葛任新 李月娥

广东省高州市中医院，广东高州 525200

不同产地铁苋菜中总黄酮的含量测定

葛任新 李月娥

广东省高州市中医院，广东高州 525200

目的测定不同产地铁苋菜中总黄酮的含量。方法采用乙醇溶剂浸提，结合超声波辅助提取铁苋菜中总黄酮。对提取温度、料液比、乙醇浓度进行L9（33）正交选择试验。结果最佳提取条件：提取温度60℃，料液比1 g︰40 mL，乙醇浓度70%。4个不同产地药材，以徐州产铁苋菜中总黄酮含量最高，为5.4646 mg/g。结论铁苋菜中总黄酮的含量因产地不同而存在一定的差异。

铁苋菜；总黄酮；正交试验；含量测定

铁苋菜为一年生草本，高30～50 cm。叶互生，薄纸质，椭圆形、椭圆状披针形或卵状菱形，基部有3出脉，长2.5～8 cm，宽1.5～3.5 cm，两面被稀疏柔毛或无毛；叶柄长1～3 cm。花单性，雌雄同序，无花瓣；穗状花序腋生；雌花萼片3，子房3室，被疏毛，生于花序下端的叶状苞片内；苞片开展时肾形，长约1 cm，合时如蚌，边缘有锯齿；雄花多数生于花序上端，花萼4裂，裂片镊合状；雄蕊8，花药长圆筒形，弯曲；无退化子房及花盘。蒴果小，钝三棱状，直径约3～4 mm[1]。

铁苋菜生于旷野、路边较湿润的地方。分布黄河流域中下游及长江以南各地，主产于江苏、广东、广西、福建、四川、江西、安徽等地。铁苋菜主要含有黄酮、生物碱、鞣质、铁苋菜素、没食子酸、胡萝卜苷、谷甾醇等有效成分。临床主要用于热毒泻痢、血热出血、外伤出血等症。

含铁苋菜的制剂：止泻定胶囊系福建省立医院儿科叶孝礼主任医师30多年来治疗湿热泄泻的经验方，它由中草药铁苋菜（Acalypha australis L.）与盐酸黄连素、甘草等组成，由福州中药厂研制成胶囊剂，并经临床研究，取得较满意的疗效[2]。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

铁苋菜药材（产地：江苏徐州、河南柳州、湖北神农架、河北邯郸）；芦丁、生化试剂购自广东省药品检验所；乙醇、醋酸钠、冰醋酸、AlCl3均为分析纯；蒸馏水。

1.2 主要设备

MODEL HN1006超声波清洗机来自中国华南超声设备厂；Unico柯尼龙WFZ UV-2100紫外可见分光光度计来自上海仪器有限公司；电热恒温水浴锅；流水式中药粉碎机来自温岭市大德中药机械有限公司。

2 方法与结果

2.1 工作曲线回归方程的建立

2.1.1 标准溶液的配制 精确称取120 ℃干燥至恒重的芦丁对照品10 mg，至100 mL容量瓶中，加体积分数70%乙醇适量，超声处理5 min使溶解，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，即得（每1毫升含无水芦丁0.1 mg）。

2.1.2 显色剂的配制 称取AlCl3 1.34 g ，乙醇定容至100 mL，配成0.1 mol/L的溶液。称取醋酸钠2.72 g，蒸馏水溶解至100 mL，配成0.2 mol/L的溶液。称取1.15 mL冰醋酸，蒸馏水溶解至100 mL，配成0.2 mol/L的溶液。

2.1.3 标准曲线的制作 精密量取对照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0，平行两份（差示法），分别置于10 mL容量瓶中，第1份直接加入2 mL 0.1 mol/L AlCl3溶液，乙醇定容，充分显色20 min。第2份加入pH为5.2的NaAc-HAc缓冲溶液（0.8 mL 0.2 mol/L醋酸钠溶液+2 mL 0.2 mol/L醋酸溶液），乙醇定容。以第2瓶为参比（差示法扣除背景干扰），用可见分光光度计在415 nm波长处测定其吸光度（ΔA）。以差示吸光度ΔA为纵坐标，浓度为横坐标，计算回归方程。

2.2 总黄酮的提取和测定方法

2.2.1 总黄酮的提取 精密称取样品1.5 g置于50 mL锥形瓶中，加一定体积分数乙醇若干毫升（按正交试验做），于超声波反应器中（控制好温度），提取 30 min（15 min，10 min，5 min），滤过，洗涤，滤液用蒸馏水定容于100 mL容量瓶中，得到黄酮提取液，待测。

