陈 羽,丁利伟,齐秀兰

(沈阳药科大学高等职业技术学院,辽宁沈阳 110026)

随着人们对消毒重要性认识的逐步提高,消毒药物的使用越来越广泛,但消毒效果与选用消毒剂的种类有着密切的关系。近年来,国内外均致力于寻求高效、广谱、快速的杀菌消毒剂[1]。洗必泰具有极强的广谱抑菌、杀菌作用且毒性低,在生产中应用广泛。其主要作用机制是破坏病原微生物细胞壁原生质膜,快速杀死革兰阳性菌、阴性菌、细菌芽胞、真菌及病毒等[2]。由于洗必泰的长期使用,相随而来的是细菌对其耐药性的增加,因此单纯的洗必泰产品并不多见,一般是洗必泰的复配产品。新洁尔灭是一种季胺盐类阳离子表面活性剂,具有穿透力强、作用快、无刺激性等特点。其主要作用机制是改变菌体细胞壁的通透性,使细菌丧失摄取营养物质的能力,并抑制菌体的代谢及许多酶系统的活力[3]。新洁尔灭对许多芽胞型致病菌、革兰阳性菌及霉菌具有强大的广谱杀菌作用,但对革兰阴性杆菌及肠道病毒却作用较弱。鉴于洗必泰和新洁尔灭皆属于常用的消毒剂,但单独使用时,其消毒效果往往受到微生物的种类、温度、浓度和pH值等因素的影响。本文对洗必泰与新洁尔灭复合消毒剂的协同杀菌效果进行了考察,以便为生活中物体表面消毒寻找理想复合消毒剂提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种 金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus ATCC 6538)、大肠埃希菌(Escherichia coli 8099)、白色念珠菌(CanidiaalbicansATCC 10231)由沈阳药科大学微生物学与细胞生物学教研室提供。

1.1.2 培养基(g/L) ①营养琼脂培养基：蛋白胨10.0,牛肉膏5.0,氯化钠5.0,琼脂粉14.0;②沙堡琼脂培养基：葡萄糖40.0,蛋白胨10.0,琼脂粉14.0。

1.1.3 缓冲液(g/L) 标准硬水：氯化钙0.304,氯化镁0.139,用来配置待检消毒剂;磷酸盐缓冲液：无水磷酸氢二钠2.83,磷酸二氢钾1.36,pH 7.2;中和剂：硫代硫酸钠5.0,溶解于磷酸盐缓冲液中,起中和消毒剂的杀菌作用。

1.2 方法

1.2.1 菌悬液的制备 取5.0 mL磷酸盐缓冲液加入已经活化3代的新鲜斜面培养物试管内,反复吹吸,洗下菌苔。用移液管将洗液移至另一无菌试管中,用涡旋混合器振荡20 s,使菌体悬浮均匀。初步制成的菌悬液,先用比浊测定法粗测其含菌浓度,然后用磷酸盐缓冲液稀释至1×1011～5×1011cfu/L之间。悬液可保存于4℃冰箱备用,当天使用不得过夜。菌悬液在使用时,应先进行活菌培养计数。

1.2.2 消毒液的配置 取0.1 mL洗必泰、0.1 mL新洁尔灭和0.1 mL洗必泰+0.1 mL新洁尔灭,分别加入内装100 mL标准硬水的三角瓶中,混匀,即得0.1%洗必泰、0.1%新洁尔灭以及0.1%洗必泰+0.1%新洁尔灭复合消毒液。

1.2.3 中和剂的考察试验 设平行8组试验,以S.aureusATCC 6538为试验菌,按悬液定量杀菌试验程序进行[4]。a：消毒液+菌悬液,b：(消毒液+菌悬液)+中和剂,c：中和剂+菌悬液,d：(消毒液+中和剂)+菌悬液,e：磷酸盐缓冲液+菌悬液(正常菌对照),f：磷酸盐缓冲液,g：中和剂,h：培养基。中和剂及其浓度的判定标准：a组不长菌或仅有极少数菌落生长;b组有菌落生长,较a组为多,但较c、d、e组为少;c、d、e组菌落数分别在1×108～5×109cfu/L之间,且组间菌落数误差率不应超过15%;f、g、h组无菌生长。由此可判定所选中和剂及其浓度适宜。

1.2.4 悬液定量杀菌试验 试验时,先将内装5 mL消毒液的试管置于20℃水浴中5 min,再将0.1 mL菌悬液加入其中,混匀,作用至规定时间。取0.5 mL菌药混和液,移入4.5 mL中和剂溶液的试管中,混匀,中和作用10 min。取0.1 mL涂平板,置恒温培养箱内培养,活菌计数。以内装5 mL标准硬水的试管同步操作所得活菌数为基准,计算杀菌率。

