龚庆芳,张玉梅,谭宁华,陈作红＊

1湖南师范大学生命科学学院,长沙 410081; 2中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室,昆明 650204

三种毒菌的化学成分研究

龚庆芳1,张玉梅2,谭宁华2,陈作红1＊

1湖南师范大学生命科学学院,长沙 410081;2中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室,昆明 650204

本文对三种毒菌的化学成分进行了研究。从光盖伞 (Psilocybe spp)分离鉴定了 4个化合物,经波谱分析鉴定为:(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β-十八烷酸酯 (1)、β-胡萝卜苷 (2)、(22E,24R)-5α,6α-环氧麦角甾-8, 22-二烯-3β,7α-二醇(3)、色氨酸 (4);从假褐云斑鹅膏 (Am anita pseudoporphyria)分离鉴定了 4个化合物:(22E, 24R)-3β-羟基-5α,8α-过氧化麦角甾-6,22-二烯 (5)、(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇 (6)、1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E,8E,2′R)-2-N-(2′-羟基棕榈酰)-9-甲基-4,8-脱氢鞘氨醇(7)、1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E,8E,2′R)-2-N-(2′-羟基十八烷酰)-9-甲基-4,8-脱氢鞘氨醇 (8);大青褶伞 (Chlorophyllum m olybdites)发酵菌丝体分离鉴定了 4个化合物:5、6、(22E,24R)-5α,6α-环氧麦角甾-8(14),22-二烯-3β,7α-二醇 (9)、(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β-醇 (10)。除化合物 9外其它化合物均为首次从以上相应毒菌中分离得到。

光盖伞;假褐云斑鹅膏;大青褶伞;化学成分

自然界的有毒菌种类繁多,全球估计达1000种以上,我国的毒蘑菇 (包括怀疑有毒的)多达 421种,隶属于 39科 112属[1]。我国对毒蘑菇的化学成分研究甚少,开展毒菌的化学成分研究,对开发新药和保障食用菌安全具有深远的意义。本文对三种未见化学成分报道的毒菌:光盖伞 (Psilocybe spp),假褐云斑鹅膏 (Am anita pseudoporphyria)和大青褶伞(Chlorophyllum m olybdites)发酵菌丝体的化学成分进行了研究。从光盖伞分离鉴定了 4个化合物,经波谱分析鉴定为:(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β-十八烷酸酯 (1)、β-胡萝卜苷 (2)、(22E,24R)-5α,6α-环氧麦角甾-8,22-二烯-3β,7α-二醇 (3)、色氨酸(4)。从假褐云斑鹅膏分离鉴定了 4个化合物:(22E,24R)-3β-羟基-5α,8α-过氧化麦角甾-6, 22-二烯 (5)、(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β,5α, 6β-三醇 (6)、1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E, 8E,2′R)-2-N-(2′-羟基棕榈酰)-9-甲基-4,8-脱氢鞘氨醇(7)、1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E,8E, 2′R)-2-N-(2′-羟基十八烷酰)-9-甲基-4,8-脱氢鞘氨醇(8)。日本学者 Kazuko Yoshikawa曾对大青褶伞子实体的化学成分进行了研究,得到了 2个新甾醇类化合物 (22E,24R)-3α-ureido-ergosta-4,6,8(14), 22-tetraene和 (22E,24R)-5α,8α-epidioxyergosta-6, 9,22-triene-3-O-β-D-glucopyranoside[2],但其发酵菌丝体的化学成分未见报道。本文从大青褶伞发酵菌丝体分离鉴定了 4个甾醇类化合物:5、6、(22E, 24R)-5α,6α-环氧麦角甾-8(14),22-二烯-3β,7α-二醇 (9)、(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β-醇 (10)。除化合物 9外其它化合物均为首次从以上相应毒菌中分离得到。

图 1 化合物 1～10的结构Fig.1 Structures of compounds 1-10

1 实验部分

1.1 仪器与材料

VGAuto Spec-3000型质谱仪(美国Beckman公司);Bruker AM-400和 DRX-500核磁共振仪 ((瑞士Bruker公司),T MS为内标;柱色谱硅胶 (200～300目)和硅胶 H及薄层色谱硅胶 GF254(青岛海洋化工厂);Sephadex LH-20(Pharmacia公司);Agilent 1100高效液相色谱仪 (美国 Agilent公司)。所用试剂为工业级,经重蒸后使用。

