黎耀东， 贾 芸， 卢 军

(新疆维吾尔自治区中医医院，新疆乌鲁木齐830000)

益母草为唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt．的新鲜或干燥地上部分。功效主治:活血调经，利水消肿，清热解毒;治疗水肿、小便不利，可单用，也可配白茅根、泽兰等使用;治疗水瘀互结，淤血障碍膀胱;可治疗疮痈肿毒，皮肤瘾疹;活血调经，用于血滞经闭、痛经、经行不畅，产后恶露不尽、瘀滞腹痛等。益母草也广泛应用于现代妇科中成药制剂中，其妇科临床疗效毋庸置疑。现代药理研究表明，益母草中主要有效成分为益母草碱、水苏碱等多种生物碱，具有增强机体的细胞免疫作用;抗血栓形成的作用;对子宫有兴奋作用;抗血小板聚集的作用;益母草制剂对心肌超微结构，特别是线粒体有保护作用，明显地降低血液黏度。

据统计［1］，益母草属植物全球分布，约20种，我国有12种和2个变种，广泛分布于全国各地，主要生于山野荒地、田埂、河滩、草地、路旁、溪边等处，部分地区有栽培。其中益母草 Leonurus japonicus Houtt．为药用的主要植物，同时涉及药用的还有细叶益 母 草 L．sibiricus Linu．Var．β．grandiflora Benth．，L．manshuricus Yabe、白花益母草 L．sibiricus Linu．Var．albiflorus Migo［2］。全国各地一般自产自销，药材质量难以控制，产量难以得到保证［3］。本实验以总生物碱、盐酸水苏碱为考察指标，对影响益母草质量的品种、产地、采收期、部位等因素进行研究。

1 试验部分

1．1 仪器和试药

HPWaters2996高效液相色谱仪，SK25LHC型医用数控超声仪(上海科导超声仪器有限公司);紫外分光计Sintra20(日本);梅特勒-托利多万分之一电子天平(梅特勒托力多仪器上海有限公司);HHS-4S电子数控式恒温水浴锅(上海康路仪器设备有限公司)。

盐酸水苏碱对照品(批号:712-200907，中国药品生物制品检定所);益母草均采自产地，品种由新疆医科大学附属中医医院中药鉴定室李永和(主任中药师)鉴定。

1．2 总生物碱测定方法

1．2．1 检测波长的确定 配制一定质量浓度的对照品溶液，在200～760 nm进行扫描，可见光区于521 nm处有最大吸收。故选择520 nm为检测波长。

1．2．2 线性试验 精密量取盐酸水苏碱对照品溶液(质量浓度为 1．0272 mg/mL)2．5、5、7．5、10、12．5，分别置25 mL 量瓶中，加 10 mL 0．1 mol/L 盐酸溶液，精密加入新制的2%硫氰酸铬铵溶液3 mL，用0．1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，作为盐酸水苏碱对照品溶液;另取0．1 mol/L盐酸溶液20 mL，置另一25 mL量瓶中，精密加入新制的2%硫氰酸铬铵溶液3mL，用0．1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，作为空白溶液;置冰水浴中放置1 h，用干燥滤纸滤过，取续滤液，以0．1 mol/L盐酸溶液为空白，照紫外-分光光度法(附录ⅤA)，在520 nm波长处分别测定吸收度，用空白试剂的吸收度分别减去对照品的吸收度，以吸收度的差值为纵坐标、浓度(mg/mL)为横坐标，绘制标准曲线。

结果表明，盐酸水苏碱在0．102 7～0．513 6 mg/mL浓度范围内线性关系良好，线性回归方程为:Y=0．426 4X －0．001 0(R=0．999 6，n=5)。

1．2．3 供试品溶液的制备 取本品粉末(过二号筛)约2 g，精密称定，置100mL锥形瓶中，精密加水50 mL，称质量，超声处理30 min(功率250 W，频率50 KHz)，加水补足质量，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液20 mL，用稀盐酸调节pH值至1～2后，再使其通过001×7(732)强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂柱(内径2 cm，柱高15 cm)，用水洗脱至流出液呈中性，弃洗脱液，再用质量浓度2 mol/L氨溶液150 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用浓度0．1 mol/L的盐酸溶液溶解并转移至25 mL量瓶中，精密加入新制的2%硫氰酸铬铵溶液3 mL，用0．1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，置冰水浴中放置1 h，用干燥滤纸滤过，取续滤液，即得。

1．3 盐酸水苏碱测定［4-12］

1．3．1 色谱条件 Phenomenex Luna scx色谱柱(4．6 mm ×250 mm，5 μm);流动相:0．05 mol/L 磷酸二氢钾(含0．03%三乙胺和0．1%磷酸，pH 3);体积流量:1 mL/min，柱温:30℃，波长:192 nm，进样量10μL。盐酸水苏碱在上述色谱条件下与其他成分实现了基线分离，见图1、2。