2.2.2 总黄酮含量的测定方法 精密吸取提取液1.0 mL置于5 mL容量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，依法显色，测定吸光度ΔA，并由标准曲线或回归方程计算样品中总黄酮的含量。

2.3 正交试验

正交选用江苏徐州铁苋菜药材。然后以最佳提取条件按相同方法测定其他产地的铁苋菜。利用正交试验考察提取温度、料液比、乙醇浓度这3个因素对提取效果的交互影响。试验用L9（33）正交表，研究提取条件对提取效果的影响的大小，并确定最佳工艺。设3因素3水平正交试验，3因素分别为温度A、料液比B、乙醇浓度C。见表1。

表1 试验因素水平

表2 正交试验设计及结果分析

由极差分析可知，各因素对提取效果影响的大小顺序是：A＞C＞B，即提取温度＞乙醇浓度＞料液比 。从正交试验设计及结果分析表可得出最优化组合为A2B2C3，即提取温度为60 ℃，料液比为1 g ： 40 mL，乙醇体积分数为70%。

2.4 结果

图1 标准曲线及回归方程

2.5 方法学考察

以下实验均按最佳提取条件提取总黄酮，药材均为江苏徐州铁苋菜。

2.5.1 精密度试验 精密量取3.0 mL项下的芦丁标准液连续重复测定吸光度6次。计算得RSD=0.106%，结果表明该议器测量精密度优良。

2.5.2 重现性试验 称取江苏徐州产的铁苋菜药材粉末6份，按样品溶液制备方法处理（分出两份，一份作为差示法的参比溶液），依法显色，在415 nm处测定吸光度。计算相对标准偏差RSD=1.842%，结果表明该方法重现性良好。

表3 不同产地铁苋菜药材总黄酮的含量

2.5.3 稳定性实验 精密量取江苏徐州产地的铁苋菜药材样品溶液1.0 mL，60 min内每隔5 min测定一次吸光度。计算相对标准偏差RSD。

2.5.4 加样回收率试验 精密移取样品溶液1.0 mL（6份），分别加入0.1 mg/mL芦丁标准品溶液 0.16 mL（加入与药材总黄酮原有量相当的量mg），摇匀，依法（各平行2份，以第2份作为参比）显色，依法测定吸光度，计算平均回收率为99.63%，以及RSD=0.54%。结果表明，方法分析误差较小，操作计程中损失少，回收率高，方法可靠。

3 讨论

超声波提取法是近年来被用于中药提取的一项新技术，它是利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌等作用，加速药物有效成分进入溶剂[3-4]，较其他方法简单快速，且反应液测定时干扰因素少，结果可靠准确[5]。因此本研究采用超声波分别用3种方法提取铁苋菜中的总黄酮，结果显示最佳提取条件为：提取温度60 ℃，料液比1 g ︰40 mL，乙醇浓度70%。进一步研究表明，3个影响因素基本无交互作用，因此选用正交表安排试验，提高总黄酮的提取率，减少高温对成分的破坏。

本实验以紫外可见分光光度法测定铁苋菜中总黄酮的含量，方法简便易行，专属性强，结果稳定，重现性好。4个不同产地药材，结果以徐州产铁苋菜中总黄酮含量最高，为5.464 6 mg/g。结果表明铁苋菜中总黄酮的含量因产地不同而存在一定的差异。

黄酮类化合物广泛存在于自然界的植物中，具有多种生物学活性，是中药材药物内的一类重要化学成分，具有多种药理作用，诸如抗炎、抗氧化、抗癌和抗肿瘤作用等。上述实验表明，铁苋菜中含有极为丰富的黄酮类物质，但不同产地的铁苋菜中所含有的总黄酮成分存在较大的差异，这可能与药材的生长环境、采收季节、提取方法以及贮藏条件等都有一定的关系。

[1]中国科学院植物研究所.中国高等植物图鉴[M].北京：科学出版社，1972：605.

[2]郑兴中，倪峰.止泻定胶囊的体内抗菌与止泻作用[J].中药新药与临床药理，1994，5（1）：27-29.

[3]王辰，高玲.超声波辅助提取葛根黄酮的的工艺研究[J].长江大学学报（自然科学版），2009，6（4）：61-64.

[4]丁芳林，彭书练.超声提取荷叶黄酮工艺研究[J].湖南农业科学，2007，（6）：175-177.

[5]梁新红.分光光度法测定仙人掌中总黄酮的的含量[J].中国酿造，2007，（6）：67-69.

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2095-0616（2011）17-42-02

2011-06-27）