刘卫梅　刘建民　封　琳　付　刚

【摘要】 目的 检测bcl-2和ki-67在结肠癌及癌前病变中的表达情况，并探讨其临床意义。方法 采用免疫组化方法检测56例结肠癌，38例结肠腺癌，20例正常结肠粘膜，分别进行bcl-2和ki-67蛋白的检测。结果 bcl-2阳性表达率在腺癌与腺瘤中基本相同，阳性表达强度腺癌明显高于腺瘤(P<0．01)，腺瘤和腺癌的阳性表达强度及表达率与正常大肠结膜相比差异有显著性(P<0．01)。ki-67在腺癌中的表达强度及表达率明显高于腺瘤(P<0．01)，有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P<0．01)。结论 bcl-2在结肠组织的恶性转化中起着重要作用；ki-67的阳性表达及表达强度对诊断腺癌和监测腺瘤癌变中有重要意义。

【关键词】结肠癌；癌前病变；bcl-2蛋白；ki-67蛋白

お

The expression of bcl-2 protein and ki-67 protein in colon cancer and precancerous lesions and Its chinical significance

LIU Wei-mei,LIU Jian-min,FENG Lin,et al.Department of Pathology,The Second Jiaozuo Peoples Hospital,Henan 454100,China

【Abstract】 Objective Detecting the bcl-2 and ki-67 in the expression of colon cancer and precancerous lesions and and discussing its clinical significance.Methods Testing 56 example colon cancers, 38 example colon adenocarcinoma, 20 example normal colon mucous membrane with immunohistochemistry, and testing bcl-2 and the ki-67 protein separately.Results The rate of bcl-2 positive expression in adenoma and adenocarcinoma is basically the same, the intensity of positive expression of adenocarcinoma is significantly higher than adenomas(P<0．01), Compared to the positive expression strength and expression rate of conjunctiva,there are significant difference on adenoma and adenocarcinoma(P<0．01).ki-67 in adenocarcinoma's expression intensity and expression rate is significantly higher than the rate of adenoma(P<0．01), the patients with lymph node metastasis are significantly higher than those non-lymph node metastasis(P<0．01).Conclusion bcl-2 play an important role in m alignant transformation of the colon organization; the ki-67 positive expression and the expression intensity has the important meaning to diagnoses in the adenocarcinoma and the monitor adenoma cancer.

【Key words】Colon Cancer;Precancerous lesions;bcl-2 protein；ki-67 protein

结肠癌是消化道常见的恶性肿瘤，发病率有逐年增高的趋势，严重危害人类的健康。结肠癌在不同国家和地区发病率相差悬殊。一般而言，西北欧及北美国家发病率较高，而亚洲、南美洲和非洲国家则较低。我国结肠癌平均死亡年龄为60．08岁，其中男59．29岁，女61．05岁，死亡性别比为1．35，男高于女。结肠腺瘤是常见的癌前病变，是发展为癌的最危险因素。肿瘤的发生发展与肿瘤细胞的凋亡密切相关^[1]，细胞凋亡是由基因调控的细胞程序性死亡^[2]。bcl-2是重要的细胞凋亡调节分子，在肿瘤的发生发展中起着重要作用。ki-67参与细胞周期的调节，从理论上讲，与肿瘤发生也可能有密切的关系。本组试验采用免疫组话的方法检测bcl-2和ki-67在结肠癌及癌前病变中的表达及临床意义。

1 材料与方法

1．1 一般资料 结肠癌手术标本56例，内镜下电切腺瘤标本38例均来自本院病理科，所有病例均经过病理组织学证明。对56例结肠癌进行分级，高分化14例，中分化24例，低分化18例，有淋巴结转移的34例，无淋巴结转移的22例。另选取20例正常结肠粘膜作对照。

1．2 免疫组化染色 标本经10%甲醛固定，石蜡包埋切片，切取4 μm厚切片。bcl-2和ki-67抗体和免疫组化试剂盒均购于武汉博士德公司，采用免疫组化SABC法，基本步骤严格按试剂盒说明书进行。切片脱蜡入水；3%H2O₂处理5～10 min；正常山羊血清孵育20 min；加一抗1～2 h；加生物素标记二抗，加SABC(链霉素合素-生物素-过氧化物酶复合物)20 min，DAB显色，苏木精复染，中性树胶封固，阳性对照用一直的阳性片作对照，阴性对照用PBS代一抗。

