h后脱颈处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，用9mm的打孔器分别在同一部位打下耳片，用分析天平称取质量，每只鼠的右耳片重量减去左耳片重量即为肿胀度，并计算肿胀率。

2．4 解热作用

采用内毒素致热法［2］。取大鼠60只，按体质量随机分成止咳平喘胶囊高(2．8g/kg)、中(1．4g/kg)、低(0.7g/kg)剂量组，阳性对照组(橘红胶囊0．46g/kg)、模型对照组和空白对照组，雌雄各半。先用肛温计测量每只鼠正常肛温(肛温计插入肛门内1．5cm)二次，记录各组小鼠初始体温，求其平均值作为正常体温，计算均值标准差确定无组间差异，禁食不禁水12h后分别灌胃给药和生理盐水(空白对照组和模型对照组)。灌胃给药40nim后，腹腔注射脂多糖(0．66mg/kg)致热，给致热剂后每隔1h测定各组大鼠体温，记录体温变化。

2．5 平喘作用

采用豚鼠乙酰胆碱、磷酸组胺引喘法［2］。取一定数量健康豚鼠，将每只豚鼠置于4L密闭的玻璃钟罩内，待安静后，400mmHg的压力喷入2%氯化乙酰胆碱和0.1%的磷酸组胺等体积混合15s，进行预挑选。喷雾停止后，观察6min内豚鼠引喘的潜伏期，即喷雾停止后，出现喘息性抽搐的时间。潜伏期超过120s的不敏感豚鼠不予选用。第2天，将预选合格的豚鼠50只随机分为5组，按体质量随机分成空白对照组、阳性对照组(橘红胶囊0．39g/kg)、止咳平喘胶囊高(2．4g/kg)、中(1．2g/kg)、低(0．6g/kg)剂量组，每组 10 只。各给药组口服给药，每日1次，连续2天。末次给药后2h和4h后，重复上述引喘方法，记录6min内豚鼠引喘的潜伏期(引喘潜伏期超过6min者，则其引喘潜伏期以360s计算)。

2．6 抑菌实验

采用滤纸片扩散法［3］。肉汤琼脂培养基制备:蛋白胨10g，氯化钠5g，琼脂20g，加入肉浸液1 000ml内，加热融化后过滤，调节pH值为7．6，15磅高压灭菌20min，趁热将培养基倒入预先灭菌的培养皿内约4mm厚，冷却后即成。受试药物处理:取止咳平喘胶囊或橘红胶囊内容物5g，加水至25ml，超声波超声10min后离心，取上清液调pH值为7．0(中性)、灭菌、备用。受试菌种:金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus au-reus Rosenbach ATCC 6538)，肺炎双球菌(Pneumococ-cus ATCC 49619)，乙型溶血性链球菌(beta hemolytic streptococcus ATCC 32204)。

方法:将已经孵育16h的新鲜菌液用接种环均匀划线接种于肉汤琼脂培养基上，取直径7mm的圆形滤纸片用受试药液浸透后均匀地贴在平板培养基上，其中阴性对照组滤纸片蘸无菌盐水后分别置于三种菌种的平板上;阳性对照组滤纸片上蘸有无菌的橘红胶囊提取液(原液)后分别置于三种菌种的平板上;受试药物组滤纸片上蘸有无菌的止咳平喘胶囊提取液(其中高剂量组蘸取原液、中剂量组蘸取原液的2倍稀释液、低剂量组蘸取原液的4倍稀释液)置于三种菌种的平板上。37℃培养24h后测定抑菌圈直径大小，评价抑菌作用的强弱。

3 结果

3．1 止咳平喘胶囊对小鼠镇咳作用 结果见表1。

注:与空白对照组比较，*P ﹤0．05 ，＊＊P ﹤0．01。

表1结果表明，止咳平喘胶囊剂高、中、低剂量组与空白对照组相比，能明显的增加小鼠咳嗽的潜伏期和降低小鼠的咳嗽次数(P＜0．05或P＜0．01)。说明止咳平喘胶囊有明显的镇咳作用。

3．2 止咳平喘胶囊对小鼠的祛痰作用 结果见表2。

表2结果表明，各给药组同空白对照组比较，止咳平喘胶囊高、中、低剂量组和阳性对照组对小鼠呼吸道酚红的排泄量有增加的趋势，但无明显的差异性(P＞0．05)。

表2 止咳平喘胶囊对小鼠酚红排泄量的影响(±s，n=10)

