桂枝解郁胶囊抗抑郁作用的药理实验研究

2011-05-26龚梦鹃唐春萍杨超燕

中成药 2011年7期

关键词：解郁糖水桂枝

龚梦鹃，何伟，唐春萍，杨超燕

（广东药学院，广东广州， 510006）

桂枝解郁胶囊抗抑郁作用的药理实验研究

龚梦鹃，何伟，唐春萍*，杨超燕

（广东药学院，广东广州， 510006）

目的研究桂枝解郁胶囊（桂枝、巴戟天、甘草等）的抗抑郁作用。方法将60只大鼠，随机分为6组，每组10只，采用慢性不可预知温和应激刺激6周建立抑郁大鼠模型。桂枝解郁胶囊高剂量组、桂枝解郁胶囊低剂量组（分别给予桂枝解郁胶囊6.4 g生药/kg、1.6 g生药/kg，每天1次，连续6周）、氟西汀组（20 mg/kg），空白对照组、模型组（分别给予等体积生理盐水），除空白对照组不给予任何刺激并正常饲养外，其余各组均单笼饲养。以体质量观察、糖水消耗实验、敞箱实验以及强迫游泳试验作为综合指标，选取不同时间考察桂枝解郁胶囊对抑郁大鼠模型的影响。结果实验第六周，

桂枝解郁胶囊；抗抑郁；糖水消耗实验；敞箱实验；强迫游泳实验；大鼠

抑郁症是一种以情感病变为主要症状的精神性疾病，是以心境低落、思维迟钝、语言行动减少为主要特征的综合征，严重者伴有自杀倾向。目前，国内外在抗抑郁药物的研制与开发方面逐渐重视传统药物和天然药物。桂枝解郁胶囊由桂枝、巴戟天、甘草等药物组成，是应用多年的临床经验方，用于中、轻度抑郁症的治疗和重度抑郁症的辅助治疗，疗效确切。本实验旨在通过复制慢性应激抑郁大鼠模型，探讨桂枝解郁胶囊的抗抑郁样作用。

1 材料与方法

1.1 药品

桂枝解郁胶囊，由广东药学院药物研究所提供，将桂枝、巴戟天、甘草等药物用蒸馏水回流提取2次，每次1 h，第1次加入10倍量的蒸馏水，第2次加入8倍量的蒸馏水，合并滤液，过滤，滤液减压浓缩，将浸膏真空干燥，粉碎，过筛，混匀，湿法制粒，低温干燥，装入胶囊，制成1 000粒。

阳性药物盐酸氟西汀（百忧解）（礼来苏州制药有限公司生产），批号A070884。

1.2 动物

SD成年健康大鼠，雌雄各半，体质量180～200 g，由广东省实验动物中心提供，合格证号：SCXK（粤）2003-0002。

1.3 主要仪器

游泳模型装置：玻璃水缸高30 cm，直径14 cm（水深20 cm，水温25℃）；电子温度计；计时器。

1.4 实验方法

1.4.1 分组与给药方法选用SD成年健康大鼠，体质量180～200 g，在正常饮食，自然光照，光暗周期为12 h，室温（28±1）℃，安静环境下饲养，使之适应环境3 d。在安静房间内进行敞箱试验（open field test）进行行为学评分，从合格者（50＜水平运动得分＜220）中挑选得分水平接近的。随机分为6组，每组10只，即空白对照组、模型组、桂枝解郁胶囊高剂量组、桂枝解郁胶囊低剂量组、氟西汀组。除空白对照组不给予任何刺激并正常饲养外，模型组、桂枝解郁胶囊高、低剂量组、氟西汀组动物均单笼饲养，每天分别灌胃给予生理盐水、6.4 g 生药/kg、1.6 g生药/kg桂枝解郁胶囊、氟西汀20 mg/kg，同时给予刺激（刺激因素见1.4.2项）建立抑郁模型。在实验前、实验第2周、第4周、第6周进行体质量、行为表现、糖水消耗测定，并在第6周进行强迫游泳实验。