光盖伞子实体 2003年 6月采集于湖南望城,标本鉴定人为湖南师范大学生命科学学院张平博士,标本保存在湖南师范大学生命科学学院真菌室。

假褐云斑鹅膏 2005年采集于湖南郴州临武,由湖南师范大学生命科学学院陈作红鉴定,标本保存在湖南师范大学生命科学学院真菌室。

大青褶伞发酵菌丝体由本研究室发酵。

1.2 提取和分离

光盖伞子实体 450 g,相继用 CHCl3-MeOH(1︰ 1)和MeOH分别提取 3次,合并提取液,真空浓缩得浸膏(30 g)。将总浸膏加水混悬,用乙酸乙酯、正丁醇相继萃取,得到乙酸乙酯浸膏(18 g)、正丁醇浸膏(12 g)。将乙酸乙酯部分用 200～300目的硅胶柱层析分离,以石油醚-丙酮进行梯度洗脱,经薄层层析追踪检测,分为A-F组分。组分A经减压硅胶柱层析 (硅胶 H),以石油醚-乙酸乙酯 (19︰ 1)溶剂洗脱,分离得到化合物 1(23 mg);组分 C经硅胶柱层析,以石油醚-丙酮(6︰ 1)溶剂洗脱,分离得到化合物 3(15 mg);组分D经硅胶柱层析,以氯仿-甲醇(9︰ 1)溶剂洗脱,分离得到化合物 2(30 mg)。正丁醇部分经反相 C-18柱层析,以甲醇-水系统梯度洗脱,分离得到化合物 4(120 mg)。

假褐云斑鹅膏 300 g相继用MeOH和MeOHH2O(1︰ 1)分别提取 3次,得总浸膏 (45 g)。按照与光盖伞相类似的分离纯化方法,经硅胶、凝胶以及HPLC等柱层析,分离得化合物 5(320 mg)、6(210 mg)、7(10 mg)、8(8 mg)。

大青褶伞发酵菌丝体 250 g(由本研究室发酵)的提取方法和分离方法同光盖伞的子实体,得乙酸乙酯部分 (20 g)。按照与光盖伞相类似的分离纯化方法,经反复使用硅胶、凝胶等柱层析方法,得到化合物 5(110 mg)、6(85 mg)、9(10 mg)、10(45 mg)。

2 结构鉴定

化合物 1 C46H80O2,无色油状,易溶于氯仿。EI-MSm/z:664[M]+,382[M-C18H36O2];1H NMR (400 MHz,CDCl3)δ:4.73(1H,m,H-7),0.55(3H, s,C-18),0.81(3H,s,C-19),1.04(3H,d,J=6.5 Hz,H-21),5.26～5.17(2H,overlapped,m,H-22, 23),0.86(3H,d,J=7.4 Hz,H-26),0.90(3H,d,J =7.4 Hz,H-27),0.94(3H,d,J=6.6 Hz,H-28), 0.84(3H,s,C-18′);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ: 36.8(t,C-1),33.8(t,C-2),76.2(d,C-3),32.0(t, C-4),40.5(d,C-5),29.5(t,C-6),117.3(d,C-7), 139.5(s,C-8),49.3(d,C-9),32.5(s,C-10),21.8 (t,C-11),39.8(t,C-12),43.8(s,C-13),55.0(d,C-14),22.7(t,C-15),27.5(t,C-16),55.9(d,C-17), 12.1(q,C-18),13.0(q,C-19),40.1(d,C-20),21.1 (q,C-21),135.7(d,C-22),131.9(d,C-23),42.8 (d,C-24),34.8(d,C-25),19.6(q,C-26),19.9(q, C-27),17.6(q,C-28),173.5(s,C-1′),32.0(t,C-2′),25.1(t,C-3′),29.7～29.1(t,C-4′～17′),14.1 (q,C-18′)。以上波谱数据与文献[3]报道一致,化合物鉴定为 (22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β-十八烷酸酯。

化合物 2 C35H60O6,白色粉末,难溶于氯仿和甲醇。与标准品对照,确定为β-胡萝卜苷。

化合物 3 C28H44O3,无色结晶 (甲醇),易溶于氯仿,mp.172～173℃。EI-MSm/z:428[M]+,410 [M-H2O];1H NMR (400 MHz,CDCl3)δ:3.93 (3H,m,H-3),3.14(H,br s,H-6),4.39(H,br s, H-7),0.63(3H,s,C-18),1.27(3H,s,H-19),1.02 (3H,d,J=6.4 Hz,C-21),5.26～5.13(overlapped, H-22,23),0.84(3H,d,J=6.6 Hz,H-26),0.82 (3H,d,J=6.0 Hz,H-27),0.92(3H,d,J=5.8 Hz, H-28);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ:30.8(t,C-1),29.1(t,C-2),68.5(d,C-3),38.9(t,C-4), 63.2(s,C-5),60.1(d,C-6),66.9(d,C-7),137.0 (s,C-8),126.4(s,C-9),37.8(s,C-10),23.0(t, C-11),36.1(t,C-12),41.8(s,C-13),51.1(d,C-14),22.8(t,C-15),30.8(t,C-16),54.3(d,C-17),11.5(q,C-18),23.6(q,C-19),40.5(d,C-20),20.9(q,C-21),135.4(d,C-22),132.1(d,C-23),42.8(d,C-24),33.1(d,C-25),19.6(q,C-26),19.6(q,C-27),17.6(q,C-28)。以上波谱数据与文献[4]报道的一致,化合物鉴定为 (22E,24R)-5α,6α-环氧麦角甾-8,22-二烯-3β,7α-二醇。