表2 止咳平喘胶囊对小鼠酚红排泄量的影响(±s，n=10)

3．3 止咳平喘胶囊抗炎作用 结果见表3。

组别 剂量(g/kg) OD值 酚红量(ug/ml)空白对照组 － 0．223 ±0．097 2．03 ±0．69高剂量组 4．0 0．289 ±0．090 2．32 ±0．66中剂量组 2．0 0．298 ±0．089 2．40 ±0．65低剂量组 1．0 0．319 ±0．120 2．62 ±0．87阳性对照组0．65 0．289 ±0．068 2．34 ±0．50

表3 止咳平喘胶囊对二甲苯致炎小鼠耳肿胀程度的影响(±s，n=10)

表3 止咳平喘胶囊对二甲苯致炎小鼠耳肿胀程度的影响(±s，n=10)

注:与模型对照组比较，*P ﹤0．05，＊＊P ﹤0．01

组别 剂量(g/kg)左耳片质量(mg)右耳片质量(mg)左右耳差值(mg)模型对照组 － 9．25 ±1．25 15．88 ±3．23 6．63 ±3．26高剂量组 4．0 10．82 ±0．89 12．59 ±1．15 1．77 ±0．86＊＊中剂量组 2．0 12．01 ±1．44 14．36 ±2．03 2．35 ±1．17＊＊低剂量组 1．0 12．01 ±0．86 16．04 ±2．40 4．03 ±2．39*阳性对照组 0．65 12．76 ±1．09 16．05 ±1．81 3．29 ±1．63*

表3结果表明，各给药组同模型对照组比较，止咳平喘胶囊高、中、低剂量组和阳性对照组小鼠的左右耳差值重量明显减轻(P＜0．05或P＜0．01)，表明止咳平喘胶囊能降低小鼠耳肿胀程度。说明止咳平喘胶囊具有一定抗炎作用。

3．4 止咳平喘胶囊解热作用

表4结果表明，各组动物的正常体温(0h)无明显的差异性(P＞0．05)，给致热剂后模型对照组的不同时间体温明显高于空白对照组(P＜0．01或P＜0.05)。而不同时间各给药组分别同模型对照组比较，给致热剂后1h、2h、3h，各给药组体温明显降低(P＜0．01或P＜0．05);给致热剂后 4h，止咳平喘胶囊各组体温明显降低(P＜0．01或P＜0．05)，而阳性对照组无明显的差异性(P＞0．05);给致热剂后5h、6h，止咳平喘胶囊高剂量组体温明显降低(P＜0．01)，其他各组无明显的差异性(P＞0．05);表明止咳平喘胶囊可抑制脂多糖引起的大鼠体温升高，作用时间可达6h以上，具有明显的解热作用。

表4 止咳平喘胶囊对内毒素致小鼠发热的影响(±s，n=10)

表4 止咳平喘胶囊对内毒素致小鼠发热的影响(±s，n=10)

注:与模型对照组在相同时间比较，*P﹤0．05，＊＊P﹤0．01。

组别 给药前体温(℃)给致热后体温变化(℃)1h 2h 3h 4h 5h 6h空白对照组 36．93 ±1．18 37．44 ±0．56＊＊ 37．34 ±0．52＊＊ 36．89 ±0．69＊＊ 37．10 ±0．69* 36．82 ±0．67* 36．78 ±0．66*模型对照组 36．99 ±0．85 38．71 ±0．60 39．04 ±0．51 38．40 ±0．74 37．88 ±0．51 37．56 ±0．67 37．62 ±0．92高剂量组 36．88 ±1．10 37．39 ±0．60＊＊ 36．80 ±0．55＊＊ 37．31 ±0．68＊＊ 36．94 ±0．71＊＊ 36．20 ±0．73＊＊ 36．55 ±0．69*中剂量组 36．99 ±0．96 38．23 ±0．40* 37．88 ±0．72＊＊ 37．64 ±0．57* 37．14 ±0．70* 37．34 ±1．06 37．08 ±0．69低剂量组 36．94 ±0．97 37．87 ±0．74＊＊ 37．55 ±0．70＊＊ 37．04 ±0．76＊＊ 36．69 ±0．50＊＊ 37．12 ±0．71 37．39 ±0．72阳性对照组 37．12 ±0．73 37．92 ±0．89* 37．98 ±0．65＊＊ 37．64 ±0．56*37．54 ±0．85 36．60 ±1．08 37．03 ±1．17

