邓思珊，刘洪旭，马振菁，徐榕青，胡明芳

(1.福建省医学科学研究院,福建省医学测试重点实验室，福建 福州 350001；2.福建省野生动植物保护管理中心，福建 福州 350003)

HPLC法考察人工栽培草珊瑚中异嗪皮啶，迷迭香酸和落新妇苷含量

邓思珊1，刘洪旭1，马振菁1，徐榕青1，胡明芳2

(1.福建省医学科学研究院,福建省医学测试重点实验室，福建 福州 350001；2.福建省野生动植物保护管理中心，福建 福州 350003)

目的考察不同栽培条件草珊瑚中异嗪皮啶，迷迭香酸和落新妇苷含量。方法样品来自不同栽培条件下的草珊瑚。采用HPLC测定异嗪皮啶、迷迭香酸和落新妇苷。色谱柱：ZORBAX SB-C18(250 mm × 4.6 mm,5 μm)；流动相：A:乙腈-0.1 % 磷酸溶液(20:80),B:乙腈-0.1 % 磷酸溶液(90:10)，由A到B梯度洗脱；流速：1 ml/min；检测波长：330、290nm。结果各组分含量与不同栽培条件有关。不同部位各组分含量差别显著。结论采用异嗪皮啶，迷迭香酸和落新妇苷进行多指标含量测定，能较全面反映草珊瑚品质；本实验区草珊瑚品质优良；地上部位有较高的药用价值。

草珊瑚； HPLC；异嗪皮啶；迷迭香酸；落新妇苷

草珊瑚系金栗兰科草珊瑚属植物草珊瑚Sarcandraglabra(Thunb.) Nakai的全株，生于林下湿地，分布于福建、广东、广西、江西、云南、安徽、四川、浙江、湖南、湖北、贵州等省及越南等东南亚国家，是我国重要的中药材。它全株入药，具有抗菌、消炎、清热解毒之功效。草珊瑚含挥发油、黄酮苷、香豆素以及甾萜类等多种成分，主要用于治疗各种炎症性疾病,有文献报道对治疗多种恶性肿瘤如胰腺癌,胃癌,直肠癌,肝癌和食道癌有明显效果[1]。全国现有几十家企业以草珊瑚为原料生产中成药，产值达数亿元[2]，野生草珊瑚已远远不能满足生产上的需要，建设草珊瑚药材基地是解决草珊瑚中药材原料短缺的必由之路。因此研究不同栽培条件下草珊瑚的质量，对于保护野生资源、推广种植草珊瑚具有重要意义。本研究采用福建泰宁8个试验区的人工栽培草珊瑚，选择以种子直播方式种植、上层不同遮荫度和遮荫材料、林下套种杉木2年半采收的草珊瑚作为试验样品(表1样品1除外)，通过HPLC同时测定草珊瑚中异嗪皮啶、迷迭香酸和落新妇苷的含量，分析草珊瑚中药理活性化合物香豆素类、酚类、黄酮类代表成分含量，更深入探讨不同栽培条件下草珊瑚品质，为全面评价草珊瑚提供实验依据。

1 仪器与试药

HP-1100 高效液相色谱仪，DAD检测器(美国安捷伦公司)；AE 240 型万分之一电子天平(瑞士 Mettler 公司)；超声波发生器(上海精密仪器仪表有限公司)。

异嗪皮啶对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110837-200304),迷迭香酸对照品(含量 98%南京泽朗医药)，落新妇苷对照品(含量98%，南京泽朗医药)；乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯； 草珊瑚由福建省野生动植物保护管理中心提供，采于福建泰宁 8 个试验区不同栽培条件下的鲜品草珊瑚全株，经省药检所吴春敏主任鉴定均为金栗兰科草珊瑚属植物草珊瑚Sarcandraglabra(Thunb.) Nakai 的全株，按茎叶与根分为地上与地下部分，经烘干、粉碎处理。

2 方法与结果

2.1溶液的制备

2.1.1混合对照品溶液 取异嗪皮啶、迷迭香酸、落新妇苷对照品各 10 mg，精密称定，分别置 50 ml量瓶中，加 50%甲醇溶解稀释至刻度，制成 0.2 mg/ml的储备液。取1.0 ml置10 ml量瓶中，加 50%甲醇稀释至刻度使成 20 μg/ml 的对照品溶液。