1.4.2 抑郁大鼠模型的建立参照文献［1-3］建立模型，并稍加改进。各组大鼠给予不可预见慢性应激性刺激，每天一种，刺激因素包括单笼饲养、禁食24 h、禁水（空瓶）24 h、2 h行为限制、湿笼、摇晃5 min（恒温水浴床，转速 160 r/min，5 min）、2 h明暗颠倒、持续灯亮24 h、4℃冰水中游泳5 min；空白对照组正常饮食，不给予任何刺激。

单笼饲养：每只SD大鼠用小鼠笼饲养，笼盖加压重物；禁食24 h：剥夺食物，只提供饮用水，计时24 h；禁水（空瓶）24 h：提供食物，水瓶不装饮用水，以空水瓶放置，计时24 h；2 h行为限制：把大鼠放进大鼠注射笼中，计时2 h；湿笼：把大鼠的垫料用水弄湿透，以垫料刚好全湿但不致过多的水渗出为度；摇晃5 min：把大鼠连鼠笼固定在恒温水浴床上（转速160 r/min），连续摇晃5 min；2 h明暗颠倒：把大鼠连鼠笼放进密闭的柜子里，计时2 h；持续灯亮：在接近傍晚，但天仍光亮时，把大鼠放进独立的房间里，把房间里的灯全都打开，亮度以接近白天的光亮度为宜，计时12 h；4℃冰水中游泳5 min：将大鼠放入玻璃水缸中，水温4℃，计时5 min，出水时用干布擦干身体以免体温过冷导致死亡；每天给予刺激一至两种，平均每种刺激被采用5次，同种刺激因素不能连续进行，使动物不能预料刺激的发生［4］。

1.4.3 体质量观察每日8∶00～12∶00进行灌胃，下午4∶00给等量食物，观察体质量变化。

1.4.4 糖水消耗实验试验前，在隔噪音、安静的房间内，训练动物适应含糖饮水，每笼同时放置2个水瓶，第1个24 h，两瓶均装有1%蔗糖水，随后的24 h，一个瓶装1%糖水，一个瓶装纯水。2 h的禁食禁水后进行动物的基础糖水/纯水消耗试验，同时给予每只大鼠事先定量并称量好的两瓶水：一瓶1%糖水，一瓶纯水。60 min后，取走两瓶并称定质量。计算动物的糖水消耗%=糖水消耗/总液体消耗×100%［1］。

1.4.5 敞箱实验敞箱装置由硬纸皮制成，底面为100 cm×100 cm的正方形，并用不脱色笔划分为10×10个面积相等的方格，装置高40 cm。在8∶00～18∶00之间的安静房间内进行此项试验观察。实验时将大鼠置于中心方格内，让其适应环境2 min，然后累计大鼠在5 min内穿越的格数（三爪以上进入方格内方可记为1分）为水平运动得分（crossing）；直立次数（两爪离开底面为标志，无论动物站立多长时间直至放下两爪方可记为1分），为垂直运动得分（rearing）［5］。

1.4.6 强迫游泳实验实验第6周，将大鼠放入高30 cm，直径14 cm，水深20 cm的圆柱形玻璃标本缸中，水温25℃。游泳时大鼠为克服不正常的感觉而在水中挣扎，但挣扎一定时间后，出现间断性“不动”，表现为在水中停止挣扎、呈漂浮状态，或仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面，显示失望状态。实验时，先让大鼠在缸中游泳适应2 min，然后累计5 min内大鼠的不动时间（motionless time，MT）［6］。

1.5 统计方法

2 结果

2.1 应激前动物的体质量、行为表现及糖水消耗

各组动物在造模前各项指标测量相近，组间比较用统计学检验无显著性差异。结果见表1。

表1 应激前动物的体质量、行为表现及糖水消耗的比较（n=10，±s）Tab.1 Comparison of bodyweight，scores in open field test，sucrose consumption in rats before stress（n=10，±s）