表5 止咳平喘胶囊对豚鼠哮喘潜伏期的影响(±s，n=10)

表5 止咳平喘胶囊对豚鼠哮喘潜伏期的影响(±s，n=10)

注:与给药前比较，*P ﹤0．05，＊＊P ﹤0．01;与空白对照组比较，☆P ﹤0．05，☆☆P ﹤0．01。

组别 剂量(g/kg) 药前引喘潜伏期(S) 药后2h引喘潜伏期(S) 药后4h引喘潜伏期(S)空白对照组61．56 ±9．62 61．67 ±7．20 61．93 ±8．24高剂量组 2．4 61．87±11．58 76．11±12．02＊＊☆☆ 90．84±11．64＊＊☆☆中剂量组 1．2 60．42±9．71 72．05±10．31＊☆ 74．90±12．47＊☆低剂量组 0．6 60．84 ±8．55 67．37 ±11．04 68．52 ±14．61阳性对照组 0．39 57．81 ±8．42 66．49 ±9．59* 77．60 ±15．06＊☆☆

3．5 止咳平喘胶囊对豚鼠的平喘作用

表5结果表明，给药前各组之间引喘潜伏期无明显的差异性(P＞0．05);给药后2h和4h分别同给药前比较，低剂量组有增加的趋势，但无明显的差异性(P＞0．05);而高、中剂量组和阳性对照组的引喘潜伏期明显延长(P＜0.05或P＜0．01);给药后2h和4h，各给药组分别同空白对照组比较，止咳平喘胶囊高、中剂量组和阳性对照组均可使引喘潜伏期明显延长(P＜0．05或P＜0．01)，低剂量组有延长的趋势，但无明显的差异性(P＞0．05)。表明止咳平喘胶囊有一定的平喘作用。

3．6 止咳平喘胶囊抑菌作用 结果见表6。

表6 止咳平喘胶囊对呼吸道菌生长的影响(±s，n=9)

表6 止咳平喘胶囊对呼吸道菌生长的影响(±s，n=9)

组别 金黄色葡萄球菌(mm)肺炎双球菌(mm)乙型溶血性链球菌(mm)阴性对照组0 0 0高剂量组 16．31 ±0．65 16．42 ±0．44 20．01 ±1034中剂量组 12．70 ±1．43 12．28 ±1．18 15．94 ±1．45低剂量组 8．98 ±0．96 8．41 ±0．85 12．72 ±0．81阳性对照组15．13 ±1．03 14．90 ±1．32 18．50 ±1．00

表6结果表明，阴性对照滤纸片周围均生长细菌，而止咳平喘胶囊高、中、低剂量对金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、乙型溶血性链球菌均有一定的抑菌效果，从抑菌环大小来看，三个剂量组有明显的剂量关系。表明止咳平喘胶囊具有明显的体外抑菌作用。

4 讨论

经主要药效学实验证明，止咳平喘胶囊口服给药，对氨水引起的小鼠咳嗽次数明显减少、咳嗽潜伏期明显延长，具有止咳作用;可使小鼠呼吸道酚红排出量增加，具有祛痰作用;对二甲苯引起的小鼠耳肿胀有明显的抑制作用，具有抗炎作用;对乙酰胆碱和磷酸组胺引起的豚鼠喘息时间有延长作用，具有平喘作用;对脂多糖引起的小鼠发热有明显的抑制作用，具有解热作用。体外实验证明，止咳平喘胶囊对金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、乙型溶血性链球菌均有一定的抑菌效果［4，5］。表明止咳平喘胶囊具有止咳、祛痰、平喘、抗炎、解热和抑菌作用。

［1］徐淑云，卞如濂，陈修．药理实验方法学［M］．北京:人民卫生出版社，1982．

［2］赵滨红，周成林．双黄平喘方的平喘祛痰和抗炎作用［J］．医药论坛杂志，2007，28(15):68 －69．

［3］李文兰，于莹莹，赵培，等．乌头总生物碱贴片抗炎镇痛药效学研究［J］．天然产物研究与开发，2008，20(2):339 －342．

［4］肖佳音，陈志英，马辉．石川化痰散祛痰镇咳作用的实验研究［J］．中医药学报，2011，39(3):41 －42．

［5］邹淑君，贾昌平，田宝成，等．万寿菊花镇咳作用有效部位的实验研究［J］．中医药学报，2010，38(1):40 －42．