化合物 4 C11H12N2O,白色结晶 (甲醇),易溶于水,mp.280～282℃。FAB+-MSm/z:205[M+ 1]+;1H NMR(500MHz,D2O)δ:7.14(H,s,H-2), 7.57(H,d,J=8.0 Hz,H-4),7.11(H,t,J=7.8 Hz,H-5),7.03(H,t,J=7.8 Hz,H-6),7.37(H,d,J =8.2 Hz,H-7),3.31(H,dd,J=15.4,4.7 Hz,Ha-10),3.13(H,dd,J=15.3,8.1 Hz,Hb-10),3.86 (H,m,H-11);13C NMR(100 MHz,D2O)δ:125.3 (d,C-2),107.8(s,C-3),118.8(d,C-4),119.8 (d,C-5),122.5(d,C-6),112.3(d,C-7),136.7 (s,C-8),127.0(s,C-9),26.8(t,C-10),55.4(d, C-11),175.0(C-12)。以上波谱数据与文献[5]报道的一致,化合物鉴定为色氨酸。

化合物 5 C28H44O3,无色结晶 (甲醇),易溶于氯仿。与标准品对照,确定为 (22E,24R)-3β-羟基-5α,8α-过氧化麦角甾-6,22-二烯。

化合物 6 C28H46O3,无色结晶 (甲醇),易溶于氯仿。与标准品对照,确定为 (22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇。

化合物 7 C41H77NO9,无定形粉末,难溶于氯仿和甲醇。FAB-MSm/z:726[M-1]-。1H NMR(500 MHz,C5D5N)δ:4.73(2H,m,overlapped,H-2,3), 5.97(2H,m,overlapped,H-4,5),5.25(br.s,H-8), 4.56(m,H-2′),4.88(1H,d,J=7.7 Hz,H-1″), 1.62(3H,s,H-19);13C NMR(125 MHz,C5D5N)δ: 70.2(t,C-1),54.6(d,C-2),72.4(d,C-3),132.4 (d,C-4),132.0(d,C-5),33.1(t,C-6),32.2(t,C-7),124.2(d,C-8),135.9(s,C-9),40.1(t,C-10), 28.4(t,C-11),29.7～30.1(t,C-12～15),28.3(t, C-16),23.0(t,C-17),14.4(q,C-18),16.2(q,19-CH3),175.8(s,C-1′),72.6(d,C-2′),35.7(t,C-3′),29.7～30.1(t,C-4′～13′),28.3(t,C-14′), 23.0(t,C-15′),14.4(q,C-16′),105.7(d,C-1″), 75.1(d,C-2″),78.5(d,C-3″),71.6(d,C-4″),78.6 (d,C-5″),62.7(t,C-6″)。以上波谱数据与文献[6]报道的一致,化合物鉴定为 1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E,8E,2′R)-2-N-(2′-羟基棕榈酰)-9-甲基-4,8-脱氢鞘氨醇。

化合物 8 C43H81NO9,无定形粉末,难溶于氯仿和甲醇。FAB-MSm/z:754[M-1]-。13C NMR(100 MHz,CD3OD)δ:69.7(t,C-1),54.5(d,C-2),72.8 (d,C-3),134.6(d,C-4),131.1(d,C-5),33.8(t,C-6),33.1(t,C-7),124.8(d,C-8),136.7(s,C-9), 40.8(t,C-10),28.7(t,C-11),30.4～30.8(t,C-12～15),29.1(t,C-16),23.7(t,C-17),14.5(q,C-18),16.2(q,19-CH3),177.1(s,C-1′),73.0(d,C-2′),35.8(t,C-3′),30.4～30.8(t,C-4′～15′),29.1 (t,C-16′),23.7(t,C-17′),14.5(q,C-18′),104.6 (d,C-1″),74.9(d,C-2″),77.9(d,C-3″),71.5(d, C-4″),77.8(d,C-5″),62.7(t,C-6″)。以上波谱数据与文献[6]报道的一致,化合物鉴定为 1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E,8E,2′R)-2-N-(2′-羟基十八烷酰)-9-甲基-4,8-脱氢鞘氨醇。