1.2.5 评价指标 协同系数(T/E)=各因子单独作用时微生物存活百分率之乘积/多因子共同作用实测微生物存活百分率(其中,存活率为0时,按0.000 1%计算)。T/E值为判断复合增效作用强弱的标准。T/E值小于1为拮抗作用,等于1为相加作用,大于1为增效作用,其值越大,增效作用越强[5]。

1.2.6 模拟现场试验 选择木质桌面,在桌面上划定5 cm×5 cm范围的3个不同区域,以涂抹法污染E.coli8099悬液(菌数为1×107cfu/L),干燥后用棉拭沾采样液涂抹采样作消毒前对照;然后分别将0.1%洗必泰、0.1%新洁尔灭以及0.1%洗必泰+0.1%新洁尔灭复合消毒剂均匀喷涂在各自区域,作用10 min,以同样方法进行消毒后采样;对消毒前后采样液进行活菌计数,观察杀菌效果。

2 结 果

2.1 中和剂的考察试验

经检测,用质量浓度为0.5 g/L的硫代硫酸钠可分别有效中和0.1%洗必泰、0.1%新洁尔灭以及0.1%洗必泰+0.1%新洁尔灭复合消毒剂的杀菌作用,中和剂及中和产物对受试菌及培养基无影响(见表1)。

表1 消毒剂的中和剂试验Table 1 The result of neutralizer test for the disinfectants

2.2 复合消毒剂的协同杀菌作用考察

2.2.1 对金黄色葡萄球菌的协同杀菌作用 试验结果表明：洗必泰与新洁尔灭复合消毒剂对S.aureusATCC 6538的协同杀菌能力较洗必泰和新洁尔灭单独作用时强(见表2)。经计算,复合消毒剂作用2 min时,T/E值为784.86,起到了显著的增效作用。

表2 洗必泰、新洁尔灭及其复合消毒剂对金黄色葡萄球菌的杀灭效果Table 2 Efficacy of chlorhexidine,bromogeramine and complex disinfectant in killing S.aureus ATCC 6538

2.2.2 对大肠埃希菌的协同杀菌作用 试验结果表明：洗必泰与新洁尔灭复合消毒剂对E.coli 8099的协同杀菌能力较洗必泰和新洁尔灭单独作用时强(见表3)。经计算,复合消毒剂作用2 min时,T/E值为12.39,起到了显著的增效作用。

表3 洗必泰、新洁尔灭及其复合消毒剂对大肠埃希菌的杀灭效果Table 3 Efficacy of chlorhexidine,bromogeramine and complex disinfectant in killing E.coli8099

2.2.3 对白色念珠菌的协同杀菌作用 试验结果表明：洗必泰与新洁尔灭复合消毒剂对C.albicansATCC 10231的协同杀菌能力较洗必泰和新洁尔灭单独作用时强(见表4)。经计算,复合消毒剂作用2 min时,T/E值为2 422.16,起到了显著的增效作用。

2.3 模拟现场试验

用0.1%洗必泰、0.1%新洁尔灭以及0.1%洗必泰+0.1%新洁尔灭复合消毒剂进行模拟现场试验。试验结果表明：洗必泰、新洁尔灭及其复合消毒剂对E.coli8099悬液作用10 min,杀菌率分别为98.73%、96.12%和100%。说明该复合消毒剂具有明显地协同杀菌优势,为生产生活中的实际应用提供了技术支持。

表4 洗必泰、新洁尔灭及其复合消毒剂对白色念珠菌的杀灭效果Table 4 Efficacy of chlorhexidine,bromogeramine and complex disinfectant in killingC.albicansATCC 10231

3 结 论

研究结果表明：0.1%洗必泰+0.1%新洁尔灭复合消毒剂协同作用可以克服单一消毒剂存在的不足,作用2 min,对S.aureusATCC 6538、E.coli8099和C.albicansATCC 10231均起到了显著地协同杀菌效果。通过对比0.1%洗必泰、0.1%新洁尔灭以及0.1%洗必泰+0.1%新洁尔灭复合消毒剂模拟现场试验结果,证明该复合消毒剂具有明显地协同杀菌优势。

[1] 张冰,秦秀慧,李军,等.戊二醛和季铵盐复合消毒剂杀菌效果的试验[J].动物医学进展,2002,23(3)：70-71.

[2] 姚四新,刘保国.洗必泰配制方法的改进及其消毒效果[J].中国兽医杂志,2003,39(8)：46-47.

[3] 雒晓芳,董开忠,王冬梅,等.新洁尔灭对三种细菌的抑菌效果研究[J].西北民族大学学报,2009,30(1)：64-66.

[4] 卫生部卫生法制与监督司.消毒技术规范[S].北京,中华人民共和国卫生部,2008：9-200.

[5] 聂绍发,朱贵宝,林天晖,等.新洁尔灭与戊二醛协同杀菌作用的实验研究[J].同济医科大学学报,2001,30(1)：50-52.