组别体质量/g 水平运动得分垂直运动得分糖水消耗/%空白对照组 199.06 ±8.95 126.00 ±35.37 34.88 ±3.89 62.53 ±13.59模型组 198.94 ±8.40 121.63 ±30.46 34.00 ±6.23 57.96 ±23.18桂枝解郁胶囊高剂量组 197.90 ±9.71 118.90 ±31.67 34.00 ±9.07 61.32 ±18.19桂枝解郁胶囊低剂量组 198.45 ±9.62 125.50 ±42.90 34.50 ±11.25 60.46 ±16.70盐酸氟西汀组 196.90 ±10.71 121.90 ±21.89 34.68 ±8.89 61.62±17.38

2.2 第2周桂枝解郁胶囊对体质量、行为表现及糖水消耗的影响

如表2所示：第2周，与空白对照组比较，模型组的体质量、水平和垂直运动得分均有显著性下降，但糖水消耗%较2周前有所下降，还未出现显著性差异，表明此时模型组大鼠对幸福事件的反应能力尚未消失。桂枝解郁胶囊高剂量组可改善模型组动物的体质量，水平和垂直运动得分，但对糖水消耗无影响。

表2 第2周桂枝解郁胶囊对体质量、行为表现及糖水消耗的影响（n=10，±s）Tab.2 Effect of Guizhi Jieyu Capsules on bodyweight，scores in open field test，sucrose consumption in rats in the 2nd week（n=10，±s）

注：与模型组相比，＊＊＊P ＜0.001，＊＊P ＜0.01，*P ＜0.05。＊＊＊P ＜0.001，＊＊P ＜0.01，*P ＜0.05 vs model group.

组别体质量/g 水平运动得分垂直运动得分糖水消耗/%空白对照组 216.75±8.09＊＊＊ 129.75±27.57＊＊ 39.00±5.20＊＊＊62.29 ±11.54模型组 194.93 ±9.19 73.00 ±35.86 16.25 ±5.61 56.76 ±23.02桂枝解郁胶囊高剂量组 206.45±7.90＊＊ 119.60±24.38＊＊ 23.00±6.40* 60.28±14.62桂枝解郁胶囊低剂量组 196.25 ±8.49 77.00 ±54.47 17.20 ±7.57 58.76 ±16.85盐酸氟西汀组 212.45±8.81＊＊ 120.60±34.21＊＊ 23.20±6.60*64.12 ±10.46

2.3 第4周桂枝解郁胶囊对体质量、行为表现及糖水消耗的影响

给予刺激4周后，模型组大鼠的糖水消耗%在逐渐下降，但与空白组比较，仍未有显著性差异，表明模型组大鼠还未出现快感消失。从体质量观察和水平运动得分值可看出，桂枝解郁胶囊高剂量组明显高于模型组，但对糖水消耗无影响，见表3。

表3 第4周桂枝解郁胶囊对体质量、行为表现及糖水消耗的影响（n=10，±s）Tab.3 Effect of Guizhi Jieyu Capsules on bodyweight，scores in open field test，sucrose consumption in rats in the 4th week（n=10，±s）

注：与模型组相比，＊＊＊P ＜0.001，＊＊P ＜0.01，*P ＜0.05。＊＊＊P ＜0.001，＊＊P ＜0.01，*P ＜0.05 vs model group.

组别体质量/g 水平运动得分垂直运动得分糖水消耗/%空白对照组 240.13±7.62＊＊＊ 127.63±30.04＊＊ 37.38±4.27＊＊＊61.61 ±10.54模型组 191.32 ±4.87 71.38 ±91.47 11.00 ±8.52 53.76 ±12.55桂枝解郁胶囊高剂量组 219.90±6.98＊＊＊ 134.30±29.39* 18.30±5.44* 59.93±14.08桂枝解郁胶囊低剂量组 199.45 ±3.65 69.10 ±53.50 9.50 ±8.83 57.58 ±13.39盐酸氟西汀组 220.12 ±10.18＊＊＊ 122.21 ±23.41* 17.86 ±6.14*60.41 ±7.99