化合物 9 C28H44O3,白色粉末,易溶于氯仿, mp.124～125℃。EI-MSm/z:410[M-H2O]+,377 [M-2H2O-Me]+;1H NMR (500 MHz,CDCl3)δ: 0.61(3H,s,H-18),1.17(3H,s,H-19),1.05(3H, d,J=6.4 Hz,H-21),0.87(3H,overlapped,H-26), 0.85(3H,overlaped,H-27),0.95(3H,d,J=6.7 Hz,H-28);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ:32.2(t, C-1),31.0(t,C-2),68.5(d,C-3),39.2(t,C-4), 65.6(s,C-5),62.3(d,C-6),63.9(d,C-7),125.1 (s,C-8),38.7(d,C-9),33.0(s,C-10),19.0(t,C-11),36.5(t,C-12),41.5(s,C-13),152.6(s,C-14),24.9(t,C-15),27.2(t,C-16),56.8(d,C-17),17.6(q,C-18),16.5(q,C-19),39.5(d,C-20),21.2(q,C-21),135.2(d,C-22),132.2(d,C-23),40.8(d,C-24),33.0(d,C-25),19.6(q,C-26),19.6(q,C-27),17.6(q,C-28)。上述数据与文献[4]报道一致,故鉴定该化合物为 (22E,24R)-5α,6α-环氧麦角甾-8(14),22-二烯-3β,7α-二醇。

化合物 10 C28H46O,无色结晶 (甲醇),易溶于氯仿,mp.159～161℃。EI-MSm/z:398[M]+;1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ:3.36(1H,m,H-3),0.58 (3H,s,H-18),0.87(3H,s,H-19),0.83(3H,d,J= 8.4 Hz,H-21),5.22(2H,overlapped,H-22,23), 1.05(3H,d,J=6.5 Hz,H-26),0.95(3H,d,J= 6.5 Hz,H-27),0.87(3H,d,J=7.22 Hz,H-28);13C NMR(125 MHz,CDCl3)δ:37.1(t,C-1),31.4(t, C-2),71.0(d,C-3),37.9(t,C-4),40.2(d,C-5), 29.6(t,C-6),117.4(d,C-7),139.0(s,C-8),49.4 (d,C-9),33.9(s,C-10),21.5(t,C-11),39.4(t, C-12),43.2(s,C-13),55.1(d,C-14),22.9(t,C-15),28.1(t,C-16),55.9(d,C-17),12.1(q,C-18),13.0(q,C-19),40.5(d,C-20),21.1(q,C-21),135.7(d,C-22),131.8(d,C-23),42.8(d,C-24),33.1(d,C-25),19.6(q,C-26),19.9(q,C-27),17.6(q,C-28)。上述数据与文献[7]报道一致,故鉴定该化合物为 (22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β-醇。

致谢:MS和NMR由中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室分析测试中心测定。

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Chem ical Constituents of Three PoisonousM ushroom s

GONGQing-fang1,ZHANG Yu-mei2,TAN Ning-hua2,CHEN Zuo-hong1＊1College of L ife Science,Hunan Nor mal University,Changsha 410081,China;2State Key Laboratory of Phytochem istry and Plant Resources in W est China,Kunm ing Institute of Botany,Chinese Academ y of Sciences,Kunm ing 650204,China

Four known compoundswere isolated fromPsilocybespp,whichwere identified as(22E,24R)-octadecylergosta-7,22-dien-3β-ol(1),β-daucosterol(2),(22E,24R)-5α,6α-epoxyergosta-8,22-diene-3β,7α-diol(3),tryptophan (4).Four known compoundswere isolated fromAm anita pseudoporphyria,which were identified as(22E,24R)-5α,8αepidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol(5),(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-3β,5α,6β-triol(6),(2S,3R,4E,8E)-1-(O-β-D-glucopyranosyl)-3-hydroxy-2-[(R)-2′-hydroxypa lmitoyl]amino-9-methyl-4,8-octadecadiene(7),(2S,3R,4E,8E)-1-(O-β-D-glucopyranosyl)-3-hydroxy-2-[(R)-2′-hydroxyoctadecanoyl]amino-9-methyl-4,8-octadecadiene(8).Four known compoundswere isolated from mycelium ofChlorophyllum molybdites,which were identified as 5,6,(22E,24R)-5α,6α-epoxyergosta-8(14),22-diene-3β,7α-diol(9),(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-3β-ol(10).This is the first time that compounds 1-8 and 10 were isolated from these titled mushrooms,respectively.

Psilocybespp;Am anita pseudoporphyria;Chlorophyllum m olybdites;chemical constituents

1001-6880(2010)02-0185-04

2009-02-04 接受日期:2009-03-18

＊通讯作者 Tel:86-871-5223800;E-mail:chengzh@hunnu.edu.cn

Q946.91;R284.1

A