张玉莲 黄君勤 池王胄 宋庭 马亦蓉

（上海新先锋药业有限公司 上海 201203）

两性霉素B为多烯类抗真菌药物，临床上用于治疗深部真菌引起的内脏或全身感染。随着医疗水平的提高，器官移植和肿瘤切除等重大手术越来越普遍，真菌深部感染的发生率也随之上升。上海新先锋药业有限公司是专业生产两性霉素B原料药及其制剂注射用两性霉素B和注射用两性霉素B脂质体的企业，其中注射用两性霉素B脂质体是国内独家生产品种。为进一步提升产品质量，本研究利用不同极性的树脂[1]对两性霉素B原料药中杂质的选择吸附性对两性霉素B进行纯化，有效降低了两性霉素B原料药中的相关物质含量，同时提高了产品收率。

1 材料和仪器

各型号大孔树脂[2]；两性霉素B原料药（上海新先锋药业有限公司生产）；600 mm×50 mm层析柱；高效液相色谱仪（Agilent 1100）；YZ 156恒流泵；磁力搅拌器；恒温水浴锅；N, N-二甲基甲酰胺、乙醇、甲醇、丙酮等（均为工业级试剂）。

2 实验与结果

2.1 单个树脂筛选

根据两性霉素B的性质及生产需要进行用于杂质吸附的单个树脂型号筛选研究：先对文献报道杂质吸附效果好的树脂进行静态筛选，然后用通用方法对初步筛选出的20余种树脂进行预处理并用常用树脂柱参数进行过柱实验（表1），确定了对两性霉素B原料药中不同杂质吸附效果好的几种树脂型号。

表1 不同型号树脂对杂质的静态吸附

从表1可以看出，经过M-1或M-2树脂吸附后的两性霉素B原料药中的总杂质含量均降低了约2%，最大单一杂质含量也明显下降。因此，用大孔树脂吸附两性霉素B原料药中的杂质可行且效果显著。

2.2 最佳柱径比及树脂倍数确定

2.2.1 柱径比筛选

选择柱径比分别为500 mm：20 mm、500 mm：30 mm、500 mm：40 mm、500 mm：50 mm、500 mm：60 mm和500 mm：70 mm的M-2树脂柱，在同等树脂倍数、上样温度、pH和过滤速率条件下动态过柱[3]，考察经树脂吸附后的两性霉素B原料药中的总杂质含量下降的百分数，最终择优选择的最佳柱径比为500 mm：60 mm（表2）。

表2 柱径比对总杂质含量下降的影响

2.2.2 树脂倍数筛选

同等条件下，分别单独在吸附效果较好的M-2树脂柱中加入10、20、30和40倍产品量的大孔树脂，根据杂质下降的实验结果选定吸附效果最佳的树脂倍数，然后用更小的等分法进行同等条件下的实验，实验结果见表3和表4。

表3 不同量M-2树脂对杂质吸附的影响（初筛）

表4 不同量树脂对杂质吸附的影响（复筛）

从实验数据可以看出，30倍产品量的树脂为最佳杂质吸附树脂倍数。继续用30倍产品量的树脂进行4组重现性杂质吸附实验，实验结果见表5。

表5 重现性实验数据

通过数据对比可以看出，30倍产品量的最佳树脂倍数和500 mm：60 mm的最佳柱径比的确定能进一步优化树脂对两性霉素B原料药中的杂质吸附效果。

2.3 混合树脂组合及其比例的筛选

各种实验结果都表明，树脂对两性杂质的吸附效果明显，但不同型号的树脂吸附的杂质种类不尽相同。因此，利用不同型号树脂对两性霉素B原料药中杂质的选择吸附性，用蠕动泵控制树脂柱中溶液的添加速率，在30倍产品量的混合树脂和500 mm：60 mm的柱径比条件下进行混合树脂对两性霉素B原料药中杂质的吸附实验，结果发现混合树脂M-1+M-2、M-3+M-4、M-5+M-6的吸附效果较好（表6）。

表6 混合树脂对杂质吸附的影响

从表6可以看出，M-1+M-2树脂组合的吸附效果最佳，故在30倍产品量的混合树脂和500 mm：60 mm的柱径比条件下进一步研究M-1和M-2两种树脂在以不同比例混合时对两性霉素B原料药中杂质的吸附效果。实验结果（表7）表明，在各吸附条件基本恒定的情况下，当树脂混合比例为M-1：M-2为4：6时，其吸附两性霉素B原料药中杂质的效果较优。

表7 树脂混合比例对杂质吸附的影响（初筛）

继续在M-1∶M-2为4∶6的比例周围进行细等分比例实验，研究吸附两性霉素B原料药中杂质效果最优的M-1和M-2两种树脂的混合比。实验结果（表8）表明，在M-1：M-2为3.6：6.4时，混合树脂对两性霉素B原料药中杂质的吸附效果[4]最好，总杂质含量下降3.30%、最大单一杂质含量下降0.82%，较其它比例的混合树脂的杂质吸附效果都更显著。

表8 树脂混合比例对杂质吸附的影响（复筛）

3 结语

本研究依据不同极性的大孔树脂的选择吸附性，探讨了其在两性霉素B原料药纯化工艺中的应用效果。经深入研究不同极性树脂对两性霉素B原料药中杂质[5]的特异性吸附作用，将不同型号的树脂按最佳比例混合，以便有针对性、有选择性地吸附两性霉素B原料药中的杂质。本研究方法可显著降低两性霉素B原料药中的相关物质、进一步提高两性霉素B原料药的质量，同时也能避免常规大孔树脂应用中存在的吸附周期长、中间过程控制麻烦、洗脱难和树脂重利用率低等问题。

[1] 张英, 李卫民, 赖爱芬. 大孔树脂型号与规格的规范化探讨[J]. 高分子, 2009, 11(11): 44-48.

[2] 李善吉, 伍胜君. 大孔树脂的应用研究概况[J]. 广东轻工职业技术学院学报, 2005, 4(2): 11-13.

[3] 王一敏, 任晓蕾. 大孔树脂的应用研究[J]. 中医药信息, 2008, 25(4): 26-28.

[4] 王海燕, 李晓露, 王健, 等. 大孔树脂法分离纯化那他霉素的工艺研究[J]. 中国抗生素杂志, 2005, 35(12): 194-201.

[5] 王雷, 田青平, 谢茵. 两性霉素B平衡溶解度和表观油水分配系数的测定[J]. 山西医科大学学报, 2007, 38(12): 1082-1084.