2.1.2供试品溶液 取草珊瑚样品 2 g，精密称定，置 100 ml具塞三角烧瓶中，加 50 ml甲醇，称定重量，浸泡过夜，超声处理 45 min, 放冷，称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤纸滤过，精密量取续滤液 5 ml置 10 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，经 0.45 μm有机滤膜滤过，即得。

2.2色谱条件及系统适应性试验

2.2.1色谱条件 色谱柱：ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)(美国Agilent公司)；流动相：A相:乙腈-0.1 % 磷酸溶液(20:80),B相：乙腈- 0.1 % 磷酸溶液(90:10)；由A相到B相梯度洗脱；流速：1 ml/min；检测波长：330、290 nm；柱温：室温；进样量：20 μl。

2.2.2检测波长的选择 根据DAD检测器得到异嗪皮啶、迷迭香酸、落新妇苷的光谱图，其最大吸收波长分别为 344、330、290 nm，选择 330 nm 作为异嗪皮啶、迷迭香酸的测定波长，290 nm 作为落新妇苷的测定波长。在上述色谱条件下，异嗪皮啶、迷迭香酸、落新妇苷与相邻峰分离度均大于2，理论塔板数均大于1万，330、290 nm 色谱图见图1、图2。

图1 330 nm 异嗪皮啶、迷迭香酸对照品(A)与1号试验区地上(B)、地下(C) HPLC 图

图2290nm落新妇苷对照品(A)与1号试验区地上(B)、地下(C)HPLC图

3-落新妇苷

2.3方法学考察

2.3.1线性关系的考察 分别取异嗪皮啶、迷迭香酸、落新妇苷对照品储备液，用 50%甲醇配制浓度分别为 3.125、6.25、12.5、25、50、100 μg/ml系列标准工作溶液，按“2.2.1”项下色谱条件测定，以峰面积(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标，计算回归方程。结果表明，异嗪皮啶、迷迭香酸、落新妇苷均在 3～100 μg/ml 的浓度范围内呈良好的线性关系，回归方程及相关系数分别为：Y=41.567X+3.913 8，r=1.000 0、Y= 56.448X+23.12，r=0.999 7、Y=68.779X-14.716，r=0.999 7。

2.3.2精密度试验 取“1 号试验区地上部分”供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件连续进样 5 次，进样量为 20 μl , 测定峰面积值，计算异嗪皮啶、迷迭香酸、落新妇苷的RSD分别为 1.03% 、0.98%、1.23%。

2.3.3重复性试验 取 1 号试验区地上部分样品，按“2.1.2”项下制备样品，平行 5 份，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，结果异嗪皮啶、迷迭香酸、落新妇苷平均含量分别为 0.14%、0.52%、0.22%；RSD分别为 1.52% 、1.38%、1.84%。

2.3.4稳定性试验 取“2.1.2”项下供试品溶液1份，室温放置，分别于0、2、4、8、12、24 h ,按照“2.2.1”项下色谱条件进样测定，以峰面积值计算RSD，考察供试品溶液的稳定性，结果异嗪皮啶、迷迭香酸、落新妇苷RSD分别为 1.03% 、0.81%、1.59%。表明供试品溶液在 24 h 内稳定。

2.3.5加样回收率试验 取草珊瑚样品(1号试验区地下部分)1 g，精密称定，加入异嗪皮啶、迷迭香酸、落新妇苷各 2 mg ，平行 6 份，计算加样回收率，异嗪皮啶、迷迭香酸、落新妇苷回收率分别为 97.68%、99.55%、102.03%；RSD分别为 2.06%、1.65%、1.93%。

2.4样品测定 取泰宁 8个试验区草珊瑚样品按1～16编号，按“2.1.2”项下制备样品溶液，按照“2.2.1”项下色谱条件进样测定，外标法计算异嗪皮啶、迷迭香酸、落新妇苷含量，各组分含量结果见表 1。

表1 草珊瑚样品各组分含量测定结果

3 讨论

3.12005年版《中国药典》[3]含量测定只测定异嗪皮啶，2010年版《中国药典》[4]增加了酚类成分迷迭香酸含量测定，要求两个组分含量都大于0.020%，本试验区的草珊瑚异嗪皮啶与迷迭香酸含量均较高，远高于药典所规定指标。

3.2由于草珊瑚中黄酮是重要的有效成分，常以芦丁比色法测定总黄酮[5，6]，但对于中药材含量测定，比色法误差较大。本研究以落新妇苷作为黄酮代表成分[7]，采用HPLC，同异嗪皮啶和迷迭香酸相同色谱体系进行测定，检测波长290 nm，方法稳定，重现性好，分离效果与含量结果都令人满意。落新妇苷含量较高，因此增加落新妇苷含量测定应更能评价药材品质。

