细胞周期蛋白D1在卵巢子宫内膜异位症中的表达及意义

2010-01-16张爱群孙富国

天津医药 2010年11期

张爱群孙富国

张爱群孙富国

子宫内膜异位症卵巢细胞周期蛋白D1 细胞周期免疫组织化学

子宫内膜异位症多发生于生育期女性，目前发病机制仍然不十分清楚。细胞周期蛋白D1（cyclinD1）是重要的细胞周期调控因子，与肿瘤的形成密切相关。本研究采用免疫组织化学的方法检测子宫内膜异位症中cyclinD1蛋白表达，分析其在卵巢子宫内膜异位症发病过程中的作用及与临床分期的关系。

1 对象与方法

1.1研究对象异位症组选自我院妇产科2006年1月—2008年1月住院行腹腔镜手术或开腹手术治疗的卵巢子宫内膜异位症患者 43例，年龄 23～45岁，平均（33.10±5.10）岁。经腹腔镜手术33例，开腹手术10例；其中异位内膜浅层浸润12例，深层浸润31例；异位囊肿<3 cm者11例,异位囊肿≥3 cm者32例。分期标准依据1985年美国生育协会（American Fertility Society）的修正分期法（revised American Fertility Society AFS-r），Ⅰ期 2例，Ⅱ期 9例，Ⅲ期 27例，Ⅳ期5例，对照组为其他妇科疾病同期来院手术者，平均年龄（36.30±5.90）岁，与异位症组比较，差异无统计学意义（t=2.198，P＞0.05）。全部患者均经组织病理学证实，术前3个月未进行过激素治疗。卵巢子宫内膜异位症患者均做HE染色挑选有典型内膜及间质的组织标本为入选患者。

1.2主要试剂链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）试剂盒、cyclinD1鼠抗人单克隆抗体均购自北京中山生物技术公司。

1.3实验方法异位症组取卵巢子宫内膜异位囊肿囊壁组织，对照组取正常子宫内膜组织，10%福尔马林固定，石蜡包埋，组织切片厚4 μm,免疫组化步骤按试剂盒说明操作。

1.4阳性结果判定标准 cyclinD1阳性产物均主要定位于细胞核上。根据着色强度及范围分为:阴性（-），无阳性染色细胞或细胞着色率＜5%；弱阳性（＋），阳性细胞数5%～25%；阳性（＋＋），阳性细胞数 26%～50%；强阳性（+++），阳性细胞数>50%，由2名有经验的病理科医师双盲读片。

1.5统计学处理所有数据经Excel数据库整理，采用SPSS 11.5软件进行统计分析。计量资料用±s表示，组间比较行t检验。2组之间阳性率比较用χ2检验。检验水准α=0.05。

2 结果

2.12组中cyclinD1阳性表达情况的比较 cyclinD1在异位症组中的表达明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表 1。

表1 2组cyclinD1阳性表达的比较（例）

2.2cyclinD1与异位症组临床病理特征的关系异位症组患者有无痛经、月经是否异常、是否不孕cyclinD1阳性例数差异均无统计学意义（P>0.05），而不同囊肿大小、异位内膜浸润深度及盆腔浸润情况的cyclinD1阳性例数差异有统计学意义（P＜0.05），见表 2。

3 讨论

cyclinD1基因定位于染色体11q13上，蛋白含295个氨基酸，是细胞周期素家族中与细胞增殖周期关系最为密切的成员，是启动细胞周期通过关键限速卡点即从G1期到S期的重要调节因子。cyclinD1与CDK4/CDK6结合后,作用于Rb蛋白,使其磷酸化为pRb,导致pRb与E2F脱离,游离的E2F可进入细胞核内，启动S期相关基因的转录，从而使细胞由G1期进入S期，促进DNA合成而发挥加速细胞增殖的正性调控作用。在生理状态下，细胞进入S期后，cyclinD迅速分解。如果cyclinD持续高表达，G1期将缩短，提前进入S期，使细胞增殖失控，最终形成肿瘤[1]。许多人类肿瘤组织中均发现染色体在11q13区域cyclinD1基因扩增和cyclinD1基因的过度表达，其表达异常与多种肿瘤的发生、发展密切相关[2]。cyclinD1过表达可使细胞G1期缩短，体积变小，降低细胞对促细胞分裂剂的依赖性[3]。如果抑制cyclinD1在G1期表达，细胞将不能进入S期。正常情况下，cyclinD1在G1期是恒定的或保持极低水平，G1期的cyclinD1过度表达可加速细胞周期进程，使细胞逃避监测点，进而发生细胞失控性增殖，与许多恶性肿瘤发生有关。本研究结果显示，cyclinD1在异位症组阳性表达率高于对照组，提示其高表达可能与疾病的发生关系密切。cyclinD1过表达主要与周期蛋白依赖性蛋白激酶（CDK）4或CDK6、CDK2结合成复合物，加快细胞通过G1检查点，具有推动细胞周期进程的作用，与异位子宫内膜的不正常生长、增殖、浸润、转移及复发等恶性生物学表现有关。本研究表明，cyclinD1的高表达可能加速了细胞周期进程，使其更快地进入S期，并使异位内膜细胞具有更强的种植及侵袭性，提示cyclinD1与异位内膜增殖、浸润关系密切，可能对判断疾病的预后有一定的价值。