图1 盐酸水苏碱HPLC图

图2 益母草HPLC图

1．3．2 标准曲线的绘制 取盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，加0．1 mol/L盐酸溶液制成1mg/mL的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、12μL进行色谱测定，按上述色谱条件测定峰面积，以进样量(Y，μg)对峰面积(X，mAu*sec)进行线性回归，回归方程为:Y=282．72X+214，r=0．999 8。

1．3．3 供试品溶液的制备 取本品粉末(过二号筛)约2 g，精密称定，置100mL锥形瓶中，精密加水50 mL，称质量，超声处理(功率 250 W，频率 50 KHz)30 min，加水补足质量，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液20 mL，盐酸调节pH值至1～2，通过D101 大孔树脂(内径 1．5 cm，柱高 10 cm)，以 0．1 mol/L盐酸溶液150 mL洗脱，合并洗脱液;将上述洗脱液通过001×7(732)强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂(内径1．5 cm，柱高15 cm)，水洗至流出液呈中性，弃去水洗脱液;再用2 mol/L氨溶液150 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用0．1 mol/L盐酸溶液溶解并转移至5 mL量瓶中，加0．1 mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。精密吸取10μL，进样，按上述色谱条件进行HPLC测定，即得。

1．4 部分产地益母草生物碱的比较

为了确定野生益母草中生物碱的量是否受产地影响，本研究实地收集了新疆部分县市的野生益母草品种;同时，对我国主要药材市场市售的益母草样品进行采集分析，包括河北安国药材市场、广西玉林药材市场、安徽亳州药材市场、广州清平药材市场、浙江磐安药材市场、黑龙江鸡西药材市场。

以上益母草样品多为新鲜植物，切段，30℃烘至含水量10%左右，按照试验1．2及1．3项中总生物碱测定方法及盐酸水苏碱测定方法，对各产地益母草样品进行总生物碱及盐酸水苏碱的测定，结果见表1。

1．5 不同品种益母草生物碱的比较

为了考察不同品种对生物碱的影响，本研究在同一时期采集益母草及其常见习用品种细叶益母草、白花益母草，并进行总生物碱及盐酸水苏碱的测定，结果见表1。

表1 不同产地、不同品种益母草生物碱比较( ± s，n=3)

表1 不同产地、不同品种益母草生物碱比较( ± s，n=3)

产地 品种 采收期 总生物碱/% 水苏碱/%新疆布尔津县益母草 花初期(6月中)2．42 ±0．07 1．58 ±0．06新疆哈巴河县白花益母草 花初期(6 月中)1．63 ±0．04 0．91 ±0．02新疆伊宁县 益母草 花初期(6月中)0．88±0．09 0．34±0．04新疆霍城县 白花益母草 花初期(6月中)1．47±0．03 0．79±0．03新疆福海县 益母草 花初期(6月中)1．11±0．05 0．56±0．02新疆富蕴县 细叶益母草 花初期(6月中)1．26±0．09 0．62±0．03新疆青河县 细叶益母草 花初期(6月中)1．39±0．07 0．68±0．02广州清平 益母草 花初期(干品) 0．95±0．03 0．49±0．02广西玉林 益母草 花初期(干品) 0．71±0．02 0．33±0．01安徽亳州 益母草 花初期(干品) 1．51±0．02 0．64±0．02河北安国 益母草 花初期(干品) 1．77±0．04 0．81±0．03浙江磐安 益母草 花初期(干品) 1．42±0．02 0．63±0．03黑龙江鸡西 益母草 花初期(干品)1．66 ±0．04 0．74 ±0．03

1．6 不同采收期益母草生物碱的比较

为了考察不同采收期对益母草生物碱的影响，本研究以采自新疆布尔津县的益母草为考察对象，分别于盛叶期、花初期、花盛期、果初期、果熟期采集样品，按照上述测定方法进行总生物碱及盐酸水苏碱的测定，结果见表2。

1．7 不同部位益母草生物碱的比较

为了考察益母草中生物碱的分布情况，本研究对花初期、花盛期、果熟期的益母草，对茎、叶、花序、果实等部位进行了总生物碱及盐酸水苏碱的测定，结果见表3。

表2 不同采收期益母草生物碱比较( ± s，n=3)

表2 不同采收期益母草生物碱比较( ± s，n=3)

产地 品种 采收期 总生物碱/%水苏碱/%新疆布尔津县 益母草全草盛叶期(6月初)2．73 ±0．06 1．84 ±0．08花初期(6 月中)2．42 ±0．07 1．58 ±0．06花盛期(6 月底)1．71 ±0．05 0．93 ±0．02果初期(7 月中)1．15 ±0．03 0．67 ±0．02果熟期(7月底)0．59 ±0．03 0．33 ±0．02