2.4 第6周桂枝解郁胶囊对体质量、行为表现及糖水消耗的影响

给予刺激6周后，在体质量观察、行为学及糖水消耗实验中，模型组与对照组比较均有显著性差异，提示抑郁模型建立的成功。给药组与模型组相比也有差异，桂枝解郁胶囊高、低剂量组均可明显增加模型大鼠的体质量，增加水平和垂直运动得分，提高糖水消耗，表明桂枝解郁胶囊有明显的抗抑郁作用，结果见表4。

表4 第6周桂枝解郁胶囊对体质量、行为表现及糖水消耗的影响（n=10，±s）Tab.4 Effect of Guizhi Jieyu Capsules on bodyweight，scores in open field test，sucrose consumption in rats in the 6th week（n=10，±s）

注：与模型组相比，＊＊＊P ＜0.001，*P ＜0.05。＊＊＊P ＜0.001，*P ＜0.05 vs model group.

组别体质量/g 水平运动得分垂直运动得分糖水消耗/%空白对照组 276.50±8.34＊＊＊ 129.25±34.39＊＊＊ 37.63±4.87＊＊＊ 63.13±11.03*模型组 181.19 ±2.37 13.63 ±23.04 3.00 ±2.96 50.22 ±17.30桂枝解郁胶囊高剂量组 235.59±8.54＊＊＊ 79.60±35.32＊＊＊ 14.50±5.00＊＊＊ 62.36±8.01*桂枝解郁胶囊低剂量组 191.20 ±5.50* 49.30 ±16.85* 7.80 ±6.35* 60.90 ±15.72*盐酸氟西汀组 264.59±7.61＊＊＊ 82.31±23.54＊＊＊ 15.67±4.67＊＊＊ 65.78±9.91*

2.5 桂枝解郁胶囊对大鼠强迫游泳不动时间的影响

与空白组比较，模型组大鼠的不动时间明显增加（P＜0.01）。与抑郁模型组对比，桂枝解郁胶囊高、低剂量组均能明显缩短不动时间（P＜0.05），说明桂枝解郁胶囊有显著的抗抑郁作用，结果见表5。

表5 桂枝解郁胶囊对大鼠强迫游泳不动时间的影响（n=10，±s）Tab.5 Effect of Guizhi Jieyu Capsules on motionless time in forced swimming test in rats（n=10，±s）

注：与模型组相比，＊＊P ＜0.01，*P ＜0.05。＊＊P ＜0.01，*P ＜0.05 vs model group.

组别不动时间/s空白对照组 39.63 ±11.08＊＊模型组 64.50 ±15.51桂枝解郁胶囊高剂量组 42.10 ±20.38*桂枝解郁胶囊低剂量组 47.70 ±20.58*盐酸氟西汀组 38.98 ±17.64＊＊

3 讨论

目前认为慢性、长期的日常压力是引发抑郁症的主要原因。大量的研究证实，建立理想动物模型对探明抑郁症病因、病理过程，以及研究有效治疗药物极为重要。本实验在建立抑郁大鼠模型上综合采用了慢性不可预知温和应激刺激（chronic unpredictable mild stress，CUMS）：使动物长时间地接受温和应激刺激，比较现实地模拟人们在日常生活中所遇到的“困难”［7］。在CUMS中，应激刺激的多变性和不可预测性是模型制造成功的关键。所以结合实验室的条件，选用单笼饲养、禁食24 h、禁水（空瓶）24 h、2 h行为限制、湿笼、摇晃5 min（恒温水浴床，转速160 r/min，5 min）、2 h明暗颠倒、持续灯亮24 h、4℃冰水中游泳5 min共9种刺激因素。在经过长期温和应激刺激之后蔗糖水饮用量的减少反映了内源性的中心症状——快感缺失（anhedonia）［8-9］。本实验利用长期不可预见性的刺激，造成分养动物抑郁状态，动物表现出来的抑郁状态、兴趣丧失、快感缺乏与抑郁症临床诊断中的精神运动改变兴趣或快感的丧失有一定程度的相似性，提示本模型是较理想的抑郁症动物模型［10］。本模型还模拟出了抑郁症的症状表现，如运动能力，探索行为能力下降等。抑郁动物在行为上表现为在规定时间内的水平运动和垂直运动次数均减少。水平运动减少反映了动物的活动度降低，垂直运动减少反映了动物对新鲜环境的好奇程度降低。桂枝解郁胶囊能增加CUMS大鼠的体质量、水平和垂直运动得分，提高糖水消耗百分率，具有明显的抗抑郁作用。