3.3不同部位(地上和地下)有效成分含量比较：从表 1 可以看出，草珊瑚地下部分异嗪皮啶的含量远高于地上部分；落新妇苷则相反，地上部分的含量远高于地下部分；迷迭香酸的含量较高，基本上是地上部分显著高于地下部分，因此在开发利用草珊瑚时，可以根据药理作用和有效成分针对性的对地上和地下部分合理利用。

3.4不同时间采收有效成分含量变化：从表 1 可以看出，18 个月先采收地上部分，迷迭香酸与落新妇苷含量均较高，异嗪皮啶略低。

3.5不同栽培方式和处理的有效成分含量变化：从表1中4、5、6区测定结果可以看出，第一年采用茅草、毛竹、杉木不同方式遮阴，第二年套种杉木，测定结果第一年杉木遮阴与茅草遮阴3个有效成分含量较高，第一年毛竹遮阴3个有效成分含量较低，提示毛竹遮阴不如茅草和杉木。从表1中7、8区测定结果可以看出，第一年50%与 70%遮阳网处理，异嗪皮啶含量无较大差异，但迷迭香酸和落新妇苷地上部分含量50%处理明显高于70%处理。提示郁闭度较高，阳光过少不利于草珊瑚的生长。从3区也可看出过多的遮阴，对异嗪皮啶的生长略有利，但对落新妇苷的生长不利。

3.6整株利用获得的药物有效成分比较多，但不利于可持续经营，综合 3 个指标测定结果，地上部分优于地下，且地上部分重量远高于地下部分，作者认为采收地上部分，适时进行整株拔出采收是一种较好的产品收获和培育方式。

[1] 朱丽萍，李 媛，杨敬芝，等. 草珊瑚的化学成分研究[J].中国中药杂志，2008，33(2)：155.

[2] 潘心禾，刘日林，斯金平，等. 肿节风药材资源现状及可持续利用的研究[J].中草药，2007，38(3)：474.

[3] 中国药典2005年版.一部[S]．2005：154.

[4] 中国药典2010年版.一部[S]．2010：207.

[5] 李石蓉，夏绘晶，康丽洁，等. 中药草珊瑚中异嗪皮啶和总黄酮含量的分析研究[J].中南药学，2005，3(6)：327.

[6] 励 娜，杨荣平，王宾豪，等. 不同部位草珊瑚总黄酮的含量测定[J].重庆中草药研究，2007，56(2)：16.

[7] 李 远，赵中流. 肿节风化学成分、药理作用及质量控制的研究概况介绍[J].中国药事，2008，22(11)：1005.

2010-06-21

[修回日期] 2010-10-26

Contentdeterminationofisofraxidin,rosmarinicacidandastilbinfromHerbaSarcandraeindifferentartificalcultivated

DENG Si-shan1, LIU Hong-xu1, MA Zhen-jing1, XU Rong-qing1, HU Ming-fang2

(1. Fujian Academy of Medical Sciences,Fuzhou 350001, China; 2. Fujian Administration Center of Wild Animals and Plants Protection , Fuzhou 350001, China)

ObjectiveTo determination isofraxidin, rosmarinic acid and astilbin content in different artifical cultivatedHerbaSarcandrae.MethodsTest sample were classified by plant ports of above and below ground ,and determine by HPLC. A Zorbax SB-C18column was used, with the mobile phase of CH3CN-0.1%H3PO4(20:80)and CH3CN-0.1%H3PO4(90:10). The gradient elution; detection wavelength was 330 nm and 290nm.ResultsThe content of isofraxidin, rosmarinic acid and astilbin content in different artifical cultivatedHerbaSarcandraeand different parts ofSarcandraewere quite different.ConclusionDetermination of isofraxidin, rosmarinic acid and astilbin content ,could fully reflect the quality ofSarcandrae. The experimental area of artifical cultivatedSarcandraehave good quality; plant part above ground have a high medicinal value.

Sarcandraglabra; isofraxidin; rosmarinic acid；astilbin；HPLC

福建省自然科学基金(2009J01114).

邓思珊(1963-)，女，副研究员.Tel:13860638586，

E-mail:fzdss@163.com.

R917

A

1006-0111(2011)03-0200-04