表3 不同部位益母草生物碱比较( ± s，n=3)

表3 不同部位益母草生物碱比较( ± s，n=3)

产地 物候期(采收期)部位 总生物碱/% 水苏碱/%新疆布尔津县 花初期(6月中) 茎0．67 ±0．02 0．23 ±0．01叶 5．84 ±0．08 2．68 ±0．05花序 3．07 ±0．06 1．74 ±0．04花盛期(6月底) 茎 0．43±0．02 0．11±0．01叶 3．23 ±0．05 1．47 ±0．04花序 2．17 ±0．04 0．93 ±0．07果熟期(7月底) 茎 0．18±0．01 痕量叶 1．97 ±0．03 0．86 ±0．02果穗0．41 ±0．02 0．17 ±0．01

2 结果及讨论

2．1 表1表明，不同产地野生益母草中含生物碱量差异较大。可见，产地对益母草药材质量影响较大，提示在挑选益母草药材时应尽量考虑这一因素。由于条件所限，本研究仅能够对新疆省内部分地区的野生益母草进行跟踪采集，无法对其他省市的益母草样品进行客观评价。

2．2 比较我国几个主要药材市场销售的益母草质量，发现生物碱含有量高低顺序为:河北安国药材市场＞黑龙江鸡西药材市场＞安徽亳州药材市场＞浙江磐安药材市场＞广州清平药材市场＞广西玉林药材市场，其中后二者盐酸水苏碱的量均低于药典标准。与本研究所采集的新鲜益母草相比，购于药材市场的益母草生物碱量明显偏低，可能与益母草药材的储存时间有较大关系，有待进一步研究。

2．3 表1显示新疆地区的益母草品种较为多样，并对同一生长期采集的不同品种益母草样品进行分析，发现益母草含有量最高，细叶益母草次之，白花益母草最低且均低于药典标准。可见，品种对益母草中生物碱含有量的影响也比较大，药材种植及采收时应予以足够重视。

2．4 表2结果表明，不同采收期益母草的生物碱差别较大，以盛叶期与花初期的含有量最高，且随着益母草的继续生长，生物碱量逐渐下降，至果熟期时其生物碱量仅为花初期的1/5。提示各地在采收益母草药材时，应在花初期时进行采收，即茎叶生长旺盛，花刚开放的时候。

2．5 表3结果表明，不同部位益母草生物碱含有量差别较大。其中，花初期时，以叶中生物碱最高，花序次之，茎最低;至花盛期时，各个部位的生物碱均明显降低，但仍以叶最高;至果熟期时，各个部位的生物碱降低更为明显，茎中生物碱甚至难以检测到。提示益母草药材以叶多、花序多为佳，个大茎粗并不代表其品质好。

2．6 表3中益母草的叶和花序的生物碱含有量相对较高，经分析，益母草叶质量占全草的35%左右，花序为5%左右，而益母草的茎占60%左右，但由于其生物碱含有量相对较低，故表2中全草中的生物碱量也相对较低。这也提示益母草的最佳采收期应在盛叶期至花初期。

［1］阮金兰，杜俊蓉，曾庆忠，等．益母草的化学、药理和临床研究进展［J］．中草药，2003，34(11):15-19．

［2］楼之岑，沈 圆．益母草的生药学研究［J］．药学学报，1954，2(2):129-138．

［3］可 燕，车生泉．不同产地益母草总生物碱含量的比较［J］．中草药，1999，30(4):270-271．

［4］范美华，王健鑫，李 鹏，等．益母草的研究进展［J］．中药药物与临床，2006，6(7):528．

［5］张 娴，彭国平．益母草属化学成分研究进展［J］．天然产物研究与开发，2003，15(2):162．

［6］金 阳．法测定复方益母草颗粒中盐酸水苏碱的含量［J］．现代中药研究与实践，2005，19(6):53．

［7］国家药典委员会．中国药典:2010年版一部［S］．北京:中国医药科技出版社，2010:272．

［8］徐履琴．用硫代氰酸铬铵剩余比色法测定益母草中生物碱［J］．中草药，1985(11):7-8．

［9］卢日刚．分光光度法测定益母草冲剂中生物碱的含量［J］．药学学报，1986，21(9):522-524．

［10］周世玉，徐智明．薄层扫描法测定益母草膏中盐酸水苏碱的含量［J］．华西药学杂志，1999，14(5-6):395-396．

［11］杨雪萍，何召允．HPLC法测定安宫止血颗粒中盐酸水苏碱的含量［J］．江西中医药，2007，38(2):51．

［12］严优芍，李卫民，高 英，等．HPLC法测定益母草不同制剂中水苏碱［J］．中草药，2006，37(1):70-72．