强迫游泳模型是一种较常用的抗抑郁剂筛选评价模型，大鼠被迫在一个局限的空间游泳，它们首先挣扎试图逃跑，经过努力后便处于一种不动状态，这种不动状态被认为是行为绝望（behavioral despair），是一种类似于抑郁症的绝望状态。玻璃缸内的水深是影响大鼠强迫游泳的重要因素，水深标准是使大鼠后肢伸直刚好能触到缸底但不足以支撑身体，针对大鼠的体质量，本实验选择的水深为20 cm。在实验过程中发现，模型组经过短时间的挣扎后便浮于水面保持不动，给药组试图寻找出路，攀壁、上跃和潜入水底运动时间较长，这种差异是由于不同剂量的药物不同程度地提高了动物的情绪，从而增强了动机行为，缩短了强迫游泳的不动时间。从实验结果中可看出，与模型组比较，桂枝解郁胶囊可明显缩短动物的不动时间，再次表明桂枝解郁胶囊有显著的抗抑郁作用，为其进一步开发提供理论支持。

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Anti-depressant effect of Guizhi Jieyu Capsules

GONG Meng-juan， HE Wei， TANG Chun-ping， YANG Chao-yan
（Guangdong College of Pharmacy，Guangzhou 510006，China）

AIMTo evaluate the anti-depressant effect of Guizhi Jieyu Capsules（Ramulus Cinnamomi，Morindae Officinalis Radix，Glycyrrhizae Radix，et al）on rat model of chronic unpredictable mild stress.METHODS

Sixty rats were divided randomly into five groups：two treatment groups（giving Guizhi Jieyu Capsules for oral treatment for 6 weeks，6.4 g/kg and 1.6 g/kg once a day），Fluoxetine group（giving Fluoxetine for oral treatment），model and control group.On the base of establishing depressed rat model，the weight of rats was recorded and the behavior of rats was observed with open field test，sucrose consumption test and forced swimming test.RESULTSThe rat model of depression was established successfully in the 6th week.In Guizhi Jieyu Capsules treated group，the weight increased from 181.19 g to 235.59 g，the horizontal scores of open field test was boosted from 13.63 to 79.60，the vertical scores from 3.00 to 14.50 and consumption of sugar water rose from 50.22%to 62.36%，they were significantly higher than those in the depression group.But the immobility time in forced swimming test was significantly lower than that in depression group from 64.50 s to 42.10 s.CONCLUSIONGuizhi Jieyu Capsules can prevent rat from the abnormal behavior of the depression.

Guizhi Jieyu Capsules；anti-depressant；sucrose consumption test；open field test；forced swimming test；rat

R285.5

1001-1528（2011）07-1121-05

2010-07-05

广东省中医药管理局项目（2007153）

龚梦鹃（1983—），女，讲师，硕士，研究方向：神经药理学。Tel：13527769816，E-mail：gongmengjuan@yahoo.com.cn

*通信作者：唐春萍（1966—），女，教授，研究方向：中药复方药效学评价。E-mail：tcp@163.com抑郁大鼠造模成功，且桂枝解郁胶囊可改善抑郁大鼠的体质量（由181.19 g增加至235.59 g）、增加水平运动得分（由13.63分增加至79.60分）和垂直运动得分（由3.00分增加至14.50分），增加糖水消耗（由50.22%上升为62.36%）及缩短强迫游泳的不动时间（由64.50 s下降为42.10 s）。结论桂枝解郁胶囊具有明显的抗抑郁作用。