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白藜芦醇苷对大鼠心室肌细胞L-型钙电流的抑制作用

2011-02-11周京京张利萍

中国药理学通报 2011年10期
关键词:肌细胞钙通道动作电位

魏 燕,周京京,张利萍,李 茜,杨 晶,张 翼

(河北医科大学生理学教研室,河北石家庄050017)

研究表明,白藜芦醇苷(Polydatin)可对抗大鼠心肌缺血/再灌所致心脏功能损伤和细胞凋亡,以及抗心律失常[1]。其心脏保护作用与心肌细胞ATP敏感钾通道开放、Bcl-2蛋白表达增加和 Bax蛋白表达减少、NO含量增加有关[2-3]。我们近来的电生理学研究显示,Polydatin可缩短大鼠乳头肌动作电位复极化过程,并可抑制部分去极化乳头肌动作电位,其作用与心肌细胞ATP敏感钾通道激活和L型钙通道抑制有关[4]。本研究旨在应用全细胞膜片钳方法探讨Polydatin对大鼠心室肌细胞L型Ca2+电流(ICa-L)及其通道动力学的影响。

1 材料与方法

1.1 心室肌细胞的分离 成年♂SD大鼠,通过Langendorff离体心脏灌流及酶分解法得到单个心室肌细胞。细胞于KB液中保存备用[5]。

1.2 ICa-L的记录 细胞置于倒置显微镜工作台浴槽内,给予恒温、恒速灌流液灌流。经微操纵器,使玻璃微电极与细胞形成高阻抗封接和全细胞记录模式。采用电压钳方式、通过运行Pclamp程序完成电流的激发和采集。观察不同浓度Polydatin对ICa-L的作用。通过不同的刺激方式[6],观察Polydatin对L型Ca2+通道电流-电压关系、激活过程、失活过程以及失活后恢复过程的影响。

1.3 药品及溶液 Polydatin购自 Neptunus Pharmaceutical Co.Ltd(Shenzhen,China)。细胞外液(mmol·L-1):TEACl 140,MgCl22.0,CaCl21.5,Glucose 10,HEPES 10,TTX 0.01,用TEA-OH调pH值至7.3~7.4并以纯氧饱和。电极内液(mmol·L-1):Mg-ATP 3,CsCl 140,HEPES 10,EGTA 10,用CsOH 调pH值至7.2。

2 结果

2.1 Polydatin对峰值ICa-L的影响 Polydatin可浓度依赖性的降低 ICa-L电流密度。在 Polydatin 25、50、75和100 μmol·L-1浓度下,ICa-L峰值电流密度降低分别达17%、32%、41%和53%(P<0.05)。

2.2 Polydatin对ICa-L电流-电压关系的影响 Polydatin

可浓度依赖性导致ICa-L关系曲线上移,而其关系无明显变化。

2.3 Polydatin对ICa-L激活、失活以及失活后恢复动力学的影响 Polydatin对ICa-L激活曲线无影响。Polydatin(50μmol·L-1)使ICa-L失活曲线向负电压方向移位,稳态半激活电压(V1/2)负值增加(-7 mV),斜率因子(S)增大(P<0.05,Tab 1)。Polydatin对失活后恢复曲线无影响。

Tab 1 Effect of Polydatin on activation kinetics and inactivation kinetics of L type Ca2+channel in rat ventricular myocytes(±s,n=6)

*P <0.05 vs 0 μmol·L-1

S/mV 0 μmol·L -1 Polydatin concentration Activation V1/2/mV S/mV Inactivation V1/2/mV-16.7 ±4.7 5.6 ±0.6 -22.6 ±0.9 4.0 ±0.4 50 μmol·L-1 -19.3 ±4.4 5.6 ±0.9 -30.2 ±2.6*4.8 ±0.1*

3 讨论

本研究采用全细胞膜片钳探讨Polydatin对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响,结果再次证实,Polydatin可浓度依赖性地降低ICa-L,使ICa-L关系曲线逐渐上移。进一步通道动力学结果表明,Polydatin对ICa-L激活过程无影响,可使失活过程向负电压方向移位,即失活过程加快,而对ICa-L失活后恢复过程无影响。结果提示,Polydatin对L型钙通道的抑制与加快通道失活有关。

L型钙通道电流是构成心室肌工作肌细胞动作电位平台期的基础,决定平台期的长短和动作电位时程。L型钙通道电流参与心脏窦房结自律细胞动作电位去极化和4期自动去极化的形成,是决定心肌自律性的一个重要因素[7]。病理情况下,多种心律失常如早后除极化和晚后除极化的发生均与L型钙电流的异常活动有关。我们以往研究显示Polydatin具有抗缺血/再灌注心律失常作用。本研究发现,Polydatin通过加快L型钙通道的失活过程而抑制L型钙电流。此作用可能是Polydatin抗心律失常的电生理学机制之一。

本研究根据Polydatin抑制L型钙通道电流的结果,可推断Polydatin可通过阻断L型钙通道,抑制缺血/再灌注心肌细胞的外钙内流和减轻心肌内钙释放,从而减轻钙超载,对抗心肌缺血/再灌注损伤。

[1] Zhang L P,Yang C Y,Wang Y P,et al.Protective effect of polydatin against ischemia/reperfusion injury in rat heart[J].Acta Physiol Sin,2008,60(2):161-8.

[2] Zhang L P,Yang C Y,Wang Y P,et al.ATP-sensitive potassium channel and mitochondrial permeability transition pore involved in cadioprotection of polydatin[J].Chin J Phamacol Toxicol,2009,23(2):81-8.

[3] Zhang L P,Ma H J,Bu H M,et al.Polydatin attenuates ischemia/reperfusion-induced apoptosis in myocardium of rat[J].Acta Physiol Sin,2009,61(4):367 -72.

[4] Zhang L P,Wei Y,Song S L,et al.Effect of polydatin on action potential in ventricular papillary muscle of rat and the underlying ionic mechanism[J].Acta Physiol Sin,2011,63(1):48 -54.

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[5] Liu A H,Zhang Z X.Effect of GBE50 on L type calcium current and cytosolic[Ca2+]iin ischemic guinea pig ventricular myocytes[J].Chin Pharmacol Bull,2010,26(3):329 -33.

[6] 张广钦,郝雪梅,陈世忠,等.芍药苷对大鼠心肌细胞L钙通道的阻断作用[J].中国药理学通报,2003,19(8):863-6.

[6] Zhang G Q,Hao X M,Chen S Z,et al.Blockade of paeoniflorin on L-type calcium channel in isolated rat ventricular myocytes[J].Chin Pharmacol Bull,2003,19(8):863 -6.

[7] McGeown J G.Master Medicine:Physiology[M].3 ed.Singapore city:Elsevier(Sigapore)Pte Ltd,2007:61 -4.

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