1．3 结果判断 bcl-2以细胞膜、细胞浆显示棕黄色或棕褐色颗粒为阳性，ki-67阳性表现为细胞核内出现棕黄色颗粒。选取5个不同高倍视野（×100），每个视野计数100个肿瘤细胞，取其平均值为细胞的阳性率，参照文献^[3-5]，阳性细胞数≥50%为强阳性(+++)，30%～49%为阳性(++)，10%～29%为弱阳性(+)，<10%为阴性。

1．4 统计学方法 数据分析采用确切概率法(Fishers Exact Test或χ²检验)，应用SPSS 11．5软件包完成，以P<0．05差异具有统计学意义。

2 结果

2．1 bcl-2胞膜/胞浆表达 56例结肠腺癌中弱阳性(+)3例，阳性(++)7例，强阳性(+++)33例，表达率为76．79%；38例结肠腺瘤中弱阳性(+)12例，阳性(++)14例，强阳性(+++)2例，表达率为73．68%；20例正常黏膜中弱阳性(+)1例，阳性(++)2例，表达率为15%。腺癌与腺瘤的阳性表达率基本相同，腺癌的阳性表达强度明显高于腺瘤(P<0．01)。二者的阳性表达率及表达强度与正常结肠粘膜相比差异有统计学意义(P<0．01)。

2．2 ki-67细胞核表达 56例结肠腺癌中弱阳性(+)2例，阳性(++)18例，强阳性(+++)34例，表达率为96．43%；38例结肠腺瘤中弱阳性(+)11例，阳性(++)4例，强阳性(+++)3例，表达率为47．37%；20例正常黏膜中无1例表达。结肠腺癌的阳性表达率及表达强度相助高于腺瘤(P<0．01)。

2．3 cl-2和ki-67蛋白阳性与结肠癌组织分级和淋巴结转移的关系(表1)。

3 讨论

ki-67为细胞增殖的一种标记。在细胞凋亡中S、G2、M期均有表达，它是一种增殖抗原，主要定位于细胞核，与细胞周期密切相连，在有丝分裂中起着维持DNA有规则结构的重要作用。

ki-67参与细胞周期的调控网络，理论上，可作为诊断和预测肿瘤对治疗的敏感度及其结局等方面的标志物，在肿瘤的分级、增生程度、预后的预测中均有一定的意义。

本组研究显示：结肠腺癌中的阳性表达强度及表达率均高于腺瘤(P<0．01)。ki-67的阳性表达随着腺癌的组织学降低而增高，但差异无统计学意义(P>0．05)，有淋巴结转移和无淋巴结转移的表达情况差异无统计学意义(P>0．05)。结果表明，ki-67阳性表达及表达强度对诊断腺癌和监视腺瘤癌变有重大意义，对结肠癌早期发现有较高价值，而与结肠腺癌的分化程度和淋巴结转移无明显相关性。国外有学者研究指出：癌细胞分化程度越低，伴有淋巴结转移者ki-67表达越强^[6]。本结果似有不同，有待进一步研究。

bcl-2是从滤泡性淋巴瘤中分离处的一种癌基因，也是细胞凋亡抑制因子，具有抑制细胞凋亡、延长细胞寿命的功能。bcl-2作为抑制凋亡的基因，其过表达能延长细胞寿命，使已有DNA受损的细胞生存期延长，以致增加其他基因突变的机会，从而导致肿瘤的发生^[7]。本组研究中，正常结肠粘膜、腺瘤和腺癌中均有bcl-2表达，腺瘤与腺癌的阳性表达率亦无显著性，腺癌的表达强度则明显高于腺瘤(P<0．01)，腺瘤及腺癌的阳性表达强度和表达率与正常结肠粘膜相比，差异有统计学意义(P<0．01)。表明bcl-2的阳性表达强度和表达率随着结肠组织的恶性转化呈上升趋势，尤以表达强度为甚。提示bcl-2蛋白表达在结肠组织恶性转化中起重要作用。同时还显示bcl-2的阳性表达与结肠癌的分化程度和淋巴结转移无关(P>0．05)。

参 